實驗一、安全與儀器使用1

1、實驗一、分子生物學實驗安全實驗一、分子生物學實驗安全及實驗常用儀器設備及實驗常用儀器設備2016-5生命科學學院生命科學學院分子生物學實驗分子生物學實驗一、分子生物學實驗安全注意事項一、分子生物學實驗安全注意事項1.易燃易爆、有毒的化學試劑易燃易爆、有毒的化學試劑有毒的化學試劑：較小劑量有毒的化學試劑：較小劑量 疾病疾病/死亡死亡通過皮膚、呼吸道：通過皮膚、呼吸道：丙烯酰胺、過硫酸銨、甲醛、氯仿、十二烷基磺酸鈉（SDS）、四甲基二乙胺（TEMED）、冰醋酸、異戊醇、異丁醇、正丁醇致癌物或誘變劑：致癌物或誘變劑：溴化乙錠（EB）、焦碳酸二乙酯（DEPC）易燃易爆化學試劑：易燃易爆化學試劑：苦味酸

2、、酒精腐蝕性腐蝕性 化學試劑：化學試劑：酸和堿、苯酚防護先行！防護先行！2.放射性試劑：放射性試劑：如32P 或其它放射性物質(zhì)，在實驗中要確實保證遵守使用這類物質(zhì)的所有守則；對放射性廢棄物要小心。3.生物學管制試劑生物學管制試劑：物理防護主要是：有技術熟練的工作人員，具有正確的物理防護設備，如高壓滅菌鍋及安全操作箱等。生物防護主要包括選擇非病原的生物體作外源DNA 的克隆工具等。4.設備方面的危險：設備方面的危險：實驗室內(nèi)所有設備都有潛在危險，操作方法不正確，就會出現(xiàn)意外，所以實驗室中的所有儀器的使用都應在老師的指導下進行，或者閱讀本儀器的使用說明書后，方可使用。例如，紫外線?；瘜W試劑的安全使

3、用化學試劑的安全使用 提取組織和細胞RNA的一種重要試劑，在提取RNA時一定要在通風櫥進行。如皮膚接觸Trizol，請立即用大量去垢劑和水沖洗，廢液埋入地下。Trizol RNA酶的強抑制劑，一種潛在的致癌物質(zhì)。操作時戴口罩，在通風櫥中進行。沾到手上立即沖洗，廢液通過廢液道排泄。DEPC(二乙基焦碳酸酯二乙基焦碳酸酯) 常用于DNA和RNA提取，對皮膚、眼睛、黏膜和呼吸道有強烈的刺激作用和腐蝕性，易損害肝和腎。操作時戴手套在通風櫥里進行操作時戴手套在通風櫥里進行，廢液收集后埋入地下。CHCl3（Chloroform，氯仿），氯仿）Acrylamide（丙烯酰胺）（丙烯酰胺） 蛋白質(zhì)分離技術中作

4、電泳支持物，具神經(jīng)毒性，聚合后毒性消失。操作時戴手套在通風櫥內(nèi)進行，聚合后的聚丙烯酰胺凝膠沒有毒性，可隨普通垃圾一起扔掉，千萬不要倒入下水道?；瘜W試劑的安全使用化學試劑的安全使用 有毒，易損害眼睛。質(zhì)粒提取時作裂解液破壞細胞膜和Southern雜交時的洗膜液中的去垢劑。戴合適的手套和安全護目鏡，不要吸入其粉末。十二烷基硫酸鈉十二烷基硫酸鈉(SDS) 強神經(jīng)毒性，防止誤吸，操作時快速，存放時密封。 四甲基二乙胺（四甲基二乙胺（TEMED）化學試劑的安全使用化學試劑的安全使用紫外線輻射的危害和防護紫外線輻射的危害和防護 在分子實驗室里常用的紫外光源包括手提式紫外燈手提式紫外燈和紫外透射紫外透射儀、

5、凝膠成像系統(tǒng)儀、凝膠成像系統(tǒng)。只能通過安全玻璃片才能觀察。在紫外光下操作時要戴合適的預防性手套，帶護目鏡并遮蔽暴露的皮膚。 使用新的無毒DNA染料: SYBR Green, SYBR Gold等, 避免了Ethidium Bromide (EB) 染料對人體的傷害。 紫外照射消毒后由于空氣中臭氧富集，不宜立即開始工作，應在停止紫外照射30 min后開始工作。 超凈工作臺超凈工作臺中進行紫外照射消毒中進行紫外照射消毒后，也應用強風進行吹掃后再進行工作，以免臭氧危害身體健康。超凈工作臺超凈工作臺生物安全柜生物安全柜二、做好分子學實驗應注意的有關問題二、做好分子學實驗應注意的有關問題1 1克服畏懼心

6、理克服畏懼心理2 2、克服輕視心理、克服輕視心理3 3克服用微量試劑不習慣克服用微量試劑不習慣 4 4防止粗心大意防止粗心大意 5 5防止缺乏整體實驗的概念防止缺乏整體實驗的概念 6 6僥幸心理僥幸心理 7 7、試劑問題、試劑問題 ：嚴格按各種試劑的特定要求來操作8 8、背景知識問題、背景知識問題 三、分子生物學實驗室常用儀器設備1滅菌設備2高速冷凍離心機3冷凍設備4光學測量5天平7凝膠電泳裝置8恒溫箱9溫控搖床10磁力攪拌器11微波爐12PH 計（酸度計）130.1 L - 5000 L 范圍的微量移液器14PCR 儀（熱循環(huán)儀）15紫外觀測儀16旋渦混合器（Vortex）17水浴裝置18純

7、水儀/雙蒸水儀19玻璃器皿及塑料制品20相應的分子生物學試劑及試劑盒四、一些常用精密儀器的使用方法四、一些常用精密儀器的使用方法1微量移液器的使用方法微量移液器的使用方法1-1微量移液器的使用 調(diào)量程1-3大龍移液器的使用_正向移液法_1-4大龍移液器的使用 反向移液法：黏稠液體的移取黏稠液體的移取1-2大龍移液器的使用_裝配管嘴微量移液器使用常見的微量移液器使用常見的錯誤錯誤操作操作1)吸液時，移液器本身傾斜，導致移液不準確(應該垂直吸液，慢吸慢放)。2)裝配吸頭時，用力過猛，導致吸頭難以脫卸(無需用力過猛，選擇與移液器匹配的吸頭)。3)平放帶有殘余液體吸頭的移液器(應將移液器掛在移液器架上

8、)。吸嘴內(nèi)有未排出液體時將移液器平放于桌面，或進行走動，吸嘴內(nèi)液體會回流入套筒內(nèi)，大量程移液器回流的液體會腐蝕活塞組件。正確方法：在進行實驗前，應將實驗用品放在觸手可及的地方，避免在進行實驗時走動，養(yǎng)成即吸即排，即排即卸的習慣，使用后的移液器放回至移液器架。4)用大量程的移液器移取小體積樣品(應該選擇合適量程范圍的移液器)。5)直接按到第二檔吸液(應該按照上述標準方法操作，反向移液法外)。6)使用丙酮或強腐蝕性的液體清洗移液器。吸取強揮發(fā)性液體后應及時拆開移液器用醫(yī)用酒精進行清洗，避免活塞組件受到腐蝕。7）吸液體或排液速度過快，吸液速度過快會影響準確度，特殊液體會產(chǎn)生氣泡。對于大量程移液器，過

9、快的吸液速度會造成液體倒吸腐蝕活塞組件。正確方法：平穩(wěn)緩慢的進行移液工作。2高速冷凍離心機的使用方法高速冷凍離心機的使用方法以eppendorf 5430R高速冷凍離心機為例實物講解eppendorf 5920 型高速冷凍離心機的使用3超純水儀的使用方法超純水儀的使用方法以MILLIPORE Direct-Q 3型超純水儀為例實物講解五、學生練習五、學生練習1. 微量移液器、旋渦混合器和小型離心機的使用微量移液器、旋渦混合器和小型離心機的使用 取196ul ddH2O于1.5mL離心管中（請反復練習）； 取1ul 6上樣緩沖液于4只0.2ml PCR管中； 將上述1.5ml離心管中的196ul ddH2O平均加樣到0.2ml PCR管中； 將上述4只PCR管在旋渦混合器上混合； 在小型離心機上離心（低速，5-10s），使溶液均處于PCR管底部。選擇合適量程！選擇合適量程！2. 電泳上樣練習電泳上樣練習材料：瓊脂糖凝膠 吸取6上樣緩沖液2