血型鑒定與交叉配血

1、一、ABO血型鑒定l鹽水凝集法l玻片法l試管法l凝膠微柱法l檢測(cè)紅細(xì)胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗體，依據(jù)抗原抗體存在的情況判斷血型。 l常規(guī)的方法包括正向定型與反向定型正向定型：已知抗體特異性的血清檢查紅細(xì)胞抗原反向定型：已知血型紅細(xì)胞檢查血清抗體血型鑒定原理血型鑒定原理表示凝集，表示無(wú)凝集表示凝集，表示無(wú)凝集對(duì)抗血清的要求l高度特異，只能與相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集，無(wú)非特異性凝集，l高效價(jià)，抗A血清效價(jià)在1:128以上，抗B血清效價(jià)在1:64以上。l高親和力，15秒內(nèi)出現(xiàn)凝集，其強(qiáng)度為3分鐘時(shí)凝塊1mm。l無(wú)冷凝集素。l無(wú)菌。分離血清后56，30min滅活。ABO 血血 型型

2、鑒鑒 定定1生理鹽水凝集法l ABO血型抗體一般是IgM，屬于完全抗體lIgM抗體分子鏈較長(zhǎng)，能克服紅細(xì)胞表面排斥力，同時(shí)分子量較大，它能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合，在生理鹽水中發(fā)生肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象。ABO 血血 型型 鑒鑒 定定原理原理IgM抗體凝集紅細(xì)胞示意圖IgM在鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生凝集在鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生凝集 玻片法：操作簡(jiǎn)單，不需要離心，適于大規(guī)模血型普查。反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，易忽略較弱的凝集而導(dǎo)致定型錯(cuò)誤。不適于反定型。ABO 血血 型型 鑒鑒 定定鏡檢證實(shí)鏡檢證實(shí)ABO 血血 型型 鑒鑒 定定（玻片法）（玻片法）抗A血清1滴抗B血清1滴加5紅細(xì)胞懸液1滴，混勻連續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)玻片15min凝集無(wú)凝集抗A+B

3、血清1滴試管法：需時(shí)間短，適用于急診定型?？烧炊ㄐ?。可發(fā)現(xiàn)亞型或較弱抗原抗體反應(yīng)，結(jié)果判斷可靠，為常規(guī)檢查方法。ABO 血血 型型 鑒鑒 定定正反定型結(jié)果不一致的解決辦法首先重復(fù)試驗(yàn)，如果仍然不符繼續(xù)下列試驗(yàn)。重新采集新鮮血液標(biāo)本，以糾正因污染或樣本錯(cuò)誤造成的不符合。多次洗滌被測(cè)紅細(xì)胞和標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，除去可能會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果的血漿中或紅細(xì)胞保存試劑中的化學(xué)成分。用抗A1、抗A+B檢測(cè)紅細(xì)胞。ABO血型鑒定血型鑒定（鹽水法）注意事項(xiàng)（鹽水法）注意事項(xiàng)如懷疑血清中有抗A1，可用數(shù)份A2紅細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)。如果試驗(yàn)結(jié)果未見(jiàn)凝集，應(yīng)將反應(yīng)管至少在室溫和40分別放置30min，用顯微鏡檢查。若懷疑是由于抗

4、原減弱造成的正反定型不符，可進(jìn)一步做木瓜酶試驗(yàn)、直接抗球蛋白試驗(yàn)、吸收放散試驗(yàn)等加以鑒別。正反定型結(jié)果不一致的解決辦法ABO血型鑒定血型鑒定（鹽水法）注意事項(xiàng)（鹽水法）注意事項(xiàng)2凝膠微柱法l凝膠具有分子篩效應(yīng)和親合效應(yīng)l親合效應(yīng)：紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合l分子篩效應(yīng)：低速離心后，凝集紅細(xì)胞懸浮在凝膠中，而未被抗體結(jié)合的紅細(xì)胞則沉于凝膠底部（管底尖部）。l結(jié)果觀察：肉眼/血型分析儀ABO 血血 型型 鑒鑒 定定l操作標(biāo)準(zhǔn)化，結(jié)果特異、準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好、靈敏度高。l可手工、半自動(dòng)及全自動(dòng)操作l不足之處：需要特殊試劑和離心機(jī)成本較高。ABO 血型鑒定血型鑒定（凝膠微柱法）（凝膠微柱法）【原理】凝膠

5、具有分子篩效應(yīng)和親合效應(yīng)，在微株凝膠介質(zhì)中紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，經(jīng)低速離心，凝集的紅細(xì)胞懸浮在凝膠上層，而未和抗體結(jié)合的紅細(xì)胞則沉于凝膠底部（管底尖部）。【器材】微量吸樣槍，一次性吸頭，微柱凝膠卡專用水平離心機(jī)?！驹噭?特異性凝膠微柱卡ABO 血型鑒定血型鑒定（凝膠微柱法）（凝膠微柱法）【操作】（1）將被檢者紅細(xì)胞（不用洗滌）配成23生理鹽水懸液，向已標(biāo)記好的特異性凝膠微柱卡的微管反應(yīng)腔內(nèi)加50L.（2）立即水平離心1000r/min, 10min.（3）觀察及判斷血型結(jié)果陽(yáng)性：對(duì)照管細(xì)胞沉淀在管底，檢測(cè)管凝集塊在膠上或膠中。 陰性：對(duì)照管和檢測(cè)管細(xì)胞沉淀均在管底。 試驗(yàn)失敗：對(duì)照管細(xì)胞

6、在膠上或 膠中，應(yīng)重新做試驗(yàn)。（4）報(bào)告方式：同生理鹽水法。ABO 血型鑒定血型鑒定（凝膠微柱法）（凝膠微柱法）注意事項(xiàng)1. 離心機(jī)選擇：一般使用微柱凝膠卡專用水平離心機(jī)。使凝集復(fù)合物不偏向一側(cè)，特別是陰性結(jié)果不偏向管底之一側(cè)，以免造成弱陽(yáng)性假象。2. 操作：蔣待檢者的稀釋后的懸紅用微量加樣槍分別加在A.B.D和陰性對(duì)照孔各50ul3. 離心：為了應(yīng)用不同離心半徑和不同離心機(jī)進(jìn)行凝膠試驗(yàn)，應(yīng)通過(guò)試驗(yàn)設(shè)定每臺(tái)離心機(jī)的最佳時(shí)間和速度。ABO 血型鑒定血型鑒定（凝膠微柱法）（凝膠微柱法）lABO血型鑒定錯(cuò)誤可以引起嚴(yán)重的后果。l鑒定結(jié)果錯(cuò)誤因素主要有技術(shù)問(wèn)題及ABO血型本身的問(wèn)題。二、交叉配血 l交

7、叉配血是在輸血前必須做的試驗(yàn)。l交叉配血中最重要的是ABO血型配合，必需ABO血型相同，且交叉配血無(wú)凝集才能輸血。（一）交叉配血的重要性（二）交叉配血一些基本概念 l 概念：是檢查供血者與受血者是否含有不相合的抗原和抗體成分的試驗(yàn)，主要是檢查受血者血清中有無(wú)破壞獻(xiàn)血者RBC的抗體。l供血者紅細(xì)胞與受血者血清反應(yīng)（主側(cè)交叉配血） l受血者紅細(xì)胞與供血者血清反應(yīng)（次側(cè)交叉配血）獻(xiàn)血者獻(xiàn)血者 受血者受血者紅細(xì)胞紅細(xì)胞 紅細(xì)胞紅細(xì)胞血清血清 血清血清交叉配血目的交叉配血目的發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)ABO血型鑒定的錯(cuò)誤。血型鑒定的錯(cuò)誤。發(fā)現(xiàn)不規(guī)則凝集素。如冷凝集素。發(fā)現(xiàn)不規(guī)則凝集素。如冷凝集素。發(fā)現(xiàn)其他血型抗體和一些不

8、規(guī)則抗體。發(fā)現(xiàn)其他血型抗體和一些不規(guī)則抗體。（三）交叉配血方法 l1、室溫鹽水配血法（只能檢出IgM型血型抗體）l2、聚凝胺法l3、抗人球蛋白法l4、蛋白酶法l5、微柱凝膠法方法選擇原則方法選擇原則無(wú)輸血及妊娠史者，只需作鹽水配血。無(wú)輸血及妊娠史者，只需作鹽水配血。有輸血史，婦女有原因不明的流產(chǎn)史及新生有輸血史，婦女有原因不明的流產(chǎn)史及新生兒溶血病者，應(yīng)用木瓜酶或抗人球蛋白、聚凝兒溶血病者，應(yīng)用木瓜酶或抗人球蛋白、聚凝胺介質(zhì)法。胺介質(zhì)法。有多發(fā)性骨髓瘤，進(jìn)行性結(jié)核，肝損傷，輸有多發(fā)性骨髓瘤，進(jìn)行性結(jié)核，肝損傷，輸過(guò)右旋糖酐的病人，為避免假陽(yáng)性，作抗人球過(guò)右旋糖酐的病人，為避免假陽(yáng)性，作抗人球蛋

9、白配血。蛋白配血。 1、室溫鹽水配血法【原理】天然IgM類血型抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞在室溫下的鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)凝集反應(yīng)。通過(guò)離心，觀察受血者血清與供血者紅細(xì)胞（主側(cè)）以及受血者紅細(xì)胞與供血者血清（次側(cè)）之間有無(wú)凝集的現(xiàn)象，判斷受血者與供血者之間有無(wú)ABO血型不合的現(xiàn)象。交交 叉叉 配配 血血判斷配血是否相合ABO同型配血，主、次側(cè)均無(wú)溶血及凝集，血型相合，可以輸血；主、次側(cè)任何一管發(fā)生溶血或凝集，不可輸血，應(yīng)查找原因。異型配血時(shí)，主側(cè)無(wú)凝集無(wú)溶血，次側(cè)有凝集無(wú)溶血，可以輸少量血；如主側(cè)、次側(cè)均不凝集或主側(cè)凝集，不能輸血，需查找原因交交 叉叉 配配 血血（鹽水凝集法）（鹽水凝集法）報(bào)告方式（1）受血者x

10、xx（X型）血清供血者xxx（X型）紅細(xì)胞 凝集與否及強(qiáng)弱程度（2）供血者xxx（X型）血清受血者xxx（X型）紅細(xì)胞 凝集與否及強(qiáng)弱程度（3）受血者xxx與供血者xxx配血是否相合交交 叉叉 配配 血血（鹽水凝集法）（鹽水凝集法）主側(cè)配血管次側(cè)配血管DC1滴PS1滴PC1滴DS1滴1000r/min離心1min觀察上層液有無(wú)溶血輕搖試管肉眼觀察有無(wú)凝集有凝集（復(fù)查）無(wú)凝集鏡檢證實(shí)鏡檢證實(shí)交叉配血鹽水介質(zhì)法操作示意圖交叉配血鹽水介質(zhì)法操作示意圖【注意事項(xiàng)】1.如果對(duì)患者的輸血史或妊辰史不明，必須使用48h內(nèi)的標(biāo)本。2.不能使用溶血標(biāo)本。3.配血后，受血者/供血者的全部標(biāo)本須于26冰箱保存7d以

11、備復(fù)查。交交 叉叉 配配 血血（鹽水凝集法）（鹽水凝集法）【方法學(xué)評(píng)價(jià)】 本法簡(jiǎn)易、經(jīng)濟(jì)、快速，缺點(diǎn)是僅用于檢查ABO血型系統(tǒng)的IgM血型抗體是否相配，不能檢出不相配的IgG血型抗體。交交 叉叉 配配 血血（鹽水凝集法）（鹽水凝集法）2、聚凝胺介質(zhì)配血法（MPT）【原理】：聚凝胺是帶有高價(jià)陽(yáng)離子的多聚季氨鹽，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，減少細(xì)胞間排斥力，縮小了其間之距離，出現(xiàn)非特異性凝集。低離子強(qiáng)度溶液降低紅細(xì)胞的Zeta電位，可進(jìn)一步增加抗原抗體間的吸引力。枸櫞酸鹽解聚液可消除聚凝胺的正電荷，使非特異性凝集消散，但I(xiàn)gM或IgG類血型抗體與紅細(xì)胞產(chǎn)生的特異性凝集不會(huì)散

12、開(kāi)。主側(cè)配血管次側(cè)配血管Dc1滴PS1滴PC1滴DS1滴主側(cè)、次側(cè)配血管凝集凝集不凝集：試劑無(wú)效不凝集：試劑無(wú)效交叉配血凝聚胺介質(zhì)法操作示意圖交叉配血凝聚胺介質(zhì)法操作示意圖低離子溶液0.6ml混勻混勻加凝聚胺加凝聚胺2滴，滴，混勻混勻15s棄去上清棄去上清1000r/min離心1min加解聚液2滴鏡檢判斷配血是否相合1分鐘分鐘【方法學(xué)評(píng)價(jià)】 聚凝胺介質(zhì)法可加快凝集反應(yīng)速度，使原來(lái)在鹽水介質(zhì)中不能凝集紅細(xì)胞的抗體發(fā)生凝集，提高反應(yīng)靈敏度，能檢測(cè)IgM、 IgG等引起溶血反應(yīng)的幾乎所有規(guī)則與不規(guī)則抗體，適用于各類輸血患者的配血。故該法具有快速、靈敏、結(jié)果可靠、能撿出完全抗體及不完全抗體等優(yōu)點(diǎn)。交交

13、 叉叉 配配 血血（MPT）【方法學(xué)評(píng)價(jià)】本法是確定不完全抗體最可靠的方法，但操作較繁瑣，需多次洗滌，需要時(shí)間長(zhǎng)，試劑較貴，故始終未能成為臨床常規(guī)的配血方法。交叉配血交叉配血（抗人球蛋白法）（抗人球蛋白法）交叉配血試驗(yàn)的臨床意義交叉配血試驗(yàn)的臨床意義l 1 1進(jìn)一步驗(yàn)證受血者和供血者血型鑒進(jìn)一步驗(yàn)證受血者和供血者血型鑒定是否正確，發(fā)現(xiàn)定是否正確，發(fā)現(xiàn)ABOABO系統(tǒng)的不規(guī)則抗體，系統(tǒng)的不規(guī)則抗體，以避免血型鑒定錯(cuò)誤而導(dǎo)致的輸血后的嚴(yán)以避免血型鑒定錯(cuò)誤而導(dǎo)致的輸血后的嚴(yán)重溶血反應(yīng)。重溶血反應(yīng)。 l 2 2發(fā)現(xiàn)其他的血型抗體發(fā)現(xiàn)其他的血型抗體 受、供血者如果受、供血者如果ABOABO血型相同，但其

14、他血型不同時(shí)，在交叉配血型相同，但其他血型不同時(shí)，在交叉配血時(shí)也可出現(xiàn)凝集，為避免異型血輸入后的血時(shí)也可出現(xiàn)凝集，為避免異型血輸入后的溶血反應(yīng)，在目前許多實(shí)驗(yàn)室都不能進(jìn)行稀溶血反應(yīng)，在目前許多實(shí)驗(yàn)室都不能進(jìn)行稀有血型鑒定的情況下，全靠交叉配血發(fā)現(xiàn)這有血型鑒定的情況下，全靠交叉配血發(fā)現(xiàn)這些血型的不同及免疫抗體的存在。些血型的不同及免疫抗體的存在。l 3.當(dāng)受血者一次輸血超過(guò)16002000m1，或在48小時(shí)內(nèi)輸入5L或更多血時(shí),稱為大量輸血,這時(shí)就需要多個(gè)供血者的血液,在配血時(shí)不但受血者和供血者之間要交叉配血,多個(gè)供血者之間也應(yīng)互相交叉配血,為保證受血者的安全，要求主側(cè)、次側(cè)及獻(xiàn)血員之間交叉配血

15、均不凝集時(shí)，方可輸血。l 4.在急診配血時(shí), 對(duì)急需情況可采用試管法配血，在15min內(nèi)發(fā)血。對(duì)特急情況應(yīng)立即發(fā)給O型濃縮紅細(xì)胞或低凝集價(jià)的O型全血。然后盡快復(fù)查血型和配血，如表現(xiàn)有配血禁忌，應(yīng)立即通知負(fù)責(zé)醫(yī)師及時(shí)處理。交叉配血試驗(yàn)的注意事項(xiàng)l1用于交叉配血的病人（受血者）血液標(biāo)用于交叉配血的病人（受血者）血液標(biāo)本應(yīng)該是抽取的新鮮血，供血者的標(biāo)本是本應(yīng)該是抽取的新鮮血，供血者的標(biāo)本是剛從血袋剪下來(lái)的原已加熱封閉兩端小管剛從血袋剪下來(lái)的原已加熱封閉兩端小管的血液。的血液。l 2采用試管法作交叉配血試驗(yàn)，最好采用試管法作交叉配血試驗(yàn)，最好不用玻片法。不用玻片法。l3 3用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞去除血漿

16、，預(yù)防用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞去除血漿，預(yù)防纖維凝塊的形成。纖維凝塊的形成。l4 4配血管中發(fā)生溶血現(xiàn)象，表明有抗原抗配血管中發(fā)生溶血現(xiàn)象，表明有抗原抗體反應(yīng)同時(shí)還有補(bǔ)體參與，是配血不合的體反應(yīng)同時(shí)還有補(bǔ)體參與，是配血不合的嚴(yán)重情況，應(yīng)十分重視。嚴(yán)重情況，應(yīng)十分重視。l5 5鹽水配血試驗(yàn)陰性，但有反復(fù)輸血史或鹽水配血試驗(yàn)陰性，但有反復(fù)輸血史或妊娠史的受血者，應(yīng)加酶法、抗人球蛋白妊娠史的受血者，應(yīng)加酶法、抗人球蛋白法等配血。法等配血。l 6 6為確保輸血的安全，應(yīng)輸同型血。為確保輸血的安全，應(yīng)輸同型血。三、血型鑒定與交叉配血的異常及其克服三、血型鑒定與交叉配血的異常及其克服辦法辦法l（一）責(zé)任性錯(cuò)誤

17、（一）責(zé)任性錯(cuò)誤l 血型鑒定和交叉配血的技術(shù)并不復(fù)雜，血型鑒定和交叉配血的技術(shù)并不復(fù)雜，因配血錯(cuò)誤而導(dǎo)致輸入不合血液的事故中，因配血錯(cuò)誤而導(dǎo)致輸入不合血液的事故中，大多數(shù)是因?yàn)椴粐?yán)格執(zhí)行操作規(guī)程或操作大多數(shù)是因?yàn)椴粐?yán)格執(zhí)行操作規(guī)程或操作過(guò)程中精神不集中所致，因此為杜絕責(zé)任過(guò)程中精神不集中所致，因此為杜絕責(zé)任性錯(cuò)誤首先應(yīng)該熟悉操作規(guī)程并嚴(yán)格執(zhí)行。性錯(cuò)誤首先應(yīng)該熟悉操作規(guī)程并嚴(yán)格執(zhí)行。 l（二）假（二）假 陰陰 性性l1.1.標(biāo)準(zhǔn)血清不符合要求標(biāo)準(zhǔn)血清不符合要求l2.2.被檢紅細(xì)胞抗原性減弱被檢紅細(xì)胞抗原性減弱l3.3.紅細(xì)胞懸液濃度配置不當(dāng)紅細(xì)胞懸液濃度配置不當(dāng)l4.4.將溶血反應(yīng)誤認(rèn)為不凝集將

18、溶血反應(yīng)誤認(rèn)為不凝集l5.5.血型物質(zhì)的中和作用血型物質(zhì)的中和作用 l（三）假（三）假 陽(yáng)陽(yáng) 性性l 1.1.紅細(xì)胞呈緡錢(qián)狀排列紅細(xì)胞呈緡錢(qián)狀排列l(wèi) 2.2.冷凝集冷凝集l 3.3.全凝集與多凝集全凝集與多凝集l 4.4.類類B B抗原抗原l 5.5.自身免疫性溫性抗體自身免疫性溫性抗體冷凝集l冷凝集素是指冷反應(yīng)型抗紅細(xì)胞抗體，這些冷凝集素是指冷反應(yīng)型抗紅細(xì)胞抗體，這些自身抗體只能在低溫時(shí)與紅細(xì)胞膜相關(guān)抗原自身抗體只能在低溫時(shí)與紅細(xì)胞膜相關(guān)抗原結(jié)合。疑為存在冷凝集時(shí)，正定型采用經(jīng)結(jié)合。疑為存在冷凝集時(shí)，正定型采用經(jīng)37度生理鹽水洗滌的紅細(xì)胞度生理鹽水洗滌的紅細(xì)胞3次，反定型采用次，反定型采用患

19、者經(jīng)患者經(jīng)4度放置度放置1hr后分離的血清，將反應(yīng)管后分離的血清，將反應(yīng)管放放37度水浴度水浴5min后觀察結(jié)果。交叉配血存在后觀察結(jié)果。交叉配血存在冷凝集現(xiàn)象時(shí)，仍然認(rèn)為交叉配血是相合的，冷凝集現(xiàn)象時(shí)，仍然認(rèn)為交叉配血是相合的，可以輸血。但需提醒臨床保溫輸血?？梢暂斞?。但需提醒臨床保溫輸血。紅細(xì)胞呈緡錢(qián)狀排列l(wèi)某些疾病如肝病、腎炎因患者血清中白蛋某些疾病如肝病、腎炎因患者血清中白蛋白含量低而致球蛋白含量相對(duì)或絕對(duì)性增白含量低而致球蛋白含量相對(duì)或絕對(duì)性增高，使紅細(xì)胞成錢(qián)串狀排列，外觀類似凝高，使紅細(xì)胞成錢(qián)串狀排列，外觀類似凝集，真與假的區(qū)別是在鏡下觀察時(shí)，假凝集，真與假的區(qū)別是在鏡下觀察時(shí)，假

20、凝集紅稀薄成錢(qián)串狀排列，形狀基本完整，集紅稀薄成錢(qián)串狀排列，形狀基本完整，加一滴等滲鹽水于玻片上并混勻后錢(qián)串狀加一滴等滲鹽水于玻片上并混勻后錢(qián)串狀排列消失，而真凝集加等滲鹽水紅細(xì)胞不排列消失，而真凝集加等滲鹽水紅細(xì)胞不會(huì)散開(kāi)。會(huì)散開(kāi)。全凝集或多凝集現(xiàn)象l 正常人紅細(xì)胞上有正常人紅細(xì)胞上有T抗原，血清中有抗抗原，血清中有抗T，但因紅，但因紅細(xì)胞表面存在的唾液酸使細(xì)胞表面存在的唾液酸使T抗原無(wú)活性，如果紅抗原無(wú)活性，如果紅細(xì)胞被細(xì)菌污染，細(xì)菌酶消化了紅細(xì)胞表面的唾細(xì)胞被細(xì)菌污染，細(xì)菌酶消化了紅細(xì)胞表面的唾液酸，暴露出液酸，暴露出T抗原而被激活，可與多數(shù)人血清抗原而被激活，可與多數(shù)人血清凝集稱為多凝集，如與所有人血清都凝集稱為全凝集稱為多凝集，如與所有人血清都凝集稱為全凝集。出現(xiàn)這兩種現(xiàn)象時(shí)可用多份凝集。出現(xiàn)這兩種現(xiàn)象時(shí)可用多份AB型血清加以型血清加以證實(shí)，因此種現(xiàn)象與證實(shí)，因此種現(xiàn)象與AB型血清也發(fā)生凝集，應(yīng)