精編2019年食品飲料企業(yè)大腸菌群檢測(cè)方法

1、1.0目的檢測(cè)食品飲料中的大腸菌群，以監(jiān)測(cè)飲料的微生物狀況。2.0范圍適用于咖啡飲料，茶飲料等產(chǎn)品的大腸菌群的測(cè)定。3.0職責(zé)微生物品控員負(fù)責(zé)本文件的執(zhí)行；QA檢驗(yàn)工程師負(fù)責(zé)監(jiān)督本文件的有效執(zhí)行。4.0定義無5.0程序5.1培養(yǎng)介質(zhì)的準(zhǔn)備所有培養(yǎng)劑必須根據(jù)制造商的說明進(jìn)行制備和滅菌。它們對(duì)熱很敏感，所以不能過熱。 培養(yǎng)劑應(yīng)裝入200- 300ml的瓶內(nèi)進(jìn)行滅菌。容器中至少保留15%的空間。5.2培養(yǎng)皿準(zhǔn)備5.2.1按測(cè)試內(nèi)容及測(cè)試樣品數(shù)量準(zhǔn)備好平板和乳糖膽鹽發(fā)酵管，另外每個(gè)測(cè)試項(xiàng)目加 一個(gè)發(fā)酵管作對(duì)照試驗(yàn)，放入滅菌釜滅菌。5.2.2將滅菌好的發(fā)酵管和平板置于干燥箱中高溫烘干。冷卻待用。 5.3

2、操作步驟5.3.1檢樣稀釋及培養(yǎng)5.3.1.1 以無菌操作，將檢樣25g或25ml放于含有225ml無菌水的玻璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)預(yù) 置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠），經(jīng)充分振搖作成1:10的均勻稀釋液。5.3.1.2 用1ml滅菌吸管吸到1:10稀釋液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml無菌水的試 管內(nèi)（注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液），振搖試管混合均勻，作成1:100的 稀釋液。5.3.1.3 另取1ml滅菌吸管，按上項(xiàng)操作順序，作10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1ml滅菌吸管。5.3.1.4 由于本方法所適用的樣品均要求無菌，因此只選擇原液、1:10和1:100兩個(gè)稀釋度，分別作10倍遞增稀釋的

3、同時(shí)，即以吸取該稀釋度的吸管移1ml稀釋液于滅菌發(fā)酵管內(nèi)（已按待測(cè)樣品的類別和批號(hào)分別作好記號(hào)）內(nèi)，每個(gè)稀釋度作 三個(gè)發(fā)酵管。5.3.2乳糖發(fā)酵試驗(yàn) 將檢驗(yàn)樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，每一稀釋度接種三管，置36+/-1 oC溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24+/-2小時(shí)，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報(bào)告大腸菌群陰 性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進(jìn)行。5.3.3分離培養(yǎng)將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置36+/-1 oC溫箱內(nèi)，培養(yǎng)48+/-2h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并作革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。5.3.4證實(shí)試驗(yàn)在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落 12個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā) 酵管，置3

4、6+/-1 C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24+/-2h,觀察產(chǎn)氣情況，凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染 色為陰性的無芽胞桿菌，即可報(bào)告為大腸菌群陽性。5.3.5報(bào)告根據(jù)證實(shí)為大腸桿菌陽性的管數(shù)，在“ GB4789.3食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群的測(cè)定”中查MPN僉索表，報(bào)告每100ml大腸菌群的最可能數(shù)，并將結(jié)果記錄 在“微生物檢驗(yàn)記錄” FM-QA-520。生效日期：2003/04/10編 寫：版本：B審核：修訂次數(shù)：00 批 準(zhǔn)：共2頁，第1頁6.0參考文獻(xiàn)6.1本文件支持綱要文件：R-QA-006 微生物監(jiān)控綱要大腸菌群測(cè)定。6.2本文件參考：GB 4789.3 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 7.0附件/記錄7.1附件：無7.2記錄：微生物檢驗(yàn)記錄FM-QA-520生