氯霉素類(lèi)藥殘留提取方法——液液萃取

1、氯霉素類(lèi)藥殘留提取方法液液萃取 1)液液萃取(liquid liquid extraction， lle) 動(dòng)物基質(zhì)中caps的檢測(cè)，其提取溶劑分為有機(jī)溶劑和水溶液兩類(lèi)。 a.有機(jī)溶劑提取 常用的有機(jī)溶劑有、和等，也可以舉行不同比例混合后提取。提取溶劑中常加入、等，除去樣品中水分的同時(shí)，鹽析蛋白質(zhì)，提高提取效率。乙酸乙酯既能有效提取caps，又能削減等水溶性雜質(zhì)被萃取到溶劑中，是采納最多的提取溶劑。 rodziewicz等建立了奶粉中cap的殘留分析辦法。用乙酸乙酯實(shí)行l(wèi)le辦法提取，脂肪用正己烷除去，lc-ms/ms測(cè)定。辦法回收率為90.2%96.3%，日內(nèi)rsd小于12%，日間rsd小于

2、15%；cca為0.09ug/kg，cc為011ug/kg、xia等用乙酸乙酯提取雞肝、豬肝中cap，除脂后，oasis hlb固相萃取柱凈化，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(uplc-ms/ms)檢測(cè)。辦法回收率為95.5%106.7%，rsd小于12.2%，辦法lod小于0.02ug/kg。chou等用乙酸乙酯提取豬肉、豬肝、豬腎、牛肉、牛肝、魚(yú)和雞肉中的tap和ff，正己烷除脂后，lc-ms/ms檢測(cè)。辦法回收率為72.5%97.6%，定量限(loq)均為1.0ng/g。蔣定國(guó)等用含有1%高氯酸的乙酸乙酯提取牛奶中的cap，提取液濃縮干后用0.5mol/l高氯酸溶液溶解，正己烷去除脂溶性雜質(zhì)，

3、高效液相色譜(hplc)測(cè)定。高氯酸可以很好的去除蛋白。辦法lod為11ug/kg，平均回收率為88.0%97.7%，rsd為5.3%6.4%。 wang等以建立了牛奶中cap的迅速分析辦法。用乙腈提取后，lc-ms/ms測(cè)定。辦法lod為0.05ug/kg，loq為0.2ug/kg；回收率在88.8%100.6%之間，rsd小于15%。tian采納乙腈提取牛奶中包括cap在內(nèi)的29種藥物，c18固相萃取柱凈化后，采納lc-ms/ms檢測(cè)。辦法回收率為71%107%，rsd小于13.7%；cap的loq為0.03ug/kg、lu等用乙腈提取雞蛋、牛奶、蜂蜜中的cap，固相萃取柱凈化后，lc-m

4、s/ms檢測(cè)。平均回收率在95.8%102.3%之間，日內(nèi)和日間rsd分離小于7.13%和8.89%。cronly等開(kāi)發(fā)了牛奶和蜂蜜中cap的檢測(cè)辦法。牛奶中加入naci后挺直用乙腈提取，蜂蜜先加水稀釋后，再用乙腈提取，提取液用正己烷除脂，lc-ms/ms測(cè)定。牛奶中的cca和cc分離為0.07ug/l和0.11ug/l，蜂蜜中分離為0.08g/kg和0.13g/kg。 vargas mamani等采納甲醇提取牛奶中的cap等藥物，經(jīng)固相萃取凈化后，hplc測(cè)定。辦法回收率和敏捷度均滿足殘留分析要求。 van de riet等采納丙酮提取水產(chǎn)品中的cap、tap、ff和ffa，提取液再用二氯甲

5、烷反萃取，蒸干后，用稀酸溶解，正己烷除脂，液相色譜-質(zhì)譜(lc-ms)測(cè)定。辦法回收率在71%107%之間，rsd小于10%；cap和ff的cca為0.1ng/g，tap為0.3ng/g，ffa為1.0ng/g。 大部分caps是中等極性化合物，在乙酸乙酯、乙腈等有機(jī)溶劑中均有較高的溶解度，但ff代謝物ffa分子中含有堿性的氨基，常在堿性條件下提取。xie等建立了雞蛋中tap、ff、ffa的hplc分析辦法。樣品用乙酸乙酯-乙腈-氨水(49+49+2，v/v)提取，正己烷除脂后，hplc-熒光檢測(cè)器(fld)測(cè)定。辦法lod為1.5ugkg(tap、ff)，0.5ug/kg(ffa)，loq為

6、5ug/kg(tap、ff)，2ug/kg(ffa)：回收率為86.4%93.8% (tap)、87.4%92.3%(ff)、89.0%95.2%(ffa)，日內(nèi)和日間rsd分離小于6.7%和10.8%。zhang等用2%氨水-乙酸乙酯提取雞肉中cap、tap、ff、ffa，蒸干提取液后，5%乙酸水溶液復(fù)溶，正己烷脫脂，mcx固相萃取柱凈化，lc-ms/ms檢測(cè)。辦法lod：cap為0.1ug/kg，tap、ffa為1ug/kg，ff為0.2ug/kg，回收率在95.1%107.3%之間，日內(nèi)和日間rsd分離小于10.9%和10.6%。彭濤等用lc-ms/ms同時(shí)測(cè)定蝦中的cap、tap和ff

7、。均質(zhì)后的樣品采納堿化乙酸乙酯提取，濃縮提取物經(jīng)去除脂肪、c18固相萃取柱凈化后，采納lc-ms/ms檢測(cè)。辦法lod為：cap和ffo.01ng/g，tap 0.05ng/g；在添加濃度0.12.0ng/g范圍內(nèi)，cap回收率為73.9%96.0%，tap為78.6%99.5%，ff為74.9%103.7%，rsd均小于6.4%。 b.水溶液提取 純水可以用來(lái)提取動(dòng)物基質(zhì)中的caps。aerts等報(bào)道了多個(gè)試驗(yàn)室檢測(cè)cap的協(xié)同討論。動(dòng)物肌肉經(jīng)勻漿后加適量水提取后，再過(guò)c8或c18固相萃取柱凈化，hplc-紫外檢測(cè)器(uvd)在278nm檢測(cè)。辦法lod為1.5ug/kg；在添加濃度為10u

8、g/kg時(shí)，不同試驗(yàn)室的平均回收率為55.1%，變異系數(shù)(cv)為18.0%，滿足不同試驗(yàn)室分析cap殘留的要求。但該法回收率不高，可能是水不適合于提取組織里的caps藥物。fernandez-torres等在水中采納酶探針結(jié)合超聲波輔助提取(uae)魚(yú)肉和蚌中包括cap、tap在內(nèi)的11種抗生素及其5種代謝物。對(duì)影響提取效率的因素，如酶種類(lèi)、提取溶劑的種類(lèi)、超聲波的強(qiáng)度與時(shí)光等舉行了優(yōu)化，當(dāng)用5ml水提取，超生5min時(shí)，效果最佳。提取物用二氯甲烷凈化后，hplc測(cè)定。辦法技術(shù)指標(biāo)滿足殘留分析要求。該討論小組又開(kāi)發(fā)了酶探針結(jié)合微波輔助提取(mae)魚(yú)肉和蚌中包括cap、tap在內(nèi)的11種抗生

9、素及其5種代謝物的辦法。當(dāng)用5ml水，50w微波提取5min時(shí)，效果最佳。提取物用二氯甲烷凈化后，lc-ms測(cè)定。辦法回收率在70%100%之間。 也有采納磷酸、磷酸鹽緩沖液、醋酸緩沖液、mcllvaine緩沖液等來(lái)提取caps。rocha siqueira等用磷酸提取雞蛋、蝦、魚(yú)、雞、豬、牛肉中的cap，再用乙酸乙酯反萃取，lc-ms/ms檢測(cè)。辦法回收率在85%120%之間，rsd小于20%，loq為0.1ug/kg。santos等用ph 6.00.1 mol/l的磷酸緩沖液提取虹鱒魚(yú)中的cap，離心后，用正已烷除脂，乙酸乙酯反萃取，蒸干提取液后，用水復(fù)溶，c18柱凈化，lc-ms/ms測(cè)

10、定，辦法cca為0.267ug/kg。 ramos等用ph7.0的磷酸緩沖液提取蝦組織中的cap，c18固相萃取柱凈化，lc-ms測(cè)定。辦法回收率為101%110%，日間cv小于7.1%；cca為0.02ng/g，loq為0.2ng/g。謝孟峽等對(duì)雞肉、豬肉、豬肝、鴨肝等動(dòng)物組織樣品中的cap殘留檢測(cè)辦法舉行了討論。用乙酸乙酯和磷酸鹽緩沖溶液提取，用硅膠和c18固相萃取柱凈化，經(jīng)衍生化后用氣相色譜-質(zhì)譜(gc-ms)測(cè)定。該辦法的加標(biāo)回收率在80%100%之間，rsd小于20%，辦法lod為0.1ug/kg verzegnassi等采納醋酸緩沖液稀釋蜂蜜樣品，經(jīng)固相萃取凈化后，lc-ms/ms測(cè)定。在0.1ug/kg、0.2ug/kg、0.5ug/kg添加水平，cap的精確度優(yōu)于15%，重復(fù)性和重臨性分離為12%和18%；cca和cc均優(yōu)于0.1ug/kg。wang等用 mellvaine緩沖液-甲醇(8+2，v/v)提取牛奶中的cap、tap等10種抗生素，固相萃取柱凈化后，uplc測(cè)定。在0.1ug/g、0.5ug/g、2.5ug/g添加水平，辦法回收率分離為52.1%68.0%、70.1%81.0%和76.2%101.0%，l