體內(nèi)藥物分析終極復(fù)習(xí)資料

1、1. 體內(nèi)藥物分析定義。P1研究藥物及其代謝物在生物體內(nèi)數(shù)量和質(zhì)量變化規(guī)律的方法學(xué)科,獲得藥物在體內(nèi)吸收、分布、代謝排泄等各種動(dòng)力參數(shù)，藥物與大分子的相互作用，代謝產(chǎn)物、代謝途徑等信息，對(duì)藥物評(píng)價(jià)，為臨床合理用藥、研發(fā)新藥等提供科學(xué)依據(jù)。2. 影響血藥濃度的因素（理解）。P3-5（1） 機(jī)體因素：包括生理、病理、遺傳因素（2） 藥物因素：包括劑型因素、藥物相互作用（3） （3）其他因素：大氣污染、食品、煙、酒、茶等藥物進(jìn)入體內(nèi)后，血液循環(huán)為藥物體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的樞紐。大多數(shù)藥物只有達(dá)到作用部位和受體部位，并達(dá)到一定的濃度后，才產(chǎn)生一定的藥理作用。多數(shù)藥物的血藥濃度與藥理效應(yīng)呈平行關(guān)系，部分藥物的血藥濃

2、度與藥效無明顯相關(guān)關(guān)系。3. 體內(nèi)藥物分析的生物樣本及分析對(duì)象。P8生物樣本：凡是體液所到之處，如血液、尿液、唾液、毛發(fā)、各種器官、組織、呼出氣體等都是取樣對(duì)象，還包括細(xì)胞懸液，微粒體孵育液、器官灌流液等體外試驗(yàn)中的各種生物介質(zhì)。分析對(duì)象：母體藥物、代謝產(chǎn)物、必要的內(nèi)源性物質(zhì)或與之相關(guān)的其他藥物。4. 體內(nèi)藥物分析的特點(diǎn)（1） 干擾雜質(zhì)多（2） 被測(cè)濃度低（3） 供試樣品量少（4） 待測(cè)物的易變性（5） 要求較快提供結(jié)果（6） 要有一定的儀器設(shè)備（7） 工作量大5. 生物樣品選擇的基本原則。常用的生物樣品及其應(yīng)用特點(diǎn)。P19選擇原則：（1） 必須能反映濃度與藥效的關(guān)系（2） 易于獲得（3） 便

3、于處理（4） 根據(jù)不同目的要求選取常用生物樣品及應(yīng)用特點(diǎn)：血液 優(yōu)點(diǎn)：較好體現(xiàn)藥物濃度與治療的關(guān)系 缺點(diǎn)：（1）損傷性取樣，取樣量有限制 （2）需要專業(yè)人員操作尿液 優(yōu)點(diǎn)：（1）非損傷性取樣 （2）藥物濃度高 （3）收集方便 缺點(diǎn)：（1）濃度變化大，與血藥濃度相關(guān)性差 （2）：不易采集，保存 （3）：腎功能不全、嬰兒不宜用此法唾液 優(yōu)點(diǎn)：（1）非損傷性取樣 （2）含蛋白濃度低，易處理 （3）CS/CP較恒定時(shí)，可代替血樣進(jìn)行TDM及藥物動(dòng)力學(xué)研究 缺點(diǎn)：（1）適用藥少 （2）取樣量變化大毛發(fā) 優(yōu)點(diǎn)：（1）取樣方便，可重復(fù)取樣 （2）通過測(cè)某特定代謝物區(qū)別濫用藥、臨床藥 （3）可獲得長期用藥信息

4、 缺點(diǎn)：（1）預(yù)處理繁雜，干擾多 （2）分析對(duì)象含量低，需精密儀器6. 血液樣品的采集和制備.P21采集：通常用一次性針頭插入靜脈血管內(nèi)抽取，取下針頭，轉(zhuǎn)移到相應(yīng)容器，不能用力推壓以免血細(xì)胞破裂制備：（1）血漿：多以肝素作抗凝劑，取適量于離心管，旋轉(zhuǎn)使均勻分布于管壁，傾去多余液體， 干燥試管；然后加入血樣，離心后取上層黃色液體即可，其量約為全血的50%（2）血清：等血樣中血塊凝結(jié)，在室溫25°下凝結(jié)速度較慢，可在37°水浴加快血清析出，離心后取上清液即可，其量約為全血的40%（3）全血：在血樣中加入含有抗凝劑的試管，輕輕混勻即可。6. 生物樣品的儲(chǔ)存。P23-24（1） 冷

5、凍儲(chǔ)存（2） 加穩(wěn)定劑（酶抑制劑、抗氧劑）（3） 加防腐劑或調(diào)節(jié)pH8. 去除蛋白的方法及原理，各種常用的蛋白沉淀劑及其效果。P27-28蛋白質(zhì)沉淀法：（1） 生成不溶性鹽沉淀，低于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的pH時(shí)，酸根與帶正電荷的蛋白質(zhì)形成不溶性鹽沉淀；高于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)pH時(shí)，金屬離子與蛋白質(zhì)中帶負(fù)電荷的羧基形成不溶性鹽沉淀。（2） 鹽析和脫水：與水混溶的有機(jī)溶劑可以與蛋白質(zhì)爭奪水化膜，并使水的介電常數(shù)減少，從而影響蛋白質(zhì)的解離程度及所帶電荷數(shù)量，增加蛋白質(zhì)顆粒間的引力使蛋白質(zhì)沉淀。組織的酶消化法：蛋白水解酶可在溫和條件下有效水解生物蛋白，將與蛋白質(zhì)結(jié)合的藥物釋放出來9. 常用的綴合物水解方法有哪些？P

6、28（1） 酸水解（2） 酶水解（3） 溶劑解10. 什么樣品需要進(jìn)行有機(jī)破壞處理？P29微量元素多數(shù)以結(jié)合的形式存在于有機(jī)物中，在分析和測(cè)定這些元素時(shí)，需將這些元素從有機(jī)物中游離出來，或者將有機(jī)物破壞后測(cè)定，根據(jù)被測(cè)的性質(zhì)，選則合適的有機(jī)物破壞法，使樣品中絕大部分有機(jī)物破壞。某些元素在破壞有機(jī)物的過程中無絲毫損失，又能在破壞有機(jī)物后測(cè)定是何物干擾。11. 游離藥物與結(jié)合藥物分析的方法有哪些？其原理是什么？P29-30平衡透析法、超濾法、超離心法、凝膠過濾法前兩法原理：利用半透膜只允許小分子藥物通過，而不允許大分子藥物通過的原理使游離性與結(jié)合性藥物分離12. 液液提取法的原理、影響因素及提取技

7、術(shù)。P30-33原理：藥物與干擾成分在互不相容的兩相溶劑中的分配系數(shù)不同，選擇性地提取生物基質(zhì)中的藥物影響因素：水相pH。提取溶劑種類、離子強(qiáng)度提取技術(shù)：通常在戴塞的試管中進(jìn)行，多半進(jìn)行一次提取，用酸堿回提時(shí)也只是一次，不考慮提取盡藥物13. 液固提取法的原理，固相萃取的主要步驟，及固相萃取的影響因素。P33-35原理：將樣品液通過合適的固相小柱，利用藥物與雜質(zhì)對(duì)固相小柱親和力的差別，用適當(dāng)溶劑沖洗、洗脫，使藥物得到凈化步驟：（1）固相柱選擇（2）固相柱處理（3）樣品液上樣（4）分離凈化（5）待測(cè)物洗脫提取率、選擇性的影響因素：（1）流速（2）樣品裝載量（3）固相柱使用要求（4）樣品上柱前的處

8、理14. 提取溶劑的蒸發(fā)方法。P36抽真空揮發(fā)或直接通入氣體使溶劑揮發(fā)15. 柱切換技術(shù)的原理。見PPT是一種在線固相分離技術(shù)：選用一個(gè)35cm長的短柱，用低溶劑強(qiáng)度的預(yù)處理流動(dòng)相使生物樣品凈化，富集切換閥后，分析流動(dòng)相將組分帶入分析柱分離測(cè)定測(cè)定結(jié)束后儀器自動(dòng)恢復(fù)開始狀態(tài)，準(zhǔn)備下次進(jìn)樣 16. 微透析技術(shù)的定義。P45（MD）是一種膜分離技術(shù)，利用膜透析原理，對(duì)細(xì)胞液進(jìn)行流動(dòng)性連續(xù)采樣，在不破壞生物體內(nèi)環(huán)境的情況下，直接插到生物活體內(nèi)采樣進(jìn)行原位測(cè)定。17. 基本概念P51-52生物介質(zhì)：指一種生物來源的物質(zhì)，能夠以可重復(fù)方式采集和處理。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：用于制備標(biāo)準(zhǔn)樣品和QC樣品的待測(cè)物的參比標(biāo)準(zhǔn)

9、，結(jié)構(gòu)上可以是物質(zhì)本身、其游離堿、酸、鹽、酯。標(biāo)準(zhǔn)樣品：在空白介質(zhì)中家人已知量待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制成的樣品，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算質(zhì)控樣品和未知樣品中待測(cè)物濃度。質(zhì)控樣品：在空白生物介質(zhì)中加入已知量待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制成的樣品，監(jiān)測(cè)生物分析方法的重復(fù)性和評(píng)價(jià)每一分析批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性。介質(zhì)效應(yīng)：樣品中存在除待測(cè)物以外的其他干擾物質(zhì)，對(duì)待測(cè)物響應(yīng)值造成直接或間接影響分析批：包括待測(cè)樣品、適當(dāng)數(shù)目的標(biāo)準(zhǔn)樣品和QC樣品的完整系列。18. 特異性的定義及考察方法。P52定義：指樣品中存在干擾成分的情況下分析方法能準(zhǔn)確、專一測(cè)定分析物的能力。考察方法：至少取六個(gè)不同個(gè)體空白樣品，采用擬定的方法

10、進(jìn)行測(cè)定，所得結(jié)果接近于定量限濃度的模擬樣品和用藥后的實(shí)際生物樣品比較，以證明內(nèi)源性物質(zhì)、相應(yīng)的代謝物、降解產(chǎn)物及其他共服藥物不干擾樣品測(cè)定19. 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍，結(jié)合實(shí)驗(yàn)進(jìn)行復(fù)習(xí)。P52-5420. 定量下限的定義、考察方法及要求。定義：指符合準(zhǔn)確度、精密度要求的生物樣品中藥物的最低定量濃度，其反映了方法的靈敏度?？疾旆椒ǎ喊礃?biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法制備樣品，至少制備5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品，按照擬定方法進(jìn)行測(cè)定，考察精密度與準(zhǔn)確度。要求：LLOQ的準(zhǔn)確度應(yīng)在真實(shí)濃度的80120范圍內(nèi)；精密度的RSD應(yīng)小于20；LLOQ限度要求：至少能滿足測(cè)定35個(gè)半衰期后生物樣品中的藥物濃度（或能檢測(cè)出Cmax的1/10

11、1/20時(shí)的藥物濃度），信噪比（S/N）一般大于5。21 精密度準(zhǔn)確度的定義、表示方法、考察方法和要求。準(zhǔn)確度：指用該方法測(cè)得的生物樣品中待測(cè)藥物濃度與其真實(shí)濃度的接近程度。表示方法：相對(duì)回收率（RR）或相對(duì)誤差（RE）要求：RR 85115（LLOQ附近80120） RE ±15（LLOQ附近±20）精密度：每次測(cè)定結(jié)果與多次測(cè)定的平均值的偏離程度。表示該分析方法的可重復(fù)性，可反映分析方法的可操作性。表示方法：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）要求： RSD一般應(yīng)小于15 LOQ附近RSD應(yīng)小于20。22. 需要進(jìn)行哪些穩(wěn)定性試驗(yàn)？（1） 短期室溫穩(wěn)定性（2） 長期儲(chǔ)存穩(wěn)定性（3）

12、凍融穩(wěn)定性（4） 儲(chǔ)備液穩(wěn)定性（5） 待測(cè)溶液穩(wěn)定性（6） 樣品處理過程穩(wěn)定性23. 提取回收率的定義、評(píng)價(jià)指標(biāo)和限度要求。指從生物樣本基質(zhì)中回收得到分析物質(zhì)的響應(yīng)值與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)產(chǎn)生的響應(yīng)值的百分比，用于評(píng)價(jià)樣品預(yù)處理方法。取待測(cè)藥物對(duì)準(zhǔn)品加入空白基質(zhì)中，制備高、中、低3個(gè)濃度QC樣品，每個(gè)濃度5個(gè)樣品按樣品處理方法處理，測(cè)定。 另取等量相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，不經(jīng)提取處理，直接測(cè)定。 內(nèi)標(biāo)（1個(gè)濃度5個(gè)QC樣品）也需進(jìn)行提取回收率試驗(yàn)。提取回收率限度要求：一般應(yīng)50且恒定；高、中濃度的RSD應(yīng)15%；低濃度的RSD應(yīng)20。 內(nèi)標(biāo)的提取回收率應(yīng)與被測(cè)物一致或相近，一般相差不超過±10%24

13、. 分析方法的質(zhì)量控制方法及限度要求。每個(gè)分析批生物樣品測(cè)定時(shí)應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測(cè)定高、中、低3個(gè)濃度的QC樣品，每個(gè)濃度至少雙樣品，QC樣品數(shù)不得少于未知樣品數(shù)的5%，且不得少于6個(gè)，并均勻分布在未知樣品測(cè)試順序中。限度要求：偏差一般應(yīng)小于15%，低濃度點(diǎn)小于20%，最多允許33%的質(zhì)控樣品結(jié)果超限，且不得均在同一濃度25. 血漿蛋白結(jié)合率的定義，測(cè)定常用的5種方法，平衡透析法原理。（第一組）定義：藥物血漿蛋白結(jié)合率是藥物與血漿蛋白結(jié)合的量占藥物總濃度的百分率，是藥物代謝動(dòng)力學(xué)的重要參數(shù)常用方法：（1）平衡透析法（2）超濾法）（3）超速離心法（4）光譜法（5）色譜法平衡透析法原理：半

14、透膜與蛋白質(zhì)易產(chǎn)生體積遷移效應(yīng)，對(duì)于帶電的蛋白質(zhì)可能產(chǎn)生Gibbs-Donna 效應(yīng)和以非特異性的透析設(shè)備表面的藥物吸附效應(yīng)26. 在鹽酸哌甲酯穩(wěn)定性考察實(shí)驗(yàn)中，采取的提高穩(wěn)定性的方法有哪些？分別從什么方面起到提高穩(wěn)定性的作用？（第三組）28. 基質(zhì)效應(yīng)的定義，來源，評(píng)定方法及消除方法。（第四組）基質(zhì)效應(yīng)：來源于生物樣品中的內(nèi)源組分和樣品處理后引入的雜質(zhì)，常對(duì)樣品的測(cè)定有顯著的干擾，并影響測(cè)定結(jié)果的穩(wěn)定性，這些影響和干擾被稱為基質(zhì)效應(yīng)。來源：內(nèi)源性雜質(zhì)指生物樣品中存在的有機(jī)和無機(jī)成分，經(jīng)前處理后仍存在于提取液中。外源性雜質(zhì)外源性組分在生物樣品中不存在，但同樣會(huì)帶來基質(zhì)效應(yīng)，由樣品前處理各步驟引

15、入。評(píng)定方法：（1）柱后灌注法（2）提取后添加法消除方法：（1）樣品前處理（2）同位素內(nèi)標(biāo)（3）色譜分離（4）質(zhì)譜分離29. 手性高效液相色譜法的分類。P151（第五組）（1）手性衍生化試劑法（2）手性流動(dòng)相添加法（3）手性固定相法30. Caco-2細(xì)胞模型用于什么類型的研究，花旗松素和落新婦苷在細(xì)胞中的轉(zhuǎn)運(yùn)情況如何？（第七組）是一種人克隆結(jié)腸腺癌細(xì)胞，結(jié)構(gòu)和功能類似于分化的小腸上皮細(xì)胞，具有微絨毛等結(jié)構(gòu)，并含有與小腸刷狀緣上皮相關(guān)的酶系。Caco-2細(xì)胞與人小腸上皮細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上相似，具有相同的細(xì)胞極性和緊密連接?？梢杂脕磉M(jìn)行模擬體內(nèi)腸轉(zhuǎn)運(yùn)的實(shí)驗(yàn)。31.免疫分析法的原理。P178-181,

16、當(dāng)標(biāo)記抗原與未標(biāo)記抗原同置于含有一定抗體的反應(yīng)體系中，標(biāo)記抗原（Ag）與抗體（Ab）發(fā)生競爭結(jié)合反應(yīng)32. 免疫反應(yīng)的基本條件，什么是抗原，藥物屬于什么類型抗原。特異抗體的制備和鑒定?；緱l件：特異性抗體、標(biāo)記抗原、未標(biāo)記抗原（標(biāo)準(zhǔn)品）抗原：指在機(jī)體中引起特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)的物質(zhì)藥物大多為小分子物質(zhì)，認(rèn)為是半抗原，與蛋白質(zhì)等載體物質(zhì)結(jié)合后成為完全抗原特異抗體的制備：抗原+福氏佐劑混合形成穩(wěn)定的油包水乳劑；注射部位：多采用腳掌、腹股溝淋巴結(jié)、大腿肌肉、皮下及靜脈等；時(shí)間：間隔一定時(shí)間注射一次，數(shù)月后可得滿意的抗血清。當(dāng)抗體達(dá)一定量時(shí)，及時(shí)采血，分取血清（抗體），經(jīng)純化分離后對(duì)抗體進(jìn)行鑒定。鑒定：

17、（1） 滴度滴度（titer）即效價(jià)，以抗血清的稀釋度表示，稀釋倍數(shù)越大，滴度越高，效價(jià)也越高（2） 特異性特異性（specificity）即免疫反應(yīng)的專屬性，用交叉反應(yīng)率來表示（3）活度活度（activity）指抗體與相應(yīng)抗原的親和力，即抗原抗體結(jié)合的牢固度。33. 免疫分析法的分類P187，游離與結(jié)合標(biāo)記藥物的分離方法。P189-190分類：按標(biāo)記物不同 ，分為：放射免疫分析法（RIA）酶免疫分析法（EIA） 熒光免疫分析法（FIA）化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）根據(jù)抗原抗體結(jié)合反應(yīng)平衡后，是否將結(jié)合物（B）與游離物（F）分離，分為：均相免疫非均相免疫分離方法：層析法、沉淀法、吸附法、微孔

18、濾膜法、固相法、雙抗體法34. 藥代動(dòng)力學(xué)的定義P233。臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究的對(duì)象有哪些？各自屬于哪個(gè)臨床試驗(yàn)階段？目的分別是什么？（第二組）定義：藥物代謝動(dòng)力學(xué)（ADME）是研究藥物在生物體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄過程及規(guī)律的一門學(xué)科。應(yīng)用動(dòng)力學(xué)原理與數(shù)學(xué)處理方法，定量描述體內(nèi)藥物及代謝物濃度隨時(shí)間變化的動(dòng)態(tài)規(guī)律，探討藥物在體內(nèi)的代謝途徑。臨床研究對(duì)象：（1）健康志愿者的藥代動(dòng)力學(xué)研究【1期】 探討藥物在體內(nèi)吸收、分布和消除的動(dòng)態(tài)變化特點(diǎn)（2）目標(biāo)適應(yīng)癥患者的藥代動(dòng)力學(xué)研究【2、3期】 當(dāng)目標(biāo)適應(yīng)癥患者的疾病狀態(tài)對(duì)藥物的藥代動(dòng)力學(xué)產(chǎn)生重要影響時(shí)應(yīng)進(jìn)行此試驗(yàn)（3）特殊人群的藥代動(dòng)力學(xué)研究【3、

19、4期】肝腎功能損害患者、老年和兒童患者可能影響藥物代謝、排泄，因此進(jìn)行研究，指導(dǎo)合理用藥，保證安全有效（4）群體藥代動(dòng)力學(xué)【】關(guān)于目標(biāo)患者個(gè)體之間藥物濃度變異來源與相關(guān)性的研究35. 生物利用度和生物等效性試驗(yàn)均是評(píng)價(jià)制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)，但兩者的目的各有側(cè)重，且在藥品研發(fā)的不同階段發(fā)揮不同作用。P233整段話（第二組）生物利用度和生物等效性均是評(píng)價(jià)制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)，前者反映藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi)的程度和速度，是新藥研究過程中選擇合適給藥途徑和確定用藥方案的重要依據(jù)之一。后者重點(diǎn)在以預(yù)先確定的等效標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行的比較，是保證含同一藥物活性成分的不同制劑體內(nèi)行為一致性的依據(jù)，是判斷研發(fā)產(chǎn)品是否可替換已上市藥品使用依據(jù)。兩者在不同研發(fā)階段有不同作用。36