高中生物選修三知識(shí)點(diǎn)

1、生物選修三 專(zhuān)題一 基因工程基因工程的概念 基因工程是指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，通過(guò)體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類(lèi)型和生物產(chǎn)品?；蚬こ淌窃贒NA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，又叫做DNA重組技術(shù)。 （一）基因工程的基本工具 1.“分子手術(shù)刀”限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶） （1）來(lái)源：主要是從原核生物中分離純化出來(lái)的。 （2）功能：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi)，因此具有專(zhuān)一性。 （3）結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)

2、生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。 2.“分子縫合針”DNA連接酶 (1) 兩種DNA連接酶（E·coliDNA連接酶和T4-DNA連接酶）的比較： 相同點(diǎn)：都縫合磷酸二酯鍵。 區(qū)別：E·coliDNA連接酶來(lái)源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來(lái)； 而T4DNA連接酶來(lái)源于T4噬菌體，能縫合兩種末端，但連接平末端的之間的效率較低。 （2）與DNA聚合酶作用的異同:DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵。 DNA連接酶是連

3、接兩個(gè)DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵。 3.“分子運(yùn)輸車(chē)”載體 （1）載體具備的條件：能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。 具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn)，供外源DNA片段插入。 具有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。 （2）最常用的載體是質(zhì)粒,它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外，并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。 （3）其它載體： 入噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒  原核基因注意：起始密碼：位于mRNA上，開(kāi)始蛋白質(zhì)的合成； 終止密碼：位于mRNA上，終止蛋白質(zhì)的合成。真核基因(二)基因工程的基本

4、操作程序 第一步：目的基因的獲取 1.目的基因是指： 編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 。 2.原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。 3.PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 （1）原理：DNA雙鏈復(fù)制 （2）過(guò)程：一、加熱至9095DNA解鏈；二、冷卻到5560，引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈；三、加熱至7075，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成。 第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建 （基因工程的核心）1. 目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，

5、使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。 2.組成：目的基因啟動(dòng)子終止子標(biāo)記基因 （1）啟動(dòng)子：是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質(zhì)。 （2）終止子：也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段 ，位于基因的尾端。 （3）標(biāo)記基因的作用：是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)。常用的標(biāo)記基因是抗生素基因。 第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1. 轉(zhuǎn)化的概念：是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程。 2.常用的轉(zhuǎn)

6、化方法： 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞：采用最多的方法是 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其次還有 基因槍法和 花粉管通道法等。農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法原理： 農(nóng)桿菌能感染雙子葉植物和裸子植物.  農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體DNA上。因此，若將目的基因插入到T-DNA中，就可隨T-DNA整合到植物細(xì)胞的染色體DNA中。 將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞：最常用的方法是 顯微注射技術(shù)。此方法的受體細(xì)胞多是 受精卵。將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞：原核生物作為受體細(xì)胞的原因是 繁殖快、多為單細(xì)胞

7、、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少 ，最常用的原核細(xì)胞是 大腸桿菌 ，其轉(zhuǎn)化方法是：先用 Ca2+  處理細(xì)胞，使其成為  感受態(tài)細(xì)胞 ，再將 重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子，完成轉(zhuǎn)化過(guò)程。 3. 重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后，篩選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá)。 第四步：目的基因的檢測(cè)和表達(dá) 1. 首先要檢測(cè) 轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子雜交技術(shù)

8、。 2.其次還要檢測(cè) 目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，方法是采用 用標(biāo)記的目的基因作探針與 mRNA雜交（也叫DNA-RNA分子雜交）。 3. 最后檢測(cè) 目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取 蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的 抗體進(jìn)行抗原抗體雜交。 4.有時(shí)還需進(jìn)行 個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。如 轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)植物是否出現(xiàn)抗蟲(chóng)性狀。 注意： 不同生物的DNA能夠連接在一起的原因：基因結(jié)構(gòu)相同。 目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)出相應(yīng)蛋白質(zhì)的原因：共用一套遺傳密碼子。（三）基因

9、工程的應(yīng)用 1.植物基因工程：抗蟲(chóng)、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物，利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)。2.動(dòng)物基因工程：提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物。 3.基因治療：把正常的外源基因?qū)氩∪梭w內(nèi)，使該基因表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮作用。 （四）蛋白質(zhì)工程的概念 蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿(mǎn)足人類(lèi)的生產(chǎn)和生活的需求。（基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)） 專(zhuān)題2 細(xì)胞工程 1、 植物細(xì)胞工程1.理論基礎(chǔ)（原理）：細(xì)胞全能性 細(xì)胞具全能性

10、的原因：細(xì)胞中含有該物種的全部遺傳信息（或基因）。 全能性表達(dá)的難易程度：受精卵生殖細(xì)胞體細(xì)胞；植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞；未分化或分化程度低的細(xì)胞分化程度高的細(xì)胞；細(xì)胞的分化程度不斷提高，全能性逐漸減小。 2. 植物組織培養(yǎng)技術(shù)（1）過(guò)程：離體的植物器官、組織或細(xì)胞（外植體） （脫分化）愈傷組織 (再分化)胚狀體或叢芽試管苗 植物體 、愈傷組織的特點(diǎn)：其細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)則 ，是一種高度液泡化的呈無(wú)定形狀態(tài)的具分生能力的薄壁細(xì)胞 、培養(yǎng)基中的糖為蔗糖:一能作為碳源供能；二能維持較穩(wěn)定的滲透壓。 、當(dāng)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分

11、裂素比例不同時(shí)，產(chǎn)生的效果不同。當(dāng)生長(zhǎng)素含量高于細(xì)胞分裂素時(shí)，誘導(dǎo)脫分化和根的形成；當(dāng)生長(zhǎng)素含量低于細(xì)胞發(fā)裂素時(shí)，誘導(dǎo)再分化和芽的形成； 當(dāng)二者比例適中時(shí)，愈傷組織只分裂不分化。 、誘導(dǎo)外植體脫分化時(shí)要避光；誘導(dǎo)再分化時(shí)給予光照。 （2）用途：微型繁殖、作物脫毒（選用分生區(qū)附近的細(xì)胞作為外植體）、制造人工種子（人工種皮起保護(hù)作用，人工胚乳提供營(yíng)養(yǎng)、植物激素類(lèi)似物等）、單倍體育種（用的是生殖細(xì)胞，生殖方式為有性生殖）、細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)（只需培養(yǎng)到愈傷組織即可）。 （3）地位：是培育轉(zhuǎn)基因植物、植物體細(xì)胞雜交培育植物新品種的最后一道工序。 3.

12、 植物體細(xì)胞雜交技術(shù) 4. （1）過(guò)程：（2）去壁方法：酶解法（用纖維素酶和果膠酶）。 （3）原生質(zhì)體：細(xì)胞核+細(xì)胞質(zhì)+細(xì)胞膜。  原生質(zhì)層：液泡膜+細(xì)胞膜+兩層膜之間的細(xì)胞質(zhì)。 （4） 由于融合是隨機(jī)融合，因此要進(jìn)行選擇?？紤]兩個(gè)原生質(zhì)體間的融合，有三種融合的原生質(zhì)體。 （5） 原生質(zhì)體融合成功的標(biāo)志：再生出細(xì)胞壁（有高爾基體和線(xiàn)粒體參與）。 （6）雜種細(xì)胞的基因型，染色體組數(shù)，染色體數(shù)目皆為親代細(xì)胞的之和。 （7）誘導(dǎo)融合的方法：物理法包括離心、振動(dòng)、電刺激等?；瘜W(xué)法一般是用聚乙二醇（PEG）作為誘導(dǎo)劑。 （8

13、）原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性和細(xì)胞的全能性。 （9）缺點(diǎn)：目前還不能讓雜種植物按意愿表現(xiàn)出所需要的全部性狀。 （10）變異類(lèi)型：染色體數(shù)目的變異。 （11）意義：克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。2、 動(dòng)物細(xì)胞工程1. 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) （1）原理：細(xì)胞增殖。 （2）流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）剪碎分散成單個(gè)細(xì)胞（用胰蛋白酶或膠原蛋白酶）制成細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁成單層細(xì)胞增殖鋪滿(mǎn)瓶壁接觸抑制用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分瓶繼續(xù)傳代培養(yǎng)傳代1050代（遺傳物質(zhì)正常）大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)存活（此時(shí)遺傳物質(zhì)可能

14、會(huì)改變）繼續(xù)傳代其中少數(shù)細(xì)胞發(fā)生突變，獲得不死性。 注意：、由于把細(xì)胞粘連在一起主要是細(xì)胞之間的蛋白質(zhì)，所以用胰蛋白酶或膠原蛋白酶消化掉細(xì)胞間的蛋白質(zhì)，可把細(xì)胞分散開(kāi)來(lái)。 、傳代中的“代”與細(xì)胞增殖代數(shù)中的“代”不同：傳代中的一代指把細(xì)胞放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)直到再分瓶培養(yǎng)的這段時(shí)間。這段時(shí)間細(xì)胞會(huì)增殖多次。 、不死性細(xì)胞具有癌細(xì)胞的一些特性：黏著性降低；細(xì)胞膜表面的糖蛋白減少。  、目前使用的或冷凍保存的正常細(xì)胞通常為10代以?xún)?nèi)，以保持遺傳物質(zhì)的正常。 、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只是讓細(xì)胞進(jìn)行生長(zhǎng)和增殖，沒(méi)有脫分化的過(guò)程。 （3）條件

15、60;無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌處理。通常還要添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過(guò)程中的污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。 營(yíng)養(yǎng)：合成培養(yǎng)基成分：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等。通常（不是必須）需加入血清、血漿等天然成分。 溫度：適宜溫度：哺乳動(dòng)物多是36.50.5；pH：7.27.4（因?yàn)槲傅鞍酌傅淖钸mPH值約為2.0，所以分散細(xì)胞時(shí)不能用）。 氣體環(huán)境：95%空氣5%CO2。O2細(xì)胞代謝所必需，CO2維持培養(yǎng)液的pH。 2.動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物 （1）分為胚胎細(xì)胞核移植（較容

16、易）和體細(xì)胞核移植（較難）。 （2）選用去核卵(母)細(xì)胞的原因：卵(母)細(xì)胞比較大，容易操作；卵(母)細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)多，營(yíng)養(yǎng)豐富；細(xì)胞質(zhì)中含有使體細(xì)胞核表達(dá)出全能性所必需的因子。 （3）克隆：指共同的祖先經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖得到一大群分子，細(xì)胞或個(gè)體，它們與祖先具有相同的遺傳特性。如經(jīng)過(guò)植物組織培養(yǎng)得到一大群植株；經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增得到大量DNA片斷等等。 （4）原理：動(dòng)物細(xì)胞核的全能性。 （5）體細(xì)胞核移植的大致過(guò)程是：  注意： 操作時(shí)，將體細(xì)胞與去核的卵母細(xì)胞直接融合。用于核移植的供體細(xì)胞選傳代10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞。 得到的克隆

17、動(dòng)物與供體動(dòng)物性狀基本相同的原因：細(xì)胞質(zhì)中含有受體卵母細(xì)胞的線(xiàn)粒體DNA；性狀受環(huán)境的影響。 生殖方式為無(wú)性繁殖。 （4）體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用： 加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)良畜群繁育；  保護(hù)瀕危物種，增大存活數(shù)量； 轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物用于生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白：將目的基因?qū)牍w細(xì)胞中，再與去核卵母細(xì)胞融合，最終得到克隆動(dòng)物，再用于生產(chǎn)醫(yī)用蛋白；                &#

18、160;轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物作為異種移植的供體（如無(wú)免疫排斥反應(yīng)的轉(zhuǎn)基因克隆豬）； 用于組織器官的移植：取患者的健康細(xì)胞（作為供體細(xì)胞）進(jìn)行核移植，得到早期胚胎，再?gòu)闹刑崛〕雠咛ジ杉?xì)胞，誘導(dǎo)其分化形成所需器官。 （5）體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題： 克隆動(dòng)物存在著健康問(wèn)題、表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷等，還存在安全性問(wèn)題。 3.動(dòng)物細(xì)胞融合 （1）動(dòng)物細(xì)胞融合也稱(chēng)細(xì)胞雜交，融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱(chēng)為雜交細(xì)胞。 （2）誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法與植物原生質(zhì)體融合的方法類(lèi)似，常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、電刺激等，但動(dòng)物細(xì)胞融合還

19、常用滅活的病毒。 （3）動(dòng)物細(xì)胞融合的意義：克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和性，成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物生物新品種培育的重要手段。4.單克隆抗體 （1）抗體：一個(gè)B淋巴細(xì)胞（漿細(xì)胞）只分泌一種特異性抗體。從血清中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差。 （2）單克隆抗體的制備過(guò)程：教材P54頁(yè)第一段。 兩次篩選的目的： 第一次篩選出雜交瘤細(xì)胞：用選擇性培養(yǎng)基，里面的的試劑能抑制瘤細(xì)胞和瘤+瘤細(xì)胞的DNA復(fù)制，漿細(xì)胞和漿+漿細(xì)胞本身不能增殖，從而最終只有雜交瘤細(xì)胞能存活下來(lái)。 第二次篩選出產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞:進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體

20、檢測(cè)。對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行稀釋?zhuān)ＷC每份培養(yǎng)液中只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞，先讓其增殖以增加細(xì)胞數(shù)目，再加入特定抗原，若出現(xiàn)了抗體與特定抗原的結(jié)合（即檢測(cè)為陽(yáng)性），說(shuō)明該雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體是我們所需要的，從而把該雜交瘤細(xì)胞篩選出來(lái)。 （3）雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能大量繁殖，又能產(chǎn)生專(zhuān)一的抗體。 （4）單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。 （5）單克隆抗體的作用：  作為診斷試劑：準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異，并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，幫助醫(yī)生確定病原體。具準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。制成“生物導(dǎo)彈”：由單克隆抗體（能與癌細(xì)胞進(jìn)行特異性

21、結(jié)合），放射性同位素，化學(xué)藥物或細(xì)胞毒素組成；能將藥物定向帶到癌細(xì)胞的位臵，在原位殺死癌細(xì)胞，不損傷正常細(xì)胞，又減少了用藥劑量。 專(zhuān)題3  胚胎工程 （1） 體內(nèi)受精和早期胚胎發(fā)育 1、精子的發(fā)生 場(chǎng)所：睪丸的曲細(xì)精管（場(chǎng)所是唯一的） 時(shí)間：從初情期開(kāi)始，到生殖機(jī)能衰退 過(guò)程： 1）精原細(xì)胞多個(gè)初級(jí)精母細(xì)胞（通過(guò)數(shù)次有絲分裂）   2）1個(gè)初級(jí)精母細(xì)胞2個(gè)次級(jí)精母細(xì)胞4個(gè)精子細(xì)胞 3） 精子細(xì)胞精子（變形的五個(gè)方面：細(xì)胞核精子頭部的主要部分；高爾基體精子頭部的頂體；線(xiàn)粒體精子尾基部的線(xiàn)

22、粒體鞘；其他物質(zhì)原生質(zhì)滴，最后脫落。） 2、卵子的發(fā)生   場(chǎng)所：卵巢和輸卵管 時(shí)間：胎兒時(shí)期（完成了卵泡的形成和在卵巢內(nèi)的儲(chǔ)備）和初情期后。 過(guò)程：教材P63頁(yè)圖3-5。 補(bǔ)充： 、卵子的發(fā)生胎兒期已開(kāi)始，只是被抑制在減前期，是初級(jí)卵母細(xì)胞，并且被卵泡細(xì)胞包圍，形成卵泡，進(jìn)入初情期后繼續(xù)。 、減在排卵前后完成。有些動(dòng)物在排卵前完成，因此從卵巢中排出來(lái)的已是次級(jí)卵母細(xì)胞，如豬、綿羊、牛等；有些動(dòng)物在排卵后才完成，因此從卵巢中排出來(lái)的還是初級(jí)卵母細(xì)胞，如馬等。 、排卵：指卵子從卵巢中排到輸卵管中，

23、由教材P62圖3-4可知卵泡并沒(méi)有整個(gè)排出。 、排出后，在輸卵管中進(jìn)一步成熟，當(dāng)?shù)竭_(dá)減中期時(shí)才具有受精能力，若受精了才會(huì)進(jìn)一步完成減。 、卵子發(fā)生的場(chǎng)所不是唯一的，先在卵巢，后在輸卵管中。 2、  受精作用概念：精子和卵子結(jié)合成合子（受精卵）的過(guò)程。  受精場(chǎng)所：雌性動(dòng)物的輸卵管內(nèi) 過(guò)程：受精前的準(zhǔn)備階段1：精子獲能（獲得受精的能力）   受精前的準(zhǔn)備階段2：卵子的準(zhǔn)備  受精階段：a.精子穿越放射冠和透明帶：頂體反應(yīng)，透明帶反應(yīng) 頂體反應(yīng)：頂體膜與精子細(xì)胞膜在某些位點(diǎn)融合并

24、出現(xiàn)穿孔，頂體內(nèi)的酶釋放出來(lái)。教材P65圖3-7。 透明帶反應(yīng)：在精子觸及卵細(xì)胞膜的瞬間，產(chǎn)生了阻止后來(lái)精子進(jìn)入透明帶的生理反應(yīng)。這是防止多精入卵的第一道屏障。 b.進(jìn)入卵細(xì)胞膜：卵細(xì)胞膜反應(yīng)（防止多精入卵的第二道屏障）。 c. 雌雄原核形成（不能理解成卵子、精子原來(lái)的細(xì)胞核，是在原來(lái)核的基礎(chǔ)上形成的新核，原核膜已破裂）和配子結(jié)合 是否受精的標(biāo)志：在卵細(xì)胞膜和透明帶的間隙能觀察到兩個(gè)極體  受精完成標(biāo)志：雌雄原核融合 4、動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過(guò)程 （1）場(chǎng)所：先在輸卵管，后移至子宮內(nèi)膜中。 （2）卵裂期特點(diǎn)

25、：透明帶內(nèi)進(jìn)行，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)由受情卵自已供給，細(xì)胞有絲分裂，細(xì)胞數(shù)量不斷增加，DNA總量不斷增加，有機(jī)物總量減少，但胚胎的總體積并不增加，或略有減小。 （3）桑椹胚特點(diǎn)：胚胎細(xì)胞數(shù)目達(dá)到32個(gè)左右時(shí)，胚胎形成致密的細(xì)胞團(tuán)，形似桑椹。是全能細(xì)胞。 （4）囊 胚特點(diǎn)：細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)分化。聚集在胚胎一端個(gè)體較大的細(xì)胞稱(chēng)為內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，將來(lái)發(fā)育成胎兒的各種組織。中間的空腔稱(chēng)為囊胚腔。 （5）原腸胚特點(diǎn)：有了三胚層（外胚層、中胚層和內(nèi)胚層）的分化，具有原腸腔。 （2） 體外受精和早期胚胎培養(yǎng) (1)卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng) 超數(shù)排卵處理（主要方法）

26、：用促性腺激素處理，使其排出更多的卵子，然后，從輸卵管中沖取卵子，直接與獲能的精子在體外受精。 其他方法：從剛屠宰母畜的卵巢中采集卵母細(xì)胞或直接從活體動(dòng)物的卵巢中吸取卵母細(xì)胞。采集的卵母細(xì)胞，都要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)成熟后，才能與獲能的精子受精。 (2) 精子的采集和獲能：獲能方法有培養(yǎng)法（通過(guò)獲能培養(yǎng)液）、化學(xué)誘導(dǎo)法（通過(guò)肝素或鈣離子載體A23187） (3) 受精：獲能的精子和培養(yǎng)成熟的卵子在獲能溶液或?qū)Ｓ玫氖芫芤褐型瓿墒芫^(guò)程。(4)胚胎的早期培養(yǎng)：將受精卵移入發(fā)育培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)，以檢查受精狀況和受精卵的發(fā)育能力。培養(yǎng)液成分：兩鹽（無(wú)機(jī)鹽

27、和有機(jī)鹽）、兩素（維生素和激素）、兩酸（氨基酸和核苷酸），以及血清等物質(zhì)。當(dāng)胚胎發(fā)育到適宜的階段時(shí)，可將其取出向受體移植或冷凍保存。不同動(dòng)物胚胎移植的時(shí)間不同。(牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚階段才能進(jìn)行移植，小鼠、家兔等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可在更早的階段移植，人的體外受精胚胎可在4個(gè)細(xì)胞階段移植。) （3） 胚胎工程的應(yīng)用 1.胚胎移植 (1)胚胎移植是指將雌性動(dòng)物的早期胚胎，或者通過(guò)體外受精及其它方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其它雌性動(dòng)物的體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。其中提供胚胎的個(gè)體稱(chēng)為“供體”，接受胚胎的個(gè)體稱(chēng)為“受體”。（供體為優(yōu)良品種，作為受體

28、的雌性動(dòng)物應(yīng)為常見(jiàn)或存量大的品種。） 地位：如轉(zhuǎn)基因、核移植，或體外受精等任何一項(xiàng)胚胎工程技術(shù)所生產(chǎn)的胚胎，都必須經(jīng)過(guò)胚胎移植技術(shù)才能獲得后代，是胚胎工程的最后一道“工序”。 (2) 胚胎移植的意義：大大縮短了供體本身的繁殖周期，充分發(fā)揮雌性?xún)?yōu)良個(gè)體的繁殖能力。 (3)  生理學(xué)基礎(chǔ)：動(dòng)物發(fā)情排卵后，同種動(dòng)物的供、受體生殖器官的生理變化是相同的。這就為供體的胚胎移入受體提供了相同的生理環(huán)境。 早期胚胎在一定時(shí)間內(nèi)處于游離狀態(tài)。這就為胚胎的收集提供了可能。 受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。這為胚胎在受體的存活提供了

29、可能。 供體胚胎可與受體子宮建立正常的生理和組織聯(lián)系，但供體胚胎的遺傳特性在孕育過(guò)程中不受影響。 (4) 基本程序主要包括：教材P77 對(duì)供、受體的選擇和處理。選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體，有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體，供體和受體是同一物種。并用孕激素進(jìn)行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對(duì)供體母牛做超數(shù)排卵處理。 配種或人工授精。 對(duì)胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存。用特制的沖卵裝臵，把供體母牛子宮內(nèi)的胚胎沖洗出來(lái)(也叫沖卵)。對(duì)胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查，此時(shí)的胚胎應(yīng)發(fā)育到桑椹胚或囊胚階段。直接向受體移植或放入196的液氮中保存。 對(duì)胚胎進(jìn)行移植：手術(shù)法和非手術(shù)法。 移植后的檢查。對(duì)受體母牛進(jìn)行是否妊娠的檢查。2.胚胎分割 (1)概念：是指采用機(jī)械方法將早期胚胎切割2等份、4等份等，經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎的技術(shù)。 (2) 意義：來(lái)自同一胚胎的后代具有相同的遺傳物質(zhì)，屬于無(wú)性繁殖或克隆。 (3)材料：發(fā)育良好，形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚。（桑椹胚至囊胚的發(fā)育過(guò)程中，細(xì)胞開(kāi)始分化，但其全能性仍很高，也可用于胚胎