注射用清開靈凍干粉體外抗菌活性研究

1、注射用清開靈凍干粉體外抗菌活性研究    The farmers are the founders of civilization and prosperity.  Children and fools cannot lie.                     作者：李東黃繼華張淑華楊芳炬The farmers are the founder

2、s of civilization and prosperity.  【摘要】  目的：研究注射用清開靈凍干粉對臨床分離致病菌的體外抗菌活性。方法：注射用清開靈凍干粉與市售清開靈注射液作比較，采用二倍稀釋法，測定注射用清開靈凍干粉濃縮液對臨床分離的47株致病菌的最低抑菌濃度（MIC）及最低殺菌濃度（MBC），觀察注射用清開靈凍干粉體外抗菌活性。結(jié)果：對金葡菌、大腸埃希菌、銅綠假單孢菌、肺炎克雷伯菌，注射用清開靈凍干粉與市售清開靈注射液均顯示出良好的體外抗菌活性，注射用清開靈凍干粉體外抗菌活性強(qiáng)于市售清開靈注射液。按藥液稀釋度計(jì)算，注射用清開靈凍干粉濃縮液對金葡菌、

3、大腸埃希菌、銅綠假單孢菌、肺炎克雷伯菌的MIC和 MBC分別為市售清開靈注射液的1/41/2()。結(jié)論：注射用清開靈凍干粉對臨床分離的致病菌，具有較好的抗菌活性，且略優(yōu)于市售清開靈注射液。 【關(guān)鍵詞】  注射用清開靈凍干粉；最低抑菌濃度；最低殺菌濃度Money is the root of all evil.  清開靈由金銀花、黃芩、梔子、板藍(lán)根、珍珠母、水牛角、膽酸等中藥組成，具清熱解毒、醒神開竅之功效。其有效成分金銀花、板藍(lán)根、黃芩、梔子均具有抗病原微生物作用，尤其對臨床常見致病菌具有抑制和殺滅作用1-3。近年來對清開靈抗菌的報(bào)道以臨床觀察

4、為主4,5，卻鮮有實(shí)驗(yàn)室研究報(bào)道。清開靈凍干粉屬藥物新劑型，擬用于靜脈滴注，本試驗(yàn)特采用二倍稀釋法，測定其體外抗菌活性，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。    1實(shí)驗(yàn)材料      1.1藥物與試劑注射用清開靈凍干粉，試驗(yàn)用藥為凍干前濃縮液，生藥計(jì)377.00mg·ml1，提取物計(jì)84.20mg·ml1，廣州歐華醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司提供。市售清開靈注射液，10ml/支，生藥含量以75mg·ml1計(jì)，其中含黃芩苷50mg、總氮25mg，神威藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(醫(yī)藥學(xué)/臨床醫(yī)學(xué)論文 )。頭

5、孢曲松，批號0601026，海南三洋藥業(yè)有限公司贈送。Hide one's talents in a napkin.      1.2試驗(yàn)菌株及培養(yǎng)基金葡球菌10株，表皮葡萄球菌5株，肺炎鏈球菌5株，腸球菌屬7株（腸球菌2株，糞腸球菌5株），大腸埃希菌5株，銅綠假單孢菌5株，肺炎克雷伯菌5株，沙門氏菌5株，共計(jì)47株。均為20052006年于北京、成都等地區(qū)收集的臨床分離致病菌，經(jīng)API方法及常規(guī)方法重新鑒定后使用。質(zhì)控菌株為銅綠假單孢菌ATCC27853，金葡球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922，各1株，由四川抗菌素工

6、業(yè)研究所提供。MH培養(yǎng)基，中國藥品生物制品檢定所產(chǎn)品。Politeness costs nothing and gains everything.      2方法    2.1最低抑菌濃度（MIC）的測定    采用瓊脂二倍稀釋法6測定注射用清開靈凍干粉、市售清開靈液對受試菌株的最低抑菌濃度（MIC）。分別取注射用清開靈凍干粉濃縮液、市售清開靈注射液原液20ml，加至40ml融化的瓊脂培養(yǎng)基（融化至50），混勻，從中吸出20ml至滅菌平皿內(nèi)，余下的20ml瓊脂中再

7、添加入20ml無藥瓊脂混勻，再從中吸出20ml至下一個(gè)平皿內(nèi)。以此類推，兩倍稀釋制備含藥終濃度為原液濃度1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/1024、1/2048（注射用清開靈凍干粉濃縮液相當(dāng)于生藥濃度188.50、94.25、47.13、23.56、11.78、5.89、2.95、1.47、0.74、0.37、0.18mg·ml1）的系列平皿，冷卻后再分別用多點(diǎn)接種儀（Denley A400）于各平皿表面接種細(xì)菌，菌液終濃度為105CFU·ml1。置于37中培養(yǎng)24小時(shí)，觀察結(jié)果，以無細(xì)菌生長平皿內(nèi)藥物的

8、最低濃度為該菌的最低抑菌濃度（MIC）。以頭孢曲松為陽性對照藥，其終濃度分別為128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125g·ml1。A clear conscience is a sure card.      2.2最低殺菌濃度（MBC）的測定    選取2株金葡菌、2株表葡菌、2株大腸埃希菌、2株銅綠假單孢菌和2株肺炎克雷伯菌作為受試菌，先用液體二倍稀釋法6測定出注射用清開靈凍干粉濃縮液、市售清開靈注射液對試驗(yàn)菌的MIC值，再將未見細(xì)菌生長管的培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種于無藥瓊脂

9、表面，37繼續(xù)培養(yǎng)18小時(shí)，仍無細(xì)菌生長的藥物最低濃度為最低殺菌濃度（MBC）。    3結(jié)果Children and fools cannot lie.      3.1MIC測定結(jié)果    注射用清開靈凍干粉濃縮液、市售清開靈注射液對所試臨床分離致病菌的最低抑菌濃度（MIC）見表1。按內(nèi)容性質(zhì)和研究方法的不同可以把論文分為理論性論文、實(shí)驗(yàn)性論文、描述性論文和設(shè)計(jì)性論文.      由表中可知，注射用清開靈凍干粉濃

10、縮液對所試金葡菌、表葡菌、肺炎鏈球菌及腸球菌屬，均具有較好的抗菌作用，MIC值范圍在1/10241/4原液濃度（相當(dāng)于生藥含量0.3794.25mg·ml1）。對所試大腸埃希菌、銅綠假單孢菌、肺炎克雷伯菌、沙門氏菌也具有一定抗菌活性，MIC值范圍為1/5121/2原液濃度（相當(dāng)于生藥含量0.74188.50mg·ml1）。    市售清開靈注射液對金葡菌、表葡菌、肺炎鏈球菌及腸球菌的MIC值范圍在1/2561/2原液濃度。對金葡菌、大腸埃希菌、銅綠假單孢菌、肺炎克雷伯菌，按藥液稀釋度計(jì)算，則注射用清開靈凍干粉濃縮液體外抗菌活性強(qiáng)于市售

11、清開靈注射液，其MIC50、MIC90為市售清開靈注射液的1/41/2。表1  注射用清開靈凍干粉、市售清開靈注射液最低抑菌濃度（MIC） 注射用清開靈凍干粉濃縮液、市售清開靈注射液對所試臨床分離致病菌的最低殺菌濃度（MBC）見表2。表2  注射用清開靈凍干粉濃縮液、市售清開靈注射液由表中可知，注射用清開靈凍干粉濃縮液、市售清開靈注射液對所試金葡菌、表葡菌、大腸埃希菌及銅綠假單孢菌，均主要呈現(xiàn)為抑菌作用。注射用清開靈凍干粉濃縮液的MBC為1/641/2原液濃度（相當(dāng)于生藥含量5.89188.50mg·ml1），是MIC的4-8倍以上。

12、對金葡菌、銅綠假單孢菌，按藥液稀釋度計(jì)算，則注射用清開靈凍干粉濃縮液體外抗菌活性強(qiáng)于市售清開靈注射液，其MBC為市售清開靈注射液的1/41/2。    4討論Nightingales will not sing in a cage.      本文研究結(jié)果表明，注射用清開靈凍干粉濃縮液與市售清開靈注射液對金葡菌、表葡菌、大腸埃希菌、銅綠假單孢菌和肺炎克雷伯菌等常見臨床致病菌均顯示出良好的體外抗菌活性。研究結(jié)果還表明，按藥液稀釋度計(jì)算，注射用清開靈凍干粉濃縮液體外抗菌活性強(qiáng)于市售清開靈注射液。Every m

13、an has his hobby-horse.      清開靈作為全國中醫(yī)醫(yī)院常備抗感染藥，其抗菌效果已有較多臨床報(bào)道4,5。其組方源于安宮牛黃丸，由板藍(lán)根、金銀花、黃芩、桅子、水牛角、珍珠母、膽酸等中藥組成，具清熱解毒、化痰通絡(luò)、醒神開竅之功效。其中，金銀花味甘，性寒，能清熱解毒，涼散風(fēng)熱；板藍(lán)根味苦，性寒，能清熱解毒，涼血利咽；黃芩味苦，性寒，能清熱燥濕，瀉火解毒7。現(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示1,2,3,8，金銀花、板藍(lán)根及黃芩對多種致病性細(xì)菌均有不同程度的抑制作用，如金葡菌、表葡菌、溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌、綠膿假單胞菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、傷

14、寒桿菌、副傷寒桿菌、甲型鏈球菌和肺炎雙球菌等。具有抗菌活性的化學(xué)成分可能包括綠原酸和黃酮類化合物，以及色胺酮和一些化學(xué)結(jié)構(gòu)尚未闡明的吲哚類衍生物。這些證據(jù)說明金銀花、板藍(lán)根和黃芩所含抗菌成分可能是清開靈發(fā)揮抗菌作用的主要有效成分，注射用清開靈凍干粉體外抗菌活性可能與這幾位中藥有關(guān)。    細(xì)菌感染人體之后，其主要致病物質(zhì)內(nèi)毒素作為致熱原9，可引起患者體溫升高，從而產(chǎn)生一系列臨床癥狀。筆者在先前的實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)10，注射用清開靈凍干粉能有效抑制內(nèi)毒素導(dǎo)致的大鼠發(fā)熱，顯著降低發(fā)熱大鼠下丘腦IL及cAMP等發(fā)熱介質(zhì)的含量，從發(fā)熱的體內(nèi)過程上探討了清開靈對抗感染

15、性發(fā)熱的一部分作用機(jī)制。本文的研究結(jié)果表明，清開靈可在體外直接抑制臨床致病菌，顯示出良好的抗菌活性。這就說明，注射用清開靈凍干粉還可能直接通過抑制致病菌，達(dá)到抗感染性發(fā)熱的效果。對此，需進(jìn)一步研究證實(shí)。    注射用清開靈凍干粉是藥物新劑型，便于運(yùn)輸和儲存，在生產(chǎn)和流通中顯示了獨(dú)到的優(yōu)勢。本文對其體外抗菌活性進(jìn)行了評價(jià)，證明這種劑型具有良好的抑菌作用，為注射用清開靈凍干粉的臨床應(yīng)用提供了試驗(yàn)依據(jù)。注射用清開靈凍干粉對細(xì)菌有較強(qiáng)的抑制作用，具有良好的退熱效果，并有效減少了抗生素帶來的耐藥問題，值得臨床推廣使用【參考文獻(xiàn)】  1 

16、;武雪芬，白雁.金銀花葉藥用成分的提取及抑菌試驗(yàn)研究J.中成藥，2001，23(6)：448449. 2 肖珊珊，金郁，孫毓慶.板藍(lán)根化學(xué)成分、藥理及質(zhì)量控制研究進(jìn)展J.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，20(6)：455459.3 趙鐵華，鄧淑華，楊鶴松.黃岑莖葉活性部位抗菌作用的研究J.中國藥理學(xué)通報(bào)，2007，23(7)：882886.4 陳雯，李京鶴.注射用清開靈(凍干粉針)治療急性上呼吸道感染98例療效觀察J.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2007，18(5)：1208.5 李淑云，洪淥.清開靈注射液治療老年細(xì)菌性肺炎30例臨床觀察J.中醫(yī)藥臨床雜志，2004，16(4)：309310.6 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)M.第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1991：13401350.7 王本祥. 現(xiàn)代中藥藥理學(xué)M. 第1版.天津：天津科學(xué)技術(shù)出版社，1997：204，219，299.8 何顯忠，蘭榮德.金銀花的藥理作