無定形磷酸鈣負(fù)載rhBMP2納米緩釋體的生物相容性及安全性

1、無定形磷酸鈣負(fù)載rhBMP2納米緩釋體的生物相容性及安全性        【摘要】     目的觀察無定形硫酸鈣(ACP)負(fù)載重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(rhBMP2/ACP)納米緩釋體的生物相容性及安全性,為新型材料的臨床應(yīng)用提供必要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法對材料分別進(jìn)行體外溶血實(shí)驗(yàn)、微核實(shí)驗(yàn)、急性毒性試驗(yàn)、熱原試驗(yàn)、皮內(nèi)刺激反應(yīng)實(shí)驗(yàn)和短期肌內(nèi)埋置試驗(yàn)、骨內(nèi)植入實(shí)驗(yàn)。結(jié)果材料浸提液對兔血無溶血現(xiàn)象，對小鼠骨髓細(xì)胞無遺傳毒性作用，未引起小鼠急性毒性反應(yīng)、兔熱原反應(yīng)、兔皮內(nèi)刺激反

2、應(yīng)；兔短期肌肉埋置、骨內(nèi)植入后局部無明顯炎癥反應(yīng)、無組織壞死，材料逐漸發(fā)生降解，能與組織有機(jī)融合。結(jié)論rhBMP2/ACP納米緩釋體的生物相容性及安全性符合ISO10993、GB/T16886規(guī)定的體內(nèi)植入物的生物學(xué)評價標(biāo)準(zhǔn)，可作為骨修復(fù)替代材料用于相關(guān)疾病的臨床治療。     【關(guān)鍵詞】  重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白； 無定形硫酸鈣； 生物相容性    Experimental study on the biocompatibility and security of a rhBMP2 loaded amor

3、phous calcium phosphate delayed release nanosized materialWANG Haoyu, WU Xiaotao, ZHANG Shaodong, et al. Department of Orthopedics, Zhongda Hospital of Southeast University, Nanjing, 210009, China    Abstract：ObjectiveTo study the biocompatibility and security of the recombinant human

4、 bone morphogenetic protein2(rhBMP2) loaded amorphous calcium phosphate (ACP) delayed release nanosized material and investigate the feasibility of the clinical use as a kind of bone substitute in bone engineering.MethodThe in vitro hemolyzation, cytotoxicity, microkernel test in marrow smear, acute

5、 systemic toxicity, pyrogenicity, subcuticular stimulation reaction and shortterm intramuscular implantation, as well as endosseous implantation were performed on the rhBMP2/ACP delayed release nanosized material.ResultThe materialextracted liquid induced no hemolyzation, no toxic effects of genetic

6、 ,no pyrogenic reaction in rabbits, no cytotoxicity cultured in rabbit bone marrowderived mesenchymal stem cells(BMSCs) in vitro and no acute toxicity in mice. The intramuscular implantation and endosseous implantation in rabbits induced no inflammatory reaction, tissue necrosis and the material was

7、 degraded gradually, fused organically with tissues.ConclusionThe biocompatibility and security of the rhBMP2/ACP delayed release nanosized material could meet the requirements given in biological standards for implanted biomaterials ISO10993 and GB/T16886, suggesting that it could be a good bone su

8、bstitution for the clinical trial.    Key words：rhBMP2;  amorphous calcium phosphate;  biocompatibility     在各類創(chuàng)傷造成的骨缺損修復(fù)中，植骨材料的選擇一直是臨床重視的問題。隨著生物材料的迅速發(fā)展，具有良好生物活性的支架材料負(fù)載一定量的生物活性因子形成的骨修復(fù)替代材料成為近年研發(fā)的熱點(diǎn)之一。作者采用無定形磷酸鈣（amorphous calcium phosphate, ACP）負(fù)載重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋

9、白2（recombinant human bone morphogenetic protein2, rhBMP2）制備的納米緩釋體兼容了ACP良好的生物活性、細(xì)胞黏附性、細(xì)胞相容性1和rhBMP2良好的誘導(dǎo)成骨作用2，能滿足支架材料可控的生物降解速率和優(yōu)異的骨傳導(dǎo)性能，緩釋體中的rhBMP2符合雙向動力學(xué)釋放規(guī)律，且有良好的緩釋效果3。本文在前期試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，綜合評價rhBMP2/ACP納米緩釋體的生物相容性及安全性。    1  材料與方法     1.1  實(shí)驗(yàn)材料試件制備   

10、在ACP原制備技術(shù)基礎(chǔ)上3,4，模擬自然骨組織成分和微結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，以濕化學(xué)法合成制備rhBMP2/ACP納米緩釋體實(shí)驗(yàn)材料(以下簡稱實(shí)驗(yàn)材料)，并將其預(yù)制成直徑2 mm，高為6 mm圓柱體標(biāo)準(zhǔn)試件，聚乙烯塑料袋雙層密封包裝，經(jīng)60Co 25 kGy輻射滅菌后備用。    1.2  實(shí)驗(yàn)材料浸提液制備    取實(shí)驗(yàn)材料固相粉末12 g，經(jīng)60Co 25 kGy輻射滅菌后，浸入盛有120 ml生理鹽水的無菌容器中，37靜置浸提10 d，取其上清液移入無菌玻璃容器內(nèi)密封備用。    1.3 

11、溶血試驗(yàn)    常規(guī)心臟穿刺抽取新西蘭兔血10 ml，即刻加入20 gL草酸鉀0.5 ml混合抗凝，取抗凝兔血8 ml加入10 ml生理鹽水中稀釋備用。實(shí)驗(yàn)分為3組，每組各3管,每管加入0.2 ml稀釋兔血,再分別于實(shí)驗(yàn)材料組加入材料浸提液10 ml,陰性對照組加入生理鹽水10 ml,陽性對照組加入雙蒸水10 ml。全部試管37水浴1 h,肉眼觀察有無溶血, 2 000 rmin離心5 min，取上清液，在分光光度計(jì)545 nm處測定吸光度值,各組取均值計(jì)算溶血度。溶血度（實(shí)驗(yàn)材料的吸光度陰性對照吸光度）/（陽性對照吸光度陰性對照吸光度）×100%,溶血

12、度>5 為陽性反應(yīng)，表示有溶血現(xiàn)象。    1.4  微核試驗(yàn)    取清潔級密封群健康成年昆明小鼠12只，雌雄各半，體質(zhì)量2025 g，均衡性別后隨機(jī)分為3組，實(shí)驗(yàn)組和陰性對照組分別以0.05 ml/g體質(zhì)量劑量腹腔注入材料浸提液或生理鹽水，陽性對照組以0.04 mg/g體質(zhì)量劑量腹腔注入環(huán)磷酰胺，間隔24 h給藥1次共4次，于末次給藥后6 h處死實(shí)驗(yàn)鼠，常規(guī)提取胸骨髓制作涂片，Gimsa染色，每只小鼠觀察1 000個嗜多染紅細(xì)胞中微核細(xì)胞數(shù)，計(jì)算其發(fā)生率。    1.5  急

13、性毒性試驗(yàn)    取健康成年昆明小鼠12只，雌雄不限,體質(zhì)量2025 g，隨機(jī)分為兩組，序列編號。實(shí)驗(yàn)組以0.05 ml/g體質(zhì)量劑量腹腔內(nèi)一次性注入材料浸提液,對照組同劑量注入生理鹽水。記錄24、48、72 h小鼠體質(zhì)量變化，14 d內(nèi)小鼠的呼吸、進(jìn)食、運(yùn)動等一般情況及不良反應(yīng)或死亡等。    1.6  熱原試驗(yàn)    取健康成年新西蘭兔6只，雌雄不限，體質(zhì)量為2.22.4 kg，序列編號。材料浸提液注入前0.5、1 h各測肛溫1次,取均值為正常值。將材料浸提液以5 ml/kg體質(zhì)量劑量自兔耳

14、緣靜脈緩慢注入，每間隔1 h測量肛溫1次，共3次，記錄各兔體溫值。體溫升高值為3次體溫最高值減去正常值。    1.7  皮內(nèi)刺激反應(yīng)實(shí)驗(yàn)    取健康成年新西蘭兔3只，雌雄不限，體質(zhì)量為2.02.4 kg。于實(shí)驗(yàn)前1 d備皮，在兔背部脊柱兩側(cè)脫毛。常規(guī)消毒后于兔脊柱一側(cè)有序排列的5個點(diǎn)上皮內(nèi)各注射0.2 ml浸提液，在對側(cè)對應(yīng)點(diǎn)注射0.2 ml生理鹽水。注射后觀察并記錄即刻、24、48、72 h各時相點(diǎn)各注射部位的紅斑和水腫狀況。在各時相點(diǎn)將各兔觀察點(diǎn)出現(xiàn)的紅斑和水腫的原發(fā)性刺激記分相加，再除以觀察點(diǎn)總數(shù)為試驗(yàn)材料原發(fā)性刺

15、激記分。將試驗(yàn)材料試點(diǎn)原發(fā)性刺激記分減去對照液試點(diǎn)記分得出每只兔原發(fā)性刺激記分。以各時相點(diǎn)觀察記錄數(shù)據(jù)計(jì)算原發(fā)性刺激指數(shù)。    1.8  肌內(nèi)埋置實(shí)驗(yàn)    取同窩同系健康成年新西蘭兔6只，雌雄各半，體質(zhì)量2.02.4 kg，以3%戊巴比妥鈉1 mg/kg股部肌注麻醉，兔背部脊柱兩側(cè)依次按上下左右各做長約2 cm小切口4個，分層達(dá)筋膜，在肌肉內(nèi)鈍性分離形成肌袋，將無菌材料試件植入肌袋，逐層縫合切口。術(shù)后分籠飼養(yǎng)，觀察實(shí)驗(yàn)兔術(shù)后一般情況。于術(shù)后1、2、4周分別處死2只實(shí)驗(yàn)兔，切取植入?yún)^(qū)組織塊，大體觀察有無水腫、化膿、材料排出

16、等,并制作標(biāo)本切片,HE染色，光鏡下觀察炎性反應(yīng)和纖維包膜形成情況。    1.9  骨內(nèi)植入實(shí)驗(yàn)    取同窩同系健康成年新西蘭兔6只，雌雄各半，體質(zhì)量為2.02.4 kg，術(shù)前1 d脫毛。3%戊巴比妥鈉兔耳緣靜脈注射麻醉后，常規(guī)切開股骨外側(cè)肌肉，分離暴露股骨中段，用消毒牙鉆在股骨骨面上鉆孔至髓腔，孔徑為2.2 mm，每側(cè)股骨鉆孔2個，將無菌實(shí)驗(yàn)材料試件植入孔內(nèi)，凝固后骨蠟止血，封閉試件與孔之間的縫隙。逐層縫合切口，放回籠內(nèi)單獨(dú)飼養(yǎng)，觀察實(shí)驗(yàn)兔術(shù)后一般情況。于術(shù)后2、4、12周各處死2只，取出股骨全段，系列脫鈣制作標(biāo)本切片

17、, HE染色，光鏡下觀察成骨和材料降解情況。    1.10  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法    采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，數(shù)據(jù)用均數(shù)+標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，單因素方差分析,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。    2  結(jié)果    2.1  溶血試驗(yàn)    實(shí)驗(yàn)材料對健康兔血的溶血度平均值為1.59% (表1)，低于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的5%，可認(rèn)定實(shí)驗(yàn)材料無體外溶血作用。 表1組別試管1試管2試管3平均值溶血度 &

18、#160;  2.2  微核試驗(yàn)    各組小鼠胸骨髓涂片中出現(xiàn)微核的嗜多染紅細(xì)胞的發(fā)生率分別為，實(shí)驗(yàn)組雌性鼠0.02%、雄性鼠0.03%，陰性對照組雌性鼠0.03%、雄性鼠0.04%，陽性對照組雌性鼠2.16%、雄性鼠2.22%；實(shí)驗(yàn)組微核率與陰性對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。實(shí)驗(yàn)組、陰性對照組與陽性對照組比較兩組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明材料浸提液對小鼠骨髓細(xì)胞無遺傳毒性作用。    實(shí)驗(yàn)組與對照組各小鼠體質(zhì)量均呈上升趨勢,兩組在24、48、72 h 3個時間段內(nèi)體質(zhì)量無

19、顯著性差異(P>0.05)(表2)；14 d內(nèi)無小鼠死亡，活動、進(jìn)食、排泄正常，未見步態(tài)不穩(wěn)、驚厥、癱瘓及呼吸抑制等毒性反應(yīng)。急性毒性劑量分級為無毒級，表明受試材料對昆明小鼠無急性全身毒性。    2.4  熱原試驗(yàn)    6只新西蘭兔經(jīng)熱原試驗(yàn)后，3次體溫測量個體體溫升高最高為0.27,均低于0.6，3只組合體溫升高總和最高為0.57，均在評價標(biāo)準(zhǔn)值1.4以內(nèi)（表3），表明受試材 料不含致熱原物質(zhì)。表224 h48  h72 h實(shí)驗(yàn)組    2.5  皮內(nèi)刺激反應(yīng)實(shí)驗(yàn)

20、    實(shí)驗(yàn)點(diǎn)和相對應(yīng)對照點(diǎn)24、48、72 h時限點(diǎn)均未見皮膚紅斑、水腫、潰瘍等反應(yīng)；原發(fā)性刺激評分為0，原發(fā)性刺激指數(shù)為0，表明受試材料無皮膚刺激作用。    2.6  肌內(nèi)埋置實(shí)驗(yàn)    術(shù)后動態(tài)觀察，實(shí)驗(yàn)兔一般情況好，植入?yún)^(qū)均無紅腫、滲液、感染，切口愈合良好。各時間點(diǎn)標(biāo)本均無化膿、肌肉壞死、植入物排出現(xiàn)象。組織學(xué)觀察，術(shù)后1周組肌袋有少量炎細(xì)胞浸潤，以中性粒細(xì)胞和散在的淋巴細(xì)胞為主，無組織壞死，無纖維組織包繞，有成纖維細(xì)胞形成（圖1）；術(shù)后2周組肌袋仍有極少的中性粒細(xì)胞和偶見的淋巴細(xì)胞，

21、以及少許巨噬細(xì)胞和異物巨細(xì)胞浸潤，材料外緣可見被降解的細(xì)小材料顆粒，植入物周圍組織形態(tài)正常，有稀疏的纖維膜包繞，但包膜形態(tài)不完整，成纖維細(xì)胞增生明顯；術(shù)后4周組肌袋未見炎細(xì)胞浸潤，植入物部分降解吸收并被微薄且透明的纖維膜包裹，包膜細(xì)胞成分主要是纖維母細(xì)胞。異物巨細(xì)胞較2周組明顯減少, 材料降解現(xiàn)象明顯，材料與肌肉之間有新生軟骨形成(圖2)，表明受試材料與肌肉組織相容性良好。    2.7  骨內(nèi)植入實(shí)驗(yàn)    植入術(shù)后觀察，實(shí)驗(yàn)兔切口均為I期愈合，無竇道，無排斥反應(yīng)；術(shù)后2周時，植入材料被由BMSCs分化來的軟骨樣細(xì)胞和軟骨

22、樣組織分割包繞，與骨面之間有小間隙存在；術(shù)后4周時，軟骨細(xì)胞和軟骨組織逐漸成熟形成新骨，植入材料與受體骨嵌合緊密，新生骨痂組織蔓延材料面，部分骨細(xì)胞已長入材料間隙中，材料顆粒降解、融合，失去原有的均勻結(jié)構(gòu)，與骨交界處有細(xì)胞分化現(xiàn)象(圖3)；術(shù)后12周時，植入材料與骨組織間無間隙，有骨小梁長入，材料周圍可見纖維、血管構(gòu)造豐富的哈佛氏管和未鈣化的軟骨組織，材料與骨界面為骨性結(jié)合。切片顯示，材料表面已呈現(xiàn)出吸收和降解形成的特有孔隙，內(nèi)有骨細(xì)胞存在,表明實(shí)驗(yàn)材料與骨組織之間有良好的相容性。    圖1  1周肌袋有少量炎細(xì)胞浸潤，無組織壞死，無纖維組織包繞，有成

23、纖維細(xì)胞形成  圖2  4周肌袋未見炎細(xì)胞浸潤，植入物部分降解吸收并被微薄且透明的纖維膜包裹， 材料降解現(xiàn)象明顯，材料與肌肉之間有新生軟骨形成  圖3  4周時，植入材料與受體骨嵌合緊密，新生骨痂組織蔓延材料面，部分骨細(xì)胞已長入材料間隙中，材料顆粒降解、融合，失去原有的均勻結(jié)構(gòu)，與骨交界處有細(xì)胞分化現(xiàn)象    3  討  論    良好的生物相容性和安全性是骨修復(fù)替代材料發(fā)揮骨引導(dǎo)或骨誘導(dǎo)作用的前提。臨床對于植入型骨修復(fù)替代材料除應(yīng)評價其理化特性、生物力學(xué)性能外，尚須探討材料

24、的生物降解與功能細(xì)胞之間的生物相容性，以及材料與骨組織之間的相互作用、成骨機(jī)制等功能性評價，而評價的主要手段是體外和體內(nèi)試驗(yàn)?；谠u價標(biāo)準(zhǔn)和要求，本研究通過體外與體內(nèi)的相應(yīng)試驗(yàn)綜合評價rhBMP2/ACP納米緩釋體的生物相容性和安全性。    評價生物材料生物相容性的體外實(shí)驗(yàn)，主要觀察受試材料或浸提液對組織細(xì)胞生長、增殖及代謝的影響。本實(shí)驗(yàn)的前期工作3采用原代培養(yǎng)的BMSCs，體外分離培養(yǎng)方法簡便,擴(kuò)增速度快, 能準(zhǔn)確體現(xiàn)受試材料與體內(nèi)細(xì)胞作用的真實(shí)情況,較其他組織細(xì)胞或多次傳代后功能表達(dá)下降的建系細(xì)胞更為靈敏可靠。BMSCs是具有較強(qiáng)成骨潛能的干細(xì)胞，其在材料表

25、面的貼附、鋪展、分化是促進(jìn)新骨形成的基礎(chǔ)。作為骨組織的重要功能細(xì)胞，承負(fù)著骨的修復(fù)與改建功能，因而BMSCs細(xì)胞接種在骨植入材料表面的形態(tài)及功能變化，客觀反映著材料的細(xì)胞相容性。前期實(shí)驗(yàn)3顯示，原代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁緊密，偽足伸展良好，傳代后呈集落化生長趨勢；復(fù)合培養(yǎng)中RGR、ALP活性檢測結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)材料對BMSCs的黏附、增殖、分化和分泌基質(zhì)無不良影響，說明受試材料具有良好的細(xì)胞相容性。有研究認(rèn)為BMP需借助適宜載體才能發(fā)揮異位成骨能力，ACP可以滿足人體細(xì)胞對載體的多重要求5。本實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)，BMSCs能在實(shí)驗(yàn)材料表面附著并伸展、繁殖、分泌細(xì)胞外基質(zhì)，表現(xiàn)出明顯的誘導(dǎo)成骨功能，證實(shí)ACP作為

26、生長因子的載體具有促進(jìn)多能干細(xì)胞表達(dá)成骨細(xì)胞表型及合成細(xì)胞外基質(zhì)的功能，是一種有效的骨誘導(dǎo)因子和間充質(zhì)細(xì)胞體外擴(kuò)增的載體，rhBMP2能在ACP 協(xié)同下誘導(dǎo)未分化的BMSCs向成軟骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞分化。rhBMP2/ACP納米緩釋體進(jìn)一步表現(xiàn)出其不具細(xì)胞毒性和較高的細(xì)胞粘附性，能明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖，提高堿性磷酸酶活性，其負(fù)載的rhBMP2能維持有效生理濃度在局部緩慢釋放并持續(xù)表達(dá)3，保持了良好的促成骨因子生物活性,在誘導(dǎo)成骨的同時促進(jìn)了材料的降解。    體內(nèi)植入試驗(yàn)是對受試材料體內(nèi)變化的階段性組織學(xué)檢查，著重觀察材料周圍組織的病理改變及材料的降解情況，是目前國際通

27、行的評價生物材料對組織毒性刺激反應(yīng)的有效方法。通常以炎性細(xì)胞浸潤和材料表面包膜形成兩方面進(jìn)行評價。本實(shí)驗(yàn)兔肌內(nèi)埋置和骨內(nèi)植入觀測結(jié)果，材料植入局部均無明顯的組織毒性刺激反應(yīng)，且有諸多跡象表明受試材料能夠逐步降解吸收并被機(jī)體組織替代。肌內(nèi)埋置早期材料周圍組織出現(xiàn)少量炎性細(xì)胞局部浸潤,但炎性指數(shù)隨時間延長逐漸回落消失,其炎性變化為一過性，符合術(shù)后正常應(yīng)激反應(yīng)的轉(zhuǎn)歸規(guī)律；后期尚有少許異物巨細(xì)胞浸潤可能與材料的持續(xù)崩解、巨噬細(xì)胞吞噬和胞外降解吸收等產(chǎn)生的異物刺激有關(guān)；材料溶解產(chǎn)生的激肽類物質(zhì)是包膜形成的主要原因，當(dāng)鈣、磷等離子減少到一定程度，即纖維包膜形成穩(wěn)定后不會再繼續(xù)增厚6。BMSCs作為多能干細(xì)

28、胞有多種分化的潛能，但其分化并非是一個完全自發(fā)的過程。體內(nèi)環(huán)境及某些細(xì)胞因子對其分化有一定的促進(jìn)作用7，構(gòu)建局部微環(huán)境的基質(zhì)材料是BMSCs附著的框架和細(xì)胞代謝的場所，其形態(tài)與功能直接影響著BMSCs的附著、增殖、遷移和分化。ACP球形納米顆粒與微觀結(jié)構(gòu)，以及較低的表面粗糙度，不但為BMSCs附著提供了更多的表面附著位點(diǎn)，為其行使功能建立了適宜的三維空間，而且增加了材料對rhBMP2的吸附能力，延長了活性因子的釋放時間。ACP通過對rhBMP2的控釋作用，使BMSCs能在生長因子的調(diào)控下增殖、分化，促進(jìn)了新骨形成。兔骨內(nèi)植入觀察發(fā)現(xiàn)，2周時即有軟骨樣細(xì)胞和軟骨樣組織形成；4周時材料與骨組織已呈

29、現(xiàn)出骨性結(jié)合，骨組織漸趨成熟，表現(xiàn)為骨小梁和骨島初步成形，骨陷窩和骨組織形態(tài)與正常骨組織結(jié)構(gòu)基本一致；12周時可見較為典型的骨小梁及骨髓結(jié)構(gòu),材料的降解與成骨代謝活性逐漸加強(qiáng)，材料表面呈現(xiàn)快速吸收降解狀態(tài)，骨組織與材料界面為骨性結(jié)合，材料降解速率與新骨形成接近天然骨正常的重建過程，說明受試材料可與受體骨發(fā)生牢固生物鍵合。哈佛氏管的出現(xiàn)是造骨系統(tǒng)高代謝功能的表現(xiàn),表明新生骨生長迅速。本實(shí)驗(yàn)若在時間設(shè)計(jì)上適當(dāng)延長可能更有利于對纖維包膜增長規(guī)律和骨組織學(xué)改變的觀測。    本研究通過系列實(shí)驗(yàn)檢測，參照ISO10993和GB/T16886對生物醫(yī)學(xué)材料評價的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)判定，

30、rhBMP2/ACP納米緩釋體在實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時間內(nèi)無毒，不含熱原物質(zhì)，不引起溶血反應(yīng)和皮內(nèi)刺激反應(yīng)；肌袋植入組織學(xué)觀察材料周圍組織無異常改變，無材料排除；骨內(nèi)植入后材料逐漸發(fā)生降解，形成的新骨能與組織有機(jī)融合。表明rhBMP2/ACP納米緩釋體具有良好的生物相容性和安全性，是一種較為理想的生物活性因子載體材料和釋放系統(tǒng)?？稍囉糜诠侨睋p修復(fù)的治療，進(jìn)一步研究和探索其臨床應(yīng)用的可能性。    【參考文獻(xiàn)】  1 Gao Y, Weng W, Cheng K, et al. Preparation, characterization and cytocompatibility of porous ACP/PLLA compositesJ. J Biomed Mater Res, 2006, 79:193-200.    2 Hoshino M, Egi T, Terai H, et al. Repair of