阿維A對(duì)硬皮病小鼠的治療作用及機(jī)制研究

1、阿維A對(duì)硬皮病小鼠的治療作用及機(jī)制研究 阿維A對(duì)硬皮病小鼠的治療作用及機(jī)制研究 摘要 目的 研究阿維A對(duì)系統(tǒng)性硬皮病小鼠皮膚及肺部纖維化的治療作用，并通過檢測(cè)小鼠外周血Th17/Treg相關(guān)因子白介素-17、IL-10、IL-6、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-1水平，探討阿維A治療硬皮病可能的機(jī)制。 方法 24只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、硬皮病組和阿維A組，硬皮病組和阿維A組給予博萊霉素皮下注射4周，阿維A組同時(shí)每天給予6 mg/kg的阿維A灌胃4周。4周后取注射部位皮膚及肺部制作組織病理切片，觀察小鼠皮膚厚度及皮膚/肺部炎癥。酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)小鼠血清IL-17、IL-10、IL-6、TGF-1水

2、平。 結(jié)果 阿維A組皮膚厚度、皮膚炎癥評(píng)分、肺部炎癥評(píng)分均明顯低于硬皮病組m比m，分比分，分比分，P 0.05，而模型組、對(duì)照組、給藥組三組血清TGF-1差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。 3 討論 系統(tǒng)性硬皮病可引起廣泛的皮膚硬化以及肺、腎、食管等多器官功能異常，多數(shù)患者預(yù)后不良。目前系統(tǒng)性硬皮病的治療策略主要是基于本病發(fā)生的三種根本機(jī)制：針對(duì)血管痙攣，用血管擴(kuò)張劑如鈣通道阻滯劑，和抗血小板聚集藥改善外周血循環(huán)；針對(duì)免疫激活，用免疫抑制劑阻止有害細(xì)胞因子的合成和釋放，如環(huán)孢素，環(huán)磷酰胺，糖皮質(zhì)激素等；針對(duì)纖維增生和膠原沉積，用減少膠原合成和增加膠原酶的藥物抑制或減少纖維化，如D-青霉胺、秋水仙堿、-

3、干擾素等1，5。但這些藥物僅能不同程度地緩解病癥或有較大的副作用，使系統(tǒng)性硬皮病仍缺乏有效的治療方法。 阿維A為人工合成的第二代維A酸類藥物，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、抑制細(xì)胞增殖及調(diào)節(jié)免疫等作用。文獻(xiàn)報(bào)道【2】口服阿維A酯治療27例硬皮病樣的慢性移植物抗宿主病取得了明顯的療效。Marcellus等【3】觀察阿維A酯單用或聯(lián)合其他藥物治療12例SSc，并與糖皮質(zhì)激素、D-青霉胺、環(huán)孢素等藥物治療進(jìn)行比擬，結(jié)果顯示使用阿維A酯治療的患者，臨床療效優(yōu)于其他藥物治療，而且起效快。崔盤根等使用阿維A 0.50.6 mg/聯(lián)合血管擴(kuò)張劑或其他藥物治療6例SSc患者，收到了良好效果，治療2周即可改善關(guān)節(jié)病癥及皮膚

4、硬化程度，且對(duì)SSc引起的某些內(nèi)臟受累也有一定的療效【6】。博來霉素構(gòu)建的小鼠硬皮病模型，可以很好的模擬人SSc的臨床特征，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)使用阿維A治療4周可以明顯改善硬皮病小鼠皮膚和肺部炎癥及纖維化，因此認(rèn)為阿維A為治療SSc頗具前景的藥物。 Th17/Treg的發(fā)現(xiàn)更新了既往CD4+T細(xì)胞的研究以Th1/Th2為主要內(nèi)容的觀點(diǎn)。CD4+T細(xì)胞在TGF-和IL-6的共同誘導(dǎo)下分化為Th17，分泌IL-17和IL-6，促進(jìn)炎性反響和自身免疫性疾??；而在TGF-單獨(dú)的誘導(dǎo)下分化為Treg細(xì)胞，分泌TGF-和IL-10，發(fā)揮免疫抑制及免疫調(diào)節(jié)作用【4】。近年來，Th17/Treg在SSc發(fā)病中的作用逐

5、漸被人們所認(rèn)識(shí)，萬琳琳等【7】發(fā)現(xiàn)SSc患者外周血Th17細(xì)胞比例、血清IL-17水平與活動(dòng)組SSc患者的病情活動(dòng)度呈正相關(guān)，提示Th17胞亞群在活動(dòng)期SSc患者體內(nèi)擴(kuò)增，其擴(kuò)增與SSc活動(dòng)密切相關(guān)。在博來霉素誘導(dǎo)的小鼠硬皮病模型中也發(fā)現(xiàn)Th17細(xì)胞通過IL-17、IL-6等細(xì)胞因子參與SSc的發(fā)病，且與疾病程度呈正相關(guān)【8】。本試驗(yàn)依照人治療劑量阿維A 0.5mg/換算為小鼠治療劑量阿維A 6mg/給予小鼠灌胃4周，顯著改善硬皮病小鼠皮膚和肺部病癥，且血清IL-17、IL-6也顯著降低，提示阿維A對(duì)SSc的作用機(jī)制可能與影響Th17細(xì)胞有關(guān)。維甲酸相關(guān)孤獨(dú)受體是控制Th17細(xì)胞分化的轉(zhuǎn)錄因子

6、【4】，RORt誘導(dǎo)編碼IL-17和IL-17F細(xì)胞因子基因的表達(dá)。當(dāng)小鼠缺乏RORt后，自身免疫性疾病發(fā)生率下降，Th17細(xì)胞數(shù)量也相應(yīng)減少。文獻(xiàn)報(bào)道局部維A酸類藥物可與維甲酸相關(guān)孤獨(dú)受體結(jié)合，抑制該基因的表達(dá)9-11，因此推測(cè)阿維A治療硬皮病的機(jī)制可能與藥物結(jié)合RORt有關(guān)，導(dǎo)致了IL-17降低，以到達(dá)治療皮膚和肺臟纖維化的作用。本試驗(yàn)中，筆者還發(fā)現(xiàn)阿維A治療組血清IL-10水平也顯著降低，而IL-10的水平在一定程度上反映了Treg細(xì)胞的水平。因此認(rèn)為阿維A不僅作用于Th17細(xì)胞，而也可能影響了Th17/Treg的平衡。 阿維A作為皮膚科常用藥物之一，可明顯改善硬皮病小鼠皮膚及肺部病癥，

7、為臨床上治療SSc提供了新的思路，其作用機(jī)制可能與影響Th17/Treg的平衡有關(guān)。筆者進(jìn)一步將繼續(xù)研究使用阿維A治療后外周血Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞各占CD4+細(xì)胞的百分比，檢測(cè)外周血單一核細(xì)胞中IL-17、RORt及叉頭狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3mRNA水平，以進(jìn)一步明確阿維A對(duì)Th17/Treg的影響。 參考文獻(xiàn) 【1】 趙辨.臨床皮膚病學(xué)M.江蘇：江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2001：672-679. 【2】 Marcellus DC，Altomonte VL，F(xiàn)armer ER， et al. Etretinate therapy for refractory sclerodermatous chr

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