地爾硫?qū)θ梭w內(nèi)安替比林代謝的選擇性抑制作用研究

1、地爾硫?qū)θ梭w內(nèi)安替比林代謝的選擇性抑制作用研究摘要目的：研究鈣離子拮抗劑地爾硫(DZ)對(duì)模型藥安替比林(AP)在人體內(nèi)代謝的選擇性抑制作用。方法：6名健康男性志愿者，隨機(jī)分成二組，分別po單劑量AP 800mg及加服DZ (30mg，tid)，6d,取血并留尿48h，間隔2周后交叉給藥。HPLC法測定血漿AP濃度和尿液中AP、3-羥甲基安替比林(3-OHMAP)、4-羥基安替比林(4-OHAP)、N-去甲基安替比林(NorAP)的濃度。結(jié)果：加服DZ后，APt1/2(Ke)從(13.793.17)h延長至(18.543.14)h(P0.01)，Cls從(40.427.62)ml.min-1減少

2、至(28.645.84)ml.min-1(P0.01)，cmax和AUC明顯增加(P0.05)。4-OHAP尿清除率從(12.913.40)ml.min-1減少至(3.500.78)ml.min-1(P0.01)，3-OHMAP和NorAP的尿清除率沒有明顯變化。結(jié)論：DZ選擇性地抑制了AP在人體肝臟中的4-羥基化代謝途徑，提示DZ是一作用較強(qiáng)的、選擇性的肝藥酶抑制劑。 關(guān)鍵詞地爾硫；安替比林；肝藥酶抑制劑The selective inhibition of diltiazem on antipyrine metalboism in humanYin Qiping (Yin QP),Xi N

3、ianzhu (Xi NZ),Wang Hongtu (Wang HT),et al (Department of Pharmacy,Huashan Hospital,Shanghai Medical University,Shanghai200040)ABSTRACTOBJECTIVE:To study the selective inhibitory effect of diltiazem(DZ) on hepatic drug metabolism by using antipyrine(AP) as a model drug.METHOD:Six healthy male subjec

4、ts were divided into two groups in a randomized,crossover way.Each subject received orally AP 800mg after the administration of DZ (30mg,tid) for 6d or without DZ pretreatment with a two-week wash-out.Plasma and urine samples were collected until 48h.A simple HPLC method was used to determine AP and

5、 its main metabolites in plasma and urine.RESULTS:DZ treatment decreased AP clearance from (2.430.46) L.h-1 to (1.720.35)L.h-1(P0.01)，resulting in the prolongation of AP half-life from (13.793.17)h to (18.543.14)h(P0.01).During DZ treatment,fractional clearance of urinary 4-hydroxyantipyrine was dec

6、reased significantly from (12.913.40)ml.min-1 to (3.500.78)ml.min-1,with no significant change in 3-hydroxymethylantipyrine and norantipyrine.CONCLUSION:DZ inhibited the 4-hydroxytative metabolic pathway of AP,suggesting DZ may be a potent and selective microsomal enzyme inhibitor.KEYWORDSdiltiazem,

7、antipyrine,microsomal enzyme inhibitor地爾硫(diltiazem,DZ)為鈣離子拮抗劑，臨床廣泛用于心絞痛、高血壓、室上性心律失常等疾病的治療。安替比林(antipyrine,AP)為模型藥，用于研究肝臟代謝功能及藥物在個(gè)體和群體的代謝差異等1。AP的3個(gè)主要代謝物3-羥甲基安替比林(3-hydroxymethyl antipyrine,3-OHMAP)、4-羥基安替比林(4-hydroxyantipyrine,4-OHAP)和N-去甲基安替比林(norantipyrine,NorAP)分別在不同的細(xì)胞色素P450同工酶催化下形成，因此測定AP的總體血漿清

8、除率及其3種代謝物的生成速率，可反映特定的細(xì)胞色素P450酶的活性。近年來，有關(guān)DZ與其它藥物相互作用的研究報(bào)道提示，DZ是一潛在的肝藥酶抑制劑24。但對(duì)其抑制作用的發(fā)生方式和特點(diǎn)，目前尚不明確。作者前期研究了DZ對(duì)AP在大鼠肝臟中代謝的影響，發(fā)現(xiàn)DZ明顯抑制AP的4-羥基化代謝過程，而對(duì)AP的3-羥甲基化和N-去甲基化途徑均不產(chǎn)生明顯影響。鑒此，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究DZ對(duì)AP在人體內(nèi)代謝的影響，考證其選擇性抑制作用在人體是否存在。1實(shí)驗(yàn)材料1.1藥品與試劑DZ(每片含30mg，上海延安制藥廠)；AP(每粒含400mg/膠囊，上海信誼制藥廠)；4-OHAP標(biāo)準(zhǔn)品(美國Sigma公司提供)；NorA

9、P(法國Dr.Catherine Palette贈(zèng)送)；3-OHMAP標(biāo)準(zhǔn)品(按Danhof法合成5，純度經(jīng)紅外、核磁共振和質(zhì)譜鑒定)。1.2儀器Waters高效液相色譜儀(美國Waters公司)；SHZ88型恒溫水浴振蕩器(上海醫(yī)療器械廠)；XW80型旋渦混合器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠)；80-1型離心沉淀機(jī)(上海手術(shù)器械廠)2實(shí)驗(yàn)方法2.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)健康男性志愿者6名，平均年齡(23.80.4)歲，肝、腎功能、胸透和心電表現(xiàn)全部正常，健康狀況良好。實(shí)驗(yàn)前兩周及整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間戒煙和戒酒，并避免服用其它任何藥物。6名志愿者隨機(jī)分為A，B兩組，A組po DZ(30mg,tid)5d,第6天同時(shí)po 30

10、mg DZ和800mg AP。B組于實(shí)驗(yàn)當(dāng)天po 單劑量AP 800mg。間隔2周后交叉實(shí)驗(yàn)。于0，0.25，0.5，0.75，1，2，3，4，6，8，12，16，24，36，48h抽血2ml，離心分離后-30保存。同時(shí)于012，1224，2436,3648h留尿，分別留取5ml尿樣，加入適量偏重亞硫酸鈉，-30保存。2.2樣品分析血漿中AP的測定取血漿0.5ml，加入內(nèi)標(biāo)(對(duì)乙酰氨基酚1mg.ml-1)10l，混勻，再加入10% 5-磺基水楊酸150l，4500g,離心5min，取上清液30l進(jìn)樣，HPLC測定。色譜柱為200mm4mm國產(chǎn)不銹鋼柱，內(nèi)填固定相YWG-C18，粒徑10m。流動(dòng)

11、相為甲醇醋酸-醋酸銨緩沖液(pH4.5 =5545)，流速1.0ml.min-1，檢測波長254nm。尿液中AP及其代謝物的測定取尿液0.5ml，加入偏重亞硫酸鈉40mg，內(nèi)標(biāo)(對(duì)乙酰氨基酚1ml.ml-1)5l，混勻后，再加入pH4.5醋酸-醋酸銨緩沖液0.5ml，Limpet Acetone Powder 20mg,渦旋混勻，置恒溫水浴振蕩器中，37保溫3h。待冷至室溫后，加入5ml乙酸乙酯，渦旋1min，1500g離心10min，將上清液取至另一尖底試管中，35水浴上N22.3藥代動(dòng)力學(xué)分析采用3P87程序，處理血漿安替比林的濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，擬合房室模型并計(jì)算其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。按三點(diǎn)拋物

12、線擬合法計(jì)算達(dá)峰時(shí)tmax和峰濃度cmax。由公式Clm=Am/FDCls計(jì)算各代謝物的尿清除率，式中Am為代謝物的尿排泄量，Cls為AP的全身清除率，F(xiàn)1。2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用自身對(duì)照t檢驗(yàn)(paired students t-test),比較加服DZ前后，AP，3-OHMAP,NorAP,4-OHAP各藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的差異性。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果po單劑量AP及加服DZ后AP的血藥濃度-時(shí)間曲線見1，AP的各藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較見表1。加服DZ前后，AP，3-OHMAP，NorAP,4-OHAP在各時(shí)間段的尿藥排泄量比較見2，尿清除率變化見表2。表1不同處理組AP的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)參數(shù)KeKat1/2(K

13、a)t1/2(Ke)tmaxcmaxAUC0-ClsVd/h-1/h-1/h-1/h-1/h-1/g.ml-1/g.ml-1h/ml.min-1/L10.061811.57610.0611.220.6117.78266.8449.8348.530.04515.03840.1415.371.4519.07377.8135.3346.9620.035920.15350.0319.320.6018.42466.4028.6747.800.029020.16100.0323.880.5919.42612.0621.8345.0430.05638.38740.0812.321.6622.95351.27

14、38.0040.470.03933.46120.2017.631.4323.22570.6823.3335.6640.06172.82160.2411.231.4517.80308.3443.1742.040.04221.82420.3816.442.3018.43449.3729.6742.2450.05367.42330.0912.941.2416.24288.0646.3351.860.04004.96350.1417.342.0216.31376.7335.3353.1360.04415.75170.1215.731.3215.77364.6036.5049.790.033710.00

15、050.0720.590.8117.49506.7926.3346.840.05229.35230.1013.791.1518.16340.9240.4246.750.03821)7.57480.1618.541)1.4318.992)482.242)28.6444.98s0.01036.03120.073.170.442.5671.777.624.500.00596.74600.123.140.662.3698.385.845.80注：每一組別上為單服AP組；下為加服DZ組。與單服AP時(shí)相比，1)P0.01；2)P0.02表2DZ對(duì)AP各代謝物尿清除率的影響組別ClRCl3-OHMAPClN

16、orAPCl4-OHAP1AP0.655.516.3913.04AP+DZ1.023.704.493.892AP1.052.873.298.99AP+DZ0.932.983.402.753AP1.225.055.7710.92AP+DZ1.163.043.422.814AP0.906.207.0516.08AP+DZ0.854.855.683.455AP0.835.726.4217.75AP+DZ0.966.146.934.836AP1.034.574.5210.69AP+DZ1.183.974.683.250.954.995.5712.911.024.114.773.50s0.201.181

17、.413.400.131.211.360.781)注：與單服AP時(shí)相比，1)P0.011AP的平均血藥濃度-時(shí)間曲線1-單服AP組；2-加服DZ組2AP及其代謝物的尿排泄-時(shí)間曲線A-單服AP組；B-加服DZ組；AP；3-OHMAP；NorAP；4-OHAP4討論作者曾采用大鼠離體肝臟灌流模型，研究DZ對(duì)AP肝臟代謝的影響，發(fā)現(xiàn)DZ對(duì)AP代謝的抑制作用具有明顯選擇性，即選擇性地抑制AP的4-羥基化代謝途徑。本實(shí)驗(yàn)在此基礎(chǔ)上進(jìn)行人體試驗(yàn)。健康人體po單劑量AP 800mg，血藥濃度-時(shí)間變化呈線性-房室模型，與文獻(xiàn)報(bào)道一致6。AP t1/2為(13.793.17)h，3種代謝物的總清除率為(23

18、.475.99)ml.min-1，占AP總體清除率的58.19%。加服DZ(90mg.d-1，tid)后，AP t1/2延長至(18.543.14)h (P0.01)，Cls 從(40.427.62)ml.min-1減少至(28.645.84)ml.min-1(P0.01)，cmax和AUC也明顯增加(P0.05)。Cl4OHAP從(12.913.40)ml.min-1減少至(3.500.78)ml.min-1(P0.01)，ClNorAP和Cl3-OHMP沒有明顯變化。表明DZ選擇性地抑制了安替比林在人體肝臟中的4-羥基化代謝途徑。加服DZ后，AP的吸收半衰期t1/2(ka)和表觀分布體積V

19、d未有明顯變化，說明DZ不影響AP的吸收和分布過程。AP的3條主要代謝途徑受不同細(xì)胞色素P450同酶的催化，近期研究指出，4-OHAP的形成，主要受P450 3A4的催化，P450 1A2也有較弱的催化作用；P450 2C亞族主要催化NorAP的形成；P450 1A2和P450 2C9則主要催化3-OHMAP的形成。因此DZ有可能選擇性地抑制P450 3A4和(或)P450 1A2 的活性，而使4-OHAP的形成受阻。作者單位：印綺平王宏張靜華 （上海200040上海醫(yī)科大學(xué)華山醫(yī)院臨床藥學(xué)研究室）奚念朱（上海200032上海醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生物藥劑研究室）參考文獻(xiàn)1賀平，吳孟超，郭亞軍，等.有關(guān)安替比林代謝的臨床藥理研究.中國藥理學(xué)通報(bào)，1996，12：306.2Soto J,Sacristan JA，Alsar MJ.Diltiazem treat