32月季的花藥培養(yǎng)lotus

1、? 一、課題目標(biāo)? 說出被子植物花粉發(fā)育的過程及花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑，說出影響花藥培養(yǎng)的因素，學(xué)習(xí)花藥培養(yǎng)的基本技術(shù)，嘗試用月季或其他植物的花藥進(jìn)行培養(yǎng)。? 二、課題重點(diǎn)與難點(diǎn)? 課題重點(diǎn)：選取適宜的培養(yǎng)材料和培養(yǎng)基。? 課題難點(diǎn)：選取適宜的培養(yǎng)材料和培養(yǎng)基?；ńz花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉（一）被子植物的花粉發(fā)育雄蕊?花粉是由花粉母細(xì)胞（小孢子母細(xì)胞）歷經(jīng)減數(shù)分裂、有絲分裂而形成的，?花粉是單倍體的生殖細(xì)胞。?花粉的發(fā)育要經(jīng)歷：小孢子四分體時(shí)期、單核期、雙核期等階段。小孢子母細(xì)胞4個(gè)小孢子1個(gè)小孢子（單核居中期）花粉管細(xì)胞核生殖細(xì)胞核營養(yǎng)細(xì)胞生殖細(xì)胞精子精子減數(shù)分裂有絲分裂有絲分裂

2、特點(diǎn)：細(xì)胞質(zhì)濃厚（雙核期）（小孢子四分體時(shí)期）（單核期）小孢子母細(xì)胞4個(gè)小孢子1個(gè)小孢子（單核居中期）花粉管細(xì)胞核生殖細(xì)胞核營養(yǎng)細(xì)胞生殖細(xì)胞精子精子減數(shù)分裂有絲分裂有絲分裂問：如果小孢子母細(xì)胞染色體數(shù)為2n，成熟的花粉粒有幾個(gè)細(xì)胞？染色體總數(shù)數(shù)目是多少？2nnnnnnnnn注意：二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核。（精子在花粉管中形成）三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細(xì)胞進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，這樣的花粉在成熟時(shí)，含有一個(gè)營養(yǎng)核和兩個(gè)精子。兩個(gè)精子和一個(gè)營養(yǎng)核的基因型相同。1花粉母細(xì)胞4個(gè)小孢子減分有分4個(gè)花粉管細(xì)胞核4個(gè)生殖細(xì)胞核有分8個(gè)精子（二）產(chǎn)生

3、花粉植株的兩種途徑移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化愈傷組織花藥中的花粉脫分化分化叢芽再分化叢芽誘導(dǎo)生根胚狀體直接由器官產(chǎn)生由單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生由愈傷組織產(chǎn)生體細(xì)胞胚（胚狀體）：在組織培養(yǎng)過程中，某些體細(xì)胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)，發(fā)育過程亦與合子胚類似，被稱為體細(xì)胞胚（胚狀體）。人工種子人工種子又稱人造種子、合成種子或無性種子，就是將組織培養(yǎng)所產(chǎn)生的體細(xì)胞胚、不定芽、頂芽、腋芽或小鱗莖等繁殖體，包裹在能提供營養(yǎng)的膠囊（人造胚乳）里，再在外面包上一層具有保護(hù)功能和防止機(jī)械損傷的外膜（人造種皮），造成一種類似種子的結(jié)構(gòu)，能在一定的條件下萌發(fā)生長，形成完整植株。（三）影響花藥培養(yǎng)的因素1、

4、材料的選擇（內(nèi)因）花期：初花期花粉：單核期（細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)）花蕾：完全未開放材料的選擇：花期早期時(shí)的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株。一般，月季的花藥培養(yǎng)時(shí)間選在五月初到五月中旬，即月季的初花期。選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期也是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素。一般來說，在單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)成功率最高。為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開放的花蕾。P39：為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？花瓣松動后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。保證花粉發(fā)育的時(shí)期是單核期。2 2、培養(yǎng)基的組成、培養(yǎng)基的組成?培養(yǎng)基因植物不同而有所變化。?植物激素的種類及其濃度配

5、比常對誘導(dǎo)細(xì)胞分裂，生長和分化起決定作用。? 親本植物的生長條件? 材料的低溫預(yù)處理材料的低溫預(yù)處理? 接種密度3 3、其他條件、其他條件實(shí)驗(yàn)操作（一）材料的選取染色鏡檢（二）材料的消毒酒精、氯化汞、次氯酸鈣（三）接種和培養(yǎng)結(jié)果分析與評價(jià)（一）材料的選取1、選擇花藥：鏡檢是否處于適宜的發(fā)育期。2、方法：醋酸洋紅法：最常用，能將花粉細(xì)胞核染成紅色焙花青-鉻礬法：當(dāng)花粉細(xì)胞核不易著色，能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。（二）材料的消毒（二）材料的消毒選取花蕾初步消毒初步消毒（70%酒精）無菌水清洗徹底消毒（氯化汞）無菌水再沖洗（三）接種和培養(yǎng)（三）接種和培養(yǎng)1、剝離花藥盡量不損傷花藥（否則接種后，容易從受

6、傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織），徹底去除花絲，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。2、接種花藥3、培養(yǎng) 培養(yǎng)條件：25，幼小植株形成后才需要光照 過程：先脫分化培養(yǎng)，當(dāng)花藥裂開長出愈傷組織后及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上。在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會出現(xiàn)染色體倍性的變化。（主要原因是營養(yǎng)核和生殖核融合造成的）植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點(diǎn)植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點(diǎn)項(xiàng)目相同點(diǎn)不同點(diǎn)植物組織培養(yǎng)技術(shù)離體的植物組織經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再分化成叢芽，誘導(dǎo)出根，然后進(jìn)行移栽。外植體為體細(xì)胞，染色體數(shù)無需加倍?；ㄋ幣囵B(yǎng)技術(shù)

7、取材為花藥，培養(yǎng)的為單倍體幼苗，植株弱小，高度不育，必須用秋水仙素處理，使染色體加倍，恢復(fù)正常植株的染色體數(shù)，而且為純種。?練習(xí)練習(xí)1.? 答：F2代紫色甜玉米的基因型組成可能為Aasusu 或AAsusu 。如果運(yùn)用常規(guī)育種方法，將F2代中的紫色甜玉米與白色甜玉米（aasusu ）進(jìn)行測交，可以選擇出基因型為AAsusu 純種紫色甜玉米。但這種方法比較繁瑣，耗時(shí)也較長，需要至少三年的選種和育種時(shí)間。如果利用花藥培養(yǎng)的技術(shù)，在F1代產(chǎn)生的花粉中就可能有Asu的組合，再將花粉植株進(jìn)行染色體加倍，就可以直接得到紫色甜玉米的純合體（AAsusu ）。這種方法可以大大縮短育種周期。?練習(xí)2.?答：植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的相同之處是：培養(yǎng)基配制方法、