HLA-B27檢測試劑說明書

1、人類白細胞抗原 B*27測定試劑盒(基因法說明書貨號:-B27 規(guī)格:50人份 /盒項目意義:HLA-B27抗原的存在與一些發(fā)炎性疾病有關(guān),例如強直性脊柱炎,瑞特氏綜合征,急性 前葡萄膜炎。 其中強直性脊柱炎與 HLA-B27關(guān)聯(lián)性最強。 然而帶有 HLA-B27抗原并不一定意味 著會發(fā)生相關(guān)疾病,在普通人群中也能發(fā)現(xiàn)約 10%為 HLA-B27 陽性,因此 HLA-B27陽性不能 作為相關(guān)疾病的篩選標準,但進行相關(guān)的檢測能有助于疾病的確診和治療。目前 HLA-B27檢測手段主要有血清學(xué)方法如微量淋巴細胞毒試驗 (CDC、流式細胞術(shù) (FCM以及引物特異性聚合酶鏈反應(yīng) (SSP PCR。 SS

2、P-PCR 是目前被廣泛采用的檢測HLA-B27的方法。 該方法實驗過程簡單, 只需一次 PCR 反應(yīng)就可得到確定的結(jié)果。 若檢測樣 本 DNA 中帶有 B27基因,則利用 B27的序列特異性引物,就可以擴增出目的條帶。SSP-PCR 的檢測方法過程簡單,所需儀器只是實驗室常用設(shè)備,項目容易開展。該檢測 方法的靈敏度高、特異性好、漏診率低,并且結(jié)果判讀簡單明了。試劑盒簡介:本方案結(jié)合 HLA-B27堿基序列設(shè)計特異性的引物,使 PCR反應(yīng)結(jié)果更穩(wěn)定可靠,具有 以下特點:1. 一管同時檢測內(nèi)參條帶和 B27基因,無需另做內(nèi)參檢測。2. 只需一次 PCR 反應(yīng),根據(jù)陽性帶的出與不出就可得到確定的結(jié)

3、果,判斷簡單。3. 最少僅需 5ng 基因組 DNA (約相當(dāng)于 750個細胞即可得到理想的檢測結(jié)果。使用說明:1. PCR 準備:本試劑盒每管為一個獨立的檢測反應(yīng),按照以下步驟配制一人份 PCR Mix: 混勻,將混合液加入反應(yīng)孔中,向每孔內(nèi)加 10ul 石蠟油(防止蒸干 ,然后立即進行擴增。 2 擴增按照以下程序進行擴增: 擴增后的產(chǎn)物,如不馬上電泳,可存放于 4冰箱內(nèi)(不要和試劑、 DNA 樣品放在一起,避 免污染 。3 電泳:1用 0.5X 的 TBE 制備 2%的電泳膠。2 0.5X TBE 作電泳液,用加樣槍加 6ul 于電泳膠孔內(nèi)。加 DL1000 Marker。3 150伏特電

4、泳 10分鐘。照相。結(jié)果分析:1 所有標本均應(yīng)有 1014bp 的內(nèi)參基因擴增條帶,該條帶存在說明 DNA 模板和 PCR 反 應(yīng)正常。2 有 145bp 的條帶出現(xiàn)說明樣本含有 B27基因序列。3 無 145bp 的條帶出現(xiàn)說明樣本未檢測到 B27基因序列。4 結(jié)果示例:M S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8由上而下依次為 1000、 700、 500、 400、 300、 200、 100bp 的 DNA 分子量標記。S1、 S2、 S3:B27陽性標本。S4、 S5、 S6、 S7、:B27陰性標本。S8:H 2注意事項 :O1. DNA 模板量:本試劑盒每反應(yīng)所需最佳模板量為 5ng 基因組 DNA ,過多的 DNA 模板使用會導(dǎo) 致擴增條帶太強,影響電泳的美觀性。由于不同實驗室提取的 DNA 質(zhì)量有所差異,質(zhì)量差的 DNA 會對 PCR 的擴增效率 有所影響,可