急性放射性分泌性中耳炎新西蘭兔模型的建立及研究

1、急性放射性分泌性中耳炎新西蘭兔模型的建立及研究         11-03-31 16:05:00     編輯：studa20              作者：張志鋼 陳洽鑫 毛永林 鄭億慶 劉翔【摘要】  【目的】 建立急性放射性分泌性中耳炎的新西蘭兔動(dòng)物模型，并觀察不同輻射劑量、方式對(duì)中耳的影響。 【方法】 72只健康的新

2、西蘭兔隨機(jī)分成4組(每組18只)，包括對(duì)照組(A組)和3個(gè)實(shí)驗(yàn)組B、C、D。 B組施加輻射劑量為30 Gy/次 × 1次，C組為10 Gy/次 × 3次，D組為10 Gy/次 × 6次。在照射前及照射后第1天，第1、2、4、8、12周分別行耳內(nèi)鏡、中耳CT、聲阻抗檢查，并在放療后的每個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)處死各個(gè)組的3只兔子，取其鼻咽黏膜、聽(tīng)泡行組織學(xué)檢查?！窘Y(jié)果】 初步建立了急性放射性分泌性中耳炎的新西蘭兔動(dòng)物模型?！窘Y(jié)論】 利用新西蘭兔建立放射性分泌性中耳炎的動(dòng)物模型是可行的，但單次大劑量的電離輻射是成功建模的關(guān)鍵。 【關(guān)鍵詞】  輻射; 分泌性中耳炎; 動(dòng)物

3、模型Abstract： 【Objective】 To establish a model of radiological secretory otitis media using New Zealand rabbits， and to observe the results of different radiation dosages and modalities. 【Methods】 Seventy-two healthy New Zealand rabbits were randomly divided into four groups (18 for each)， including o

4、ne control group named group A， and three experimental groups named group B， C and D. Group B was administered with a radiation dose of 30 Gy per for once， while group C with 10 Gy per for three times and group D with 10 Gy per for six times. Before given the radiation and on the 1st day， 1st week，

5、2nd week， 4th week， 8th week and 12th week after， endotoscopy was carried out respectively as well as CT， auditory impedance test. Meanwhile， 3 rabbits each group for each time were sacrificed and specimens of bullae and mucous membrane of nasopharynx were collected for histological examination. 【Re

6、sults】 Preliminary success was gained in the establishment of a animal model of secretory otitis media using New Zealand rabbits. 【Conclusions】 Using New Zealand rabbits for establishing a model of radiological secretory otitis media is viable， and a large radiation dose for a single time is the key

7、 point.放射治療是鼻咽癌的首選治療方法，放療后常有腮腺、腦干、視神經(jīng)等器官組織的放射性并發(fā)癥見(jiàn)報(bào)道，而中耳功能上的改變較少受到關(guān)注1。事實(shí)上，輻射引起分泌性中耳炎(secretory otitis media， SOM)是非常常見(jiàn)的，可嚴(yán)重降低患者的生存質(zhì)量，且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，治療困難。為了深入研究其發(fā)病機(jī)制及探討有效的防治方法，建立一個(gè)好的放射性分泌性中耳炎的動(dòng)物模型是有必要的。目前的相關(guān)報(bào)道都局限于鼠類模型的研究中2，本實(shí)驗(yàn)嘗試采用新西蘭兔為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，因其具有一定的優(yōu)勢(shì)，如對(duì)電離輻射及麻藥的耐受力強(qiáng)，且更加接近人體結(jié)構(gòu)，可模擬鼻咽癌放射治療的方法建立一個(gè)合適的動(dòng)物模型，并經(jīng)此探討不同輻射

8、劑量、方式對(duì)中耳的影響，有助于理解急性放射性分泌性中耳炎的發(fā)病機(jī)制。1 材料和方法1.1 材 料選擇健康新西蘭大白兔(雌雄不限)(由廣東省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供粵監(jiān)證字：2008D006) 72只，入選條件：體質(zhì)量2.3 (S = 0.2) kg;耳內(nèi)鏡檢查外耳道皮膚無(wú)紅腫，鼓膜完整，無(wú)鼓室積液征;鼓室導(dǎo)抗圖為A型曲線圖;中耳CT提示正常。隨機(jī)分為4組，A組為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，其余3組為實(shí)驗(yàn)組，即B、C、D組。參照文獻(xiàn)3-4照射次數(shù)，同時(shí)模擬鼻咽癌患者放射劑量，對(duì)各組施加輻射照射：A組未予照射;B組(30 Gy/次，1次);C組(10 Gy/次，3次);D組(10 Gy/次，6次)。將購(gòu)自中山大學(xué)的德國(guó)產(chǎn)

9、戊巴比妥鈉配置成30 mL/L濃度。德國(guó)西門子，sensation 64，層厚0.6 mm，CTD 32.32 G，電壓：120 kV，電流146 mA，Kernel：u75usharp+。1.2 方 法用3%戊巴比妥鈉將新西蘭兔成功麻醉后，按文獻(xiàn)3-4照射方法，俯臥位照射，照射野10 cm × 15 cm，源皮距60 cm，劑量深度2.5 cm。照射中心位于雙中耳之間，表面加蓋一厚約1 cm的濕毛巾作為補(bǔ)償膜，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組也麻醉后予以假照射。在施加輻射前及輻射達(dá)到總劑量后的第1天及第1、2、4、8、12周均依次行聲阻抗、中耳CT和耳內(nèi)鏡檢查，觀察外耳道、鼓膜、鼓室內(nèi)的改變。同時(shí)在每個(gè)

10、觀察時(shí)間點(diǎn)上隨機(jī)處死各組中的3只兔子，取鼻咽部黏膜組織(部位：咽鼓管咽口的上方2 3 mm處)，再解剖游離出聽(tīng)泡，將取出組織浸泡在配置好的40 g/L多聚甲醛溶液中固定36 h(聽(tīng)泡必須預(yù)先鉆孔注入多聚甲醛溶液)后，將后者在50 mL/L硝酸溶液中脫鈣24 h，取出在聽(tīng)泡后經(jīng)鼓岬垂直切開(kāi)，酒精脫酸、脫水，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色觀察鼻咽部、聽(tīng)泡內(nèi)的組織變化。2 結(jié) 果2.1 中耳CT檢查結(jié)果施加輻射照射后各時(shí)間點(diǎn)分別做中耳CT檢查，可見(jiàn)A、C、D組均未出現(xiàn)異常表現(xiàn)(圖1a、c);而B(niǎo)組則在第8周時(shí)有3只兔子單側(cè)鼓室內(nèi)出現(xiàn)積液征(圖1b)。2.2 耳內(nèi)鏡檢查結(jié)果施加輻射照射前健康兔外耳道無(wú)充血、腫脹，鼓膜形態(tài)正常，無(wú)充血或光錐改變(圖2a)。B組照射后第8周時(shí)出現(xiàn)中耳積液，耳內(nèi)鏡下見(jiàn)外耳道皮膚充血、腫脹，鼓膜增厚，光錐縮短、分散(圖2b)，與其CT結(jié)果一致。C組照射后8周時(shí)無(wú)中耳炎跡象(圖2c)。D組照射后8周時(shí)外耳道及鼓膜明顯腫脹(圖2d)。2.3 聲阻抗檢查結(jié)果鼓室導(dǎo)抗圖測(cè)試圖型按Liden/Jerger分類法，正常兔子麻醉狀態(tài)下均為A型圖或As型圖，本文統(tǒng)稱有峰型圖。施加輻射照射前的導(dǎo)納值、峰壓值、耳道容積及梯度值范圍分別為0.2 1.0 mL、-500 +950 Pa、1.89 2.55 mL和0 0.58。其中峰壓值范