健脾補血片中阿魏酸的質量濃度測定

1、健脾補血片中阿魏酸的質量濃度測定    作者：胡森科，于燕，張敬華，苗江麗    【關鍵詞】 阿魏酸；健脾補血片；HPLC 摘要：目的 建立健脾補血片中阿魏酸的高效液相色譜(HPLC)測定方法。方法 采用HPLC法。色譜柱Lichrospher C18(4.6mm×250mm，5m)，C18保護柱；流動相：乙腈0.378mol/L冰醋酸水溶液(3070)；檢測波長321nm；流速0.8mL/min；柱溫：室溫；進樣量10L。結果 阿魏酸質量濃度在1.0-10.0mg/L范圍內，與峰面積呈良好的線性關系(r

2、=0.9996)，平均回收率為99.8%，RSD為0.26%。結論 HPLC可用于健脾補血片中阿魏酸的質量濃度測定。 關鍵詞：阿魏酸；健脾補血片；HPLC Determination of ferulic acid in Jianpibuxue tablets by HPLC ABSTRACT: Objective    To establish a determination method of ferulic acid in Jianpibuxue tablets. Methods HPLC was used with Lichrospher C18

3、(4.6mm×250mm, 5m) as the column. The mobile phase was a mixture of acetonitrile0.378mol/L acetum (3070) and in a flow rate of 0.8mL/min; The detective wavelength was 321nm; Column temperature was room temperature and the injection quantity was 10L. Results Ferulic acid in samples was well separ

4、ated. The linear range was 1.0-10.0mg/L(r=0.9996). The average recovery was 99.8% and RSD was 0.26 %(n=6). Conclusion This method can be used for quality control of ferulic acid in Jianpibuxue tablets. KEY WORDS: ferulic acid; jianpibuxue tablets; HPLC 健脾補血片處方由黨參、茯苓、皂礬、神曲茶、黑豆、白術、陳皮、甘草等組成。具有補血、益氣、健脾和

5、胃、消積之功能。用于脾虛血少所致的面黃肌瘦，食少體倦等癥以及營養(yǎng)性、缺血性貧血及繼發(fā)性、失血性貧血。為了有效地控制產品質量，對制劑中的主要成分阿魏酸采用高效液相色譜(HPLC)法進行測定。 1 材料與方法 1.1 儀器與試藥 日本島津LC10AT高效液相色譜輸液泵，SPD10AVP紫外可見檢測儀，島津7725i進樣器，ANASTAR色譜工作站，DL360超聲波清洗器(浙江象山縣石浦海天電子儀器廠，功率240W，頻率35kHz)，乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其他試劑為分析純。阿魏酸對照品由中國藥品生物制品鑒定所提供，批號0773-9910。健脾補血片由西安阿房宮制藥有限公司提供，批號2003050

6、1-20030503。 1.2 對照品溶液的配制 精密稱取阿魏酸對照品，用甲醇溶解并制成每mL含阿魏酸0.1mg的對照品溶液，備用。 1.3 供試品溶液的制備 取本品20片，研細，取2.5g，精密稱定，置100mL錐形瓶中，加甲醇20mL，超聲提取30min，濾過，濾渣用甲醇洗滌2次，每次10mL，合并濾液，置70水浴蒸干。殘渣加0.2mol/L碳酸鈉溶液10mL溶解，轉入60mL分液漏斗中，用乙醚萃取2次，每次25mL，棄去乙醚相，水相用鹽酸(5mol/L)調pH至1-2，再用乙醚萃取3次，每次20mL，合并乙醚相，水浴蒸干。殘渣用甲醇溶解并定容于10mL容量瓶中，離心，上清液作為供試液。

7、1.4 陰性對照溶液的制備 按處方取除黨參外的其他幾味中藥，依處方工藝制成片，再按上述供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。 2 結果與討論 2.1 色譜條件 色譜柱Lichrospher C18(4.6mm×250mm，5m)，C18保護柱；流動相：乙腈0.378mol/L冰醋酸水溶液(3070)，使用前經0.45m微孔濾膜過濾并脫氣；檢測波長321nm；流速0.8mL/min；柱溫：室溫；進樣量10L。 在此條件下，對照品、供試品及陰性樣品溶液的色譜圖如圖1所示。 圖1 健脾補血片中阿魏酸的HPLC圖譜（略） Fig.1 HPLC graphs of ferulic acid i

8、n jianpibuxue tablets a: standard; b: sample; c: blank; 1: ferulic acid 2.2 線性關系考察 用甲醇稀釋阿魏酸的對照品溶液，制成每1mL含1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0g的溶液，進樣，記錄峰面積，以峰面積A對對照品溶液濃度C作圖，進行回歸分析，得回歸方程為：C=1.314×10-5A 0.064, r=0.9996。說明，在此色譜條件下，阿魏酸質量濃度在1.0-10.0mg/L范圍內，與峰面積呈良好的線性關系。 2.3 供試品溶液制備方法的考察 采用正交實驗法對樣品浸提體積、超聲時間和乙醚提取次

9、數等影響因素進行了考察。 2.3.1 因素水平 A浸提體積(mL)：A1=10，A2=20，A3=30；B超聲時間(min)：B1=10，B2=30，B3=60；C乙醚提取次數：C1=1，C2=2，C3=3。    2.3.2 實驗方法及結果 同批號樣品，研細，精密稱取2.5g于100mL錐形瓶中，分別按L9(34)正交表    (表1)進行試驗，制得供試品并測定，用統(tǒng)計軟件SPSS11.0進行分析處理，結果見表2-4。 表1 阿魏酸提取工藝正交試驗L9(34)結果（略） Table 1 The results o

10、f orthogonal test of extraction technology of ferulic acid 表2 阿魏酸提取工藝多因素方差分析（略） Table 2 Tests of betweensubjects effects for extraction technology of ferulic acid 表3 阿魏酸不同超聲提取時間的方差分析表（略） Table 3 Multiple comparisons of different ultrasonic extracting times 表4 阿魏酸不同乙醚提取次數的方差分析（略） Table 4 Multiple com

11、parisons of different number of times of extraction using ether 2.3.3 最佳制備工藝的確定 上述實驗結果表明，因素A對實驗結果無顯著性影響，因素B、C有顯著性影響；B1與B2、B3之間有顯著性差異，B2、B3之間無顯著性差異；C1與C2、C3之間有顯著性差異，C2、C3之間無顯著性差異?？紤]到實驗操作的便易程度等因素，樣品最佳制備工藝為A2B2C3。 2.4 精密度試驗 按供試品制備方法制備一份樣品，重復進樣5次，每次10L，按上述色譜條件測定峰面積，結果峰面積積分值RSD<2%。 2.5 穩(wěn)定性試驗 按供試品制備方法制

12、備一份供試品溶液，分別于0、2、4、8、12h精密吸取10L，按上述色譜條件測定，記錄峰面積積分值，結果峰面積積分值的RSD<1%，表明供試品溶液在12h內穩(wěn)定。    2.6 重復性試驗 取同批樣品5份，按供試品制備方法制備樣品并測定，結果RSD<1%。 2.7 回收率試驗 采用加標回收法，取已知含量樣品6份，分別精密加入阿魏酸對照品，按供試品制備方法制備樣品并測定，結果阿魏酸回收率平均值為99.8%，RSD為0.26%，表明回收率良好。 2.8 樣品測定 按供試品溶液的制備方法分別測定不同生產批號的三批樣品，結果三批樣品含阿魏酸的量在4.

13、978-8.957g/g間。 3 結論 HPLC法測定中藥制劑中阿魏酸質量濃度的流動相主要有甲醇水12和乙腈水3體系。本文對兩種流動相體系進行了比較，結果在Lichrospher C18(4.6mm×250mm，5m)色譜柱上乙腈水體系的分離效果優(yōu)于甲醇水體系，考慮到阿魏酸的分子結構特點，加入適量的醋酸使得阿魏酸的峰形更好。通過HPLC指紋色譜定性6以確定制劑和藥材中阿魏酸在色譜圖中的位置。通過正交試驗L9(34)對阿魏酸的提取工藝進行了優(yōu)化，為測定健脾補血片中阿魏酸的質量濃度提供了一個可靠的方法，以利于健脾補血片的質量控制。 參考文獻： 1陳發(fā)奎.常用中草藥有效成分含量測定 M. 北京：人民衛(wèi)生出版社,1997:570. 2孟君，龔云,丁野，等. 婦科調經片質量標準研究 J. 中成藥，2004, 26(7):541545. 3孟艷彬，孫盛, 蘇又凡，等. HPLC測定黨參中阿魏酸的含量 J. 承德醫(yī)學院學報,