陰道海綿栓_羊樂_中醋酸氟孕酮體外釋放規(guī)律研究

1、陰道海綿栓 “ 羊樂”中醋酸氟孕酮體外釋放規(guī)律研究何曉紅 , 楊利國 3(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物繁育研究所 , 江蘇 南京 210095摘要 :根據(jù) Martindale 藥典中的體外釋放方法 , 研究分別含醋酸氟孕酮 (FG A 30, 40和 50mg 的 “羊樂”和法國產(chǎn)品Synchropart 在 12d 內(nèi)釋放 FG A 的規(guī)律 。 結(jié)果發(fā)現(xiàn) , 3種規(guī)格的 “羊樂”和 Synchropart 中 FG A 每天釋放量均呈下降趨勢(shì) , 12d 內(nèi)各劑量組釋放量的平均值分別為 2101±1103, 2120±1122, 3121±0188和 2109±

2、0140mg d -1。 在第 3和第 4天 , 各劑量組 FG A 釋放量達(dá)到高峰 , 以后釋放量逐漸降低 , 至第 12天各劑量組的釋放量最低 ?；厥諏?shí)驗(yàn)中 , 各劑量組的回收 率分別為 88123%, 86148%, 99140%和 90100%。 運(yùn)用 SPSS 軟件分析 FG A 海綿栓的釋放模型 , 發(fā)現(xiàn)釋放量 y 1、 y 2、 y 3和y 法國 (分別表示 3種規(guī)格的 “ 羊樂”和 Synchropart 的 FG A 釋放量 與釋放時(shí)間 (d 關(guān)系如下 :y 1=316436-012517d ; y 2=316718-012260d ; y 3=319390-011129d

3、和 y 法國 =215505-010705d 。關(guān)鍵詞 :陰道海綿栓 ; 氟孕酮 ; 釋放規(guī)律中圖分類號(hào) :R96512 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 :A 文章編號(hào) :1000(0204The acetate (FGAsponges Yangle in vitroHE X iao 2hong , Y ANGLi 2guo 3(Institute of Animal Reproduction and Breeding , Nanjing Agric Univ , Nanjing 210095, China Abstract :According to the description of Martindale

4、pharmacopoeia , the release dynamic of fluorogestone acetate (FG A in intravaginal sponges containing 30, 40or 50mg of FG A and Synchropart (from France individually was studied in vitro for 12days. The results showed that there was no differences am ong four types of sponges and decreased gradually

5、 day by day for the release am ount of FG A. The average release am ount of four types of sponges was 2101±1103, 2120±1122, 3121±0188and 2109±0140mg d -1, respectively. The release am ount of FG A reached the top on day 3and 4, and then lowed gradually and reached the bottom on d

6、ay 12. In the recycling trials , the recycling rates for four types of sponges were 88123%, 86148%, 99140%and 90100%, respectively. The formulas of FG A release am ount for type 1, 2, 3and Synchropart of sponges (presented in y 1, y 2, y 3and y (France were y 1=316436-012517d , y 2=316718-012260d ,

7、y 3=319390-011129d , and y France =215505-010705d (where d represented the day observed .K ey w ords :intravaginal sponges ; fluorogestone acetate (FG A ; release“ 羊樂”是由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物繁育研究所研制 、 浙江臺(tái)州永安獸藥有限公司生產(chǎn)的孕激素陰道海綿栓商品名 , 有效成分為醋酸氟孕酮 (FG A 。 FG A 又名氟孕酮乙酸酯 , 是人工合成的高效孕激素類似 物 , 廣泛應(yīng)用于誘導(dǎo)發(fā)情 、 同期發(fā)情 、 超數(shù)排卵 、 胚胎移植和

8、繁殖疾病的治療 。 1965年 , R obins on 首先 報(bào)道運(yùn)用 SC 9980(一種醋酸氟孕酮陰道海綿栓的商品名 誘導(dǎo)母羊同期發(fā)情排卵成功 1。用 FG A 陰道海綿栓誘導(dǎo)發(fā)情 , 其效果受很多因素的影響 , 如 FG A 劑量 、海綿栓放置時(shí)間 、處理羊 品種 2、 年齡 3,4以及處理季節(jié) 5等 。 尤其是 FG A 劑量起很重要的作用 , 不僅影響作用效果 , 還與放置 時(shí)間長短有關(guān) 。 據(jù)國外文獻(xiàn)資料報(bào)道 , 用含 FG A 30, 40或 50mg 的陰道海綿栓處理母羊 , 均能誘導(dǎo)發(fā) 情和同期發(fā)情 6,7, 但作用效果差異很大 。本研究根據(jù) Martindale 藥典介紹

9、的方法 , 研究 12d 內(nèi)不同劑 量 組 “羊樂” 中 FG A 在體外的釋放規(guī)律 , 旨在為合理選擇陰道海綿栓中 FG A 劑量和確定海綿栓放置時(shí) 收稿日期 :20011121 基金項(xiàng)目 :國家農(nóng)業(yè)科技跨躍計(jì)劃 (200114 ; 江蘇省農(nóng)業(yè)三項(xiàng)工程 SX (2001 047 作者簡介 :何曉紅 (1979 , 碩士。 3通訊作者 C orresponding author :楊利國 (1962 , 教授 , 從事動(dòng)物繁育和生物技術(shù)研究。Email :animrep mail. njau. edu. cn南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 2002, 25(2 :7578Journal o f Nanjin

10、g Agricultural Univer sity間提供理論依據(jù) 。1 材料與方法111 材料FG A 及其標(biāo)準(zhǔn)品由浙江永安獸藥有限公司提供 。 “羊樂”由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物繁育研究所研制 , 有 3種規(guī)格 , 分別含 FG A 30, 40和 50mg 。 Synchropart 由法國 Searle 公司提供 (FG A 含量 40mg , 用于對(duì)照 。112 釋放方法參考文獻(xiàn)介紹的方法 3, 先自制不銹鋼支架 , 用超聲波清洗機(jī)清洗 30min , 再用清水洗凈 , 放入干 燥箱內(nèi)干燥 , 防止表面污物影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果 。然后取每種規(guī)格的 “羊樂”和不含 FG A 的海綿栓各 3個(gè) , 將每

11、個(gè)栓固定在自制的不銹鋼支架上 , 分別放入 250m L 錐形瓶中 , 加入預(yù)熱至 (60±011 的去離子 水 230m L , 用自制塞子塞好 (防止實(shí)驗(yàn)過程中的水分蒸發(fā) , 再用膠布固定好不銹鋼支架 , 使海綿栓全 部浸入去離子水中 , 且不接觸錐形瓶塞 。將錐形瓶置于預(yù)熱至 (60±011 的恒溫震蕩器中 , 1r -2315h 后取出海綿 栓 , 置入另一 250m L 錐形瓶中 , 加入預(yù)熱至 (60±011 溶液加入 15m L 甲醇 , , , FG A 含 量 。 每天重復(fù)以上步驟 , 113 回收試驗(yàn)、 法國產(chǎn)品和不含 FG A 的陰道海綿栓

12、(即陰性對(duì)照 各 3個(gè) , 將每個(gè)海 綿栓用 10m L 甲醇溶液洗滌 5次 , 收集溶解液 , 用甲醇定溶至 50m L , 搖勻 。 取 3m L 加去離子水定溶至 50m L , 震蕩搖勻 , 待測(cè) 。 114 FGA 含量測(cè)定FG A 標(biāo)準(zhǔn)品用去離子水 甲醇 (去離子水與甲醇的體積比為 47 3 溶液溶解 , 配制成濃度為 5, 7, 10和 15g m L -1的標(biāo)準(zhǔn)液 , 常溫遮光保存 。用 UV 751型紫外吸收分光光度計(jì)于 238nm 波長測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)液和待測(cè)液的吸光值 , 然后參考標(biāo)準(zhǔn)品濃 度計(jì)算待測(cè)樣中的 FG A 含量 。 115 數(shù)據(jù)分析用 SPSS 計(jì)算機(jī)軟件分析 FG

13、A 每天釋放量 ( x ±S E , 并進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)和回歸分析 ?；厥章?為實(shí)測(cè)值與理論值的百分比 。2 結(jié) 果211 回收率 測(cè)定 3種規(guī)格 “羊樂”和法國產(chǎn)品的 FG A 含 量 , 計(jì) 算 回 收 率 分 別 為 88123%, 86148%, 99140%和 90100%。 各組的重復(fù)性都較好 , 組內(nèi)差 異較小 (表 1 。 212 FGA 每日釋放量由表 2可見 , 各劑量組在實(shí)驗(yàn)開始的第 3或第4天 FG A 釋放量達(dá)到高峰 , 從釋放高峰到第 7天各 劑量組一直保持較高的 FG A 釋放量 , 第 812天 FG A 的釋放量逐漸降低 。各劑量組 12d 中的釋

14、放 量總體都呈下降趨勢(shì) , 但仍有起伏 。 30mg 劑量組 起伏最大 , 40mg 次之 , 50mg 組第 3, 法國產(chǎn)品最 小 。表 1 3種規(guī)格 “ 羊樂”和 Synchrop art 中 FG A 的回收率T able 1 The fluorgestone acetate (FG A recycling resultin Synchrop art and three types of intravaginal sponges 劑量 /mgFG A content per sponge觀察值FG A content observed回收率 /%Recycling rate35198&#

15、177;311290100 3Synchropart (France 67 南 京 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 第 25卷 到達(dá)釋放峰后 , 50mg 劑量組釋放量從 4121mg d -1下降到 2113mg d -1, 變化幅度為 2108mg ; 30mg 劑量組從 3126mg d -1下降到 0143mg d -1, 下降幅度 2183mg ; 40mg 劑量組從 3162mg d -1下降到 0154mg d -1, 下降幅度 3108mg ; 法國產(chǎn)品由 2167mg d -1下降至 1153mg d -1, 下降幅度 1114mg 。 在第 3, 7, 8, 9和 10天 , 50

16、mg 劑量組的 FG A 釋放量大于 30mg 劑量組釋放量 (P <0105 。 但在 12d 的實(shí)驗(yàn) 時(shí)期內(nèi) , 3個(gè)劑量組釋放量的差異并不顯著 。比較同一天內(nèi) 3個(gè)劑量組 FG A 釋放量的平均值 , 發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)剛開始時(shí) , 各劑量組釋放量差異較大 , 隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)程 , 各組差異逐漸減小 , 到第 5天各組差異最小 , 第 5天 3個(gè)劑量組釋放量的平均值為 (3136±0161 mg , 第 612天各組釋放量的差異又逐漸增大 , 第 12天各劑量組釋放量的平均值為 (1103±0193 mg d -1。213 氟孕酮釋放模型運(yùn)用 SPSS 軟件分析 FG A

17、釋 放規(guī)律 , 得出釋放規(guī)律模型 , 并 將釋放量延續(xù)至 15d 。y 1=316436-012517d y 2=316718-012260d y 3=319390-011129d y 法國 =215505-0y 為 FG A ;時(shí)間 (天 。由圖 1可 知 , 3種 規(guī) 格 的 “ 羊樂”中 FG A 的釋放模型為斜 率小于 0的線性模型 , 30mg 劑 量組 的 斜 率 絕 對(duì) 值 (012517 大于 40mg 劑量組 (012260 , 更大于 50mg 劑量組 (011129 和法國產(chǎn)品 (010705 。據(jù)模型 推測(cè) , 在第 15天 , 30mg 劑量組 的 FG A 理論釋放

18、量近似于 0mg , 40mg 劑量組小于 013mg d -1, 而 50mg 劑量組大于 013mg d -1。表 2 3種規(guī)格 “ 羊樂”和 Synchrop art 中 FG A 的每日釋放量T able 2 R elease amount of fluorgestone acetate (FG A per d ay in Synchrop art and three types of intravaginal sponges ( x ±S E 觀察時(shí)間 /d氟孕酮釋放量 /mg d -1 FG A release am ount30mg 40mg 40mg (Synchro

19、part 12164±01951±012151±0197 102195±11401175±0183 1a 3126±0160ab 4121±0130bc 2128±0163 43111±01633159±01534115±01192162±0162 52176±01593141±01313193±01082126±0161 62157±01463162±11383171±01262135±0192

20、 72111±0150a 2141±0145ab 3149±0114bc 2167±0172 81167±0141a 1171±0159ab 3102±0139bc 1193±0178 91124±0112a 1139±0168ab 2183±0155bc 1182±0188 100185±0102a 1120±0159ab 2146±0 161bc 1175±0188 110174±01140188±0172217

21、0±01681164±1107 120143±01150154±01 442113±01731153±0193平均值M ean2101±11032120±11223121±01882109±0140 注 :同行比較 , 小寫字母不同的兩組統(tǒng)計(jì)差異顯著 (P <0105 。N ote :Values with different superscript letters between tw o groups in the same row were significantly differe

22、nt (P <0105 .3 討 論本試驗(yàn)從規(guī)格為 50mg 的“羊樂”和法國產(chǎn)品Synchropart 中分別回收得到 99140%和 90100%的FG A , 說明用紫外分光法測(cè)定 FG A 含量的結(jié)果是可靠的 。 而從規(guī)格為 30和 40mg 的 “羊樂”中回收得到的 FG A 分別為 88123%和 86148%, 可能與紫外分光測(cè)定過程中樣本量偏離標(biāo)準(zhǔn)曲線較多有關(guān) 。據(jù)報(bào)道 , 抑制發(fā)情所需 FG A 量只要達(dá)到 013014mg d -1即可 8。本研究發(fā)現(xiàn) , 30mg 劑量組和40mg 劑量組在第 12天的釋放量分別為 (0143±0115 mg d -1和

23、(0154±0144 mg d -1, 說明其放置時(shí)間不能超過 12d , 否則不能很好發(fā)揮誘導(dǎo)發(fā)情和同期發(fā)情作用 。 50mg 劑量組在第 12天的釋放量圖 1 FG A 釋放模擬曲線Fig. 1 The release model of flurogestone acetate (FG A in Synchrop art and three types of intravaginal sponges (containing 30, 40and 50mg of FG A 7 7第 2期 何曉紅等 :陰道海棉栓 “ 羊樂”中醋酸氟孕酮體外釋放規(guī)律研究為 (2113±0173

24、 mg d -1, 根據(jù)釋放模型推測(cè) , 第 15天的釋放量大于 014mg d -1, 說明應(yīng)用這種規(guī)格的“ 羊樂”可在陰道內(nèi)放置至少 15d 。從圖 1模擬曲線可知 , 法國產(chǎn)品的每日 FG A 釋放量曲線比較平穩(wěn) , 說明其海綿的緩釋效果優(yōu)于國 產(chǎn)海綿 。 因此 , 為了提高國產(chǎn)制劑的緩釋效果 , 有必要尋找新的海綿制品 。本實(shí)驗(yàn)主要參考國外藥典介紹的方法 3進(jìn)行試驗(yàn) , 所用溫度為 60 , 與海綿栓在動(dòng)物陰道內(nèi)所處 的內(nèi)環(huán)境不一致 , 但與產(chǎn)品加工工藝一致 。據(jù)國外資料報(bào)道 , 陰道海綿栓中 FG A 的釋放量與其含量 、加工方法及釋放時(shí)期等有關(guān) 。例如 , 用 烘干方法制備 , F

25、G A 含量分別為 10, 20和 30mg 的海綿栓 , 置于陰道中 16d 的平均每天釋放量分別為 810%, 515%和 419%; 而用自然干燥方法制備 , FG A 含量分別為 10, 20和 30mg 的海綿栓 , 置于陰道 中 16d 的平均每天釋放量分別為 415%, 413%和 217%9。參考文獻(xiàn) :1 R obins on T J. Use of progestagen 2im pregnated sponges inserted intravaginally or subcutaneously for the control of the oestrous cycle

26、in sheep J.Nature , 1965, 206:39.2 Cunningham J M N , Deas D W , Fitzsim ons J. Synchronisation of oestrus in J., 80(20 :590591. 3 Reynolds James E F. M artindale (the Extra Pharmacopoeia oyal , 13061307.4 M ohan B K, Y ie W C. Intravaginal of an in vitro system for studying the intravagi 2nal relea

27、se and permeation of Sciences , 1984, 73(10 :14641468.5 K illian D B , K , W J corpora lutea induced in eatrous 2synchronized cycling and anestrous ewes J.J Anim Sci ,1985, 61(1 :2116 Quinlivan T D. The relationship between numbers of spermatoz oa inseminated and fertilization rate of ova in ewes treated