腎活檢病理組織染色

1、一、常規(guī)染色技術(shù)（HE染色）蘇木素-伊紅染色簡(jiǎn)稱HE染色，是最常用的染色方法，球木 素是一種城性染料，可將細(xì)胞核和細(xì)胞內(nèi)核糖體染成藍(lán)紫 色，伊紅是一種酸性染料，能將細(xì)胞質(zhì)染成紅色或淡紅色。 HE染色可以顯示腎小球的細(xì)胞增生、炎細(xì)胞浸潤。還能很好的顯示腎小管上皮細(xì)胞的扌員傷和腎間質(zhì)水腫情況。（一）需要試劑蘇木素染液；1%鹽酸乙醇液；氨水；1%伊紅液。（二）具體染色步驟 仁切片常規(guī)脫蠟入水。2蘇木素染細(xì)胞核12 min,水洗。3. 入1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒，水洗。4. 氨水返藍(lán)數(shù)秒。5流水沖洗，鏡下觀察細(xì)胞核成藍(lán)色。6.1%伊紅染數(shù)秒，水洗。7梯度乙醇脫水，二甲苯透明，樹膠封片。染色結(jié)果：胞核呈藍(lán)色

2、，胞漿呈紅色，紅細(xì)胞呈橘紅色，其 他成分呈深淺不同紅色。（三）注意事項(xiàng) 仁組織切片的脫蠟步驟應(yīng)徹底，否則組織無法著色，影響觀 察。2伊紅染色的時(shí)間需嚴(yán)格控制。過長胞漿染色紅色過深。3染色后的組織切片要將組織四周的污染物痕跡擦掉。二、特殊染色技術(shù)(一)過碘酸-希夫氏染色(PAS染色)PAS染色可以顯示腎小球內(nèi)的細(xì)胞增生、浸潤和系膜基質(zhì)等，并能很好地顯示基底膜，是顯示糖原和糖蛋白的基本染 色。仁需要試劑 1%過碘酸；schiff氏液染；蘇木素 染液；氨水。2.具體染色步驟(1) 切片常規(guī)脫蠟入水。(2) 入1%過碘酸氧化1015 min,水洗。(3) 入schiff氏液染1030 min,水洗。(

3、4) 蘇木素染細(xì)胞核12 min,水洗。(5) 入1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒，水洗。(6) 氨水返藍(lán)數(shù)秒。(7) 流水沖洗，鏡下觀察細(xì)胞核成藍(lán)色，基底膜染成粉紅 色。(8) 梯度乙醇脫水、二甲苯透明、樹膠封片。3染色結(jié)果PAS陽性物質(zhì)(多糖和糖原)呈紅色，核呈藍(lán) 色。4 注意事項(xiàng)(1) 組織切片的脫蠟步驟應(yīng)徹底，否則組織無法著色。(2) Schiff氏液染色的時(shí)間需嚴(yán)格控制。時(shí)間過長標(biāo)本基 底膜著色過深，時(shí)間過短標(biāo)本基底膜著色淡。(3) 入1%鹽酸乙醇分化時(shí)間要短，時(shí)間長容易使標(biāo)本退色。(4) 染色后的組織切片要將組織四周的污染物痕跡擦掉。(二)六胺銀-馬松染色(PAM-Masson染色)PAM-M

4、asson染色能更清晰地顯示基底膜.免疫復(fù)合物和膠 原纖維，免疫復(fù)合物的定位更為精確。仁需要試劑1%過碘酸；六胺銀液；球木素染液；氨水；Masson液；1%亮綠液。2.具體染色步驟(1) 切片常規(guī)脫蠟入水。(2) 入1%過殃酸氧化1015 min,水洗5 min。(3) 入六胺銀液72°C染3050 min,以顯微鏡下見基底 膜呈黑色即可。(4) 加2%氯化金數(shù)滴于組織，5%硫代硫酸鉗洗。(5) 蘇木素染細(xì)胞核12 min, 1%鹽酸乙醇分化，氨水 返藍(lán)。(6) 入Masson液約10 min, 1%醋酸洗。(7) 入1%亮綠58 min, 1%醋酸洗。(8) 梯度乙醇脫水、二甲苯透

5、明、樹膠封片。3染色結(jié)果 基底膜及系膜基質(zhì)黑色，免疫復(fù)合物紅色。4 注意事項(xiàng)(1)組織切片的脫蠟步驟應(yīng)徹底，否則組織無法著色。(2) 染色時(shí)間與室溫和切片厚度有關(guān)，室溫低、切片厚需 染色時(shí)間長，反則需染色時(shí)間短。入六胺銀液染色的時(shí)間需 嚴(yán)格控制。時(shí)間過長基底膜著色過深，時(shí)間過短基底膜著色 淡。(3) 2%氯化金分化時(shí)間要短，時(shí)間長容易使銀染退色。(4) 染色后的組織切片要將組織四周的污染物痕跡擦掉。(三)馬松染色(Masson染色)Masson染色能顯示各部位的免疫復(fù)合物，腎小球硬化和腎 間質(zhì)纖維化程度。仁需要試劑 蘇木素染液；氨水；Masson液； 亮綠液。2.具體染色步驟(1) 切片常規(guī)脫

6、蠟入水。(2) 媒染劑(10%重鎔酸鉀、10%三氯醋酸等量混合)染1030 min,水洗。(3)蘇木素染細(xì)胞核12 min,水洗。(4)入1%鹽酸乙醇分化數(shù)秒，水洗，氨水返藍(lán)數(shù)秒，水洗。(5) AMasson液約10 min,水洗，1%醋酸洗。(6) 入2.5%磷鎬酸約30 s,水洗，1%醋酸洗。(7) 入2%橘黃G約2 min,水洗，1%醋酸洗。(8) 入1%亮綠58 min, 1%醋酸洗。(9) 入100%乙醇脫水、二甲苯透明、樹膠封片。3染色結(jié)果 細(xì)胞核紅色，膠原纖維綠色，免疫復(fù)合物紅色。4 注意事項(xiàng)(1) 組織切片的脫蠟步驟應(yīng)徹底，否則組織無法著色。(2) AMasson液染色的時(shí)間需

7、嚴(yán)格控制。時(shí)間過長著色過 深，時(shí)間過短著色淡。(3) 入1%亮綠染色時(shí)間需要鏡下控制，時(shí)間長容易覆蓋 Masson液紅色。(4) 染色后的組織切片要將組織四周的污染物痕跡擦掉。(四) 剛果紅染色在腎臟病理染色中，剛果紅染色能夠?qū)⒌矸蹣游镔|(zhì)染成磚紅 色，是診斷淀粉樣變腎病的常用染色方法之一。1. 需要試劑高鎰酸鉀一硫酸液；蘇木素染液；氨 水；城性剛果紅液。2. 具體染色步驟(1) 切片常規(guī)脫蠟入水。(2) 高錘酸鉀-硫酸混合處理3 min,水洗。(3) 5%草酸處理3 min,水洗。(4) 蘇木素染核2 min,水洗，藍(lán)化。(5) 城性剛果紅液染1030 mino(6) 入100%乙醇脫水、二甲苯透明、樹膠封片。3染色結(jié)果 細(xì)胞核藍(lán)色，淀粉樣物質(zhì)呈磚紅色(圖3-12) o 4.注意事項(xiàng)(1)組織切片的脫蠟步驟應(yīng)徹底，否則組織無法著色。(2)城性剛果紅液染色時(shí)間應(yīng)該鏡下控