胎盤(pán)表皮生長(zhǎng)因子受體的表達(dá)改變與胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)遲緩的關(guān)系研究

1、    胎盤(pán)表皮生長(zhǎng)因子受體的表達(dá)改變與胎兒宮內(nèi) 生長(zhǎng)遲緩的關(guān)系研究        【摘要】目的研究胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)遲緩(IUGR)患者胎盤(pán)表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)的表達(dá)與正常妊娠及巨大兒胎盤(pán)之間是否有差異，并分析其變化與胎盤(pán)絨毛發(fā)育是否有關(guān)。方法取足月分娩胎盤(pán)組織標(biāo)本63例，于分娩后立即置于4%中性甲醛緩沖液固定。用免疫組織化學(xué)SP法進(jìn)行胎盤(pán)EGFR檢測(cè)。同時(shí)對(duì)末梢絨毛血管大小、面積及絨毛面密度等進(jìn)行分析測(cè)量。結(jié)果IUGR組胎盤(pán)EGFR的表達(dá)較正常對(duì)照組和巨大兒組

2、明顯增加(P<0.01)，IUGR胎盤(pán)末梢絨毛血管數(shù)及血管占絨毛橫面積比均明顯減少(P均<0.05；P均<0.001)；而巨大兒組與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。三組胎盤(pán)絨毛面密度無(wú)顯著性差異(P>0.05)。結(jié)論IUGR兒胎盤(pán)EGFR表達(dá)增加與其胎盤(pán)絨毛發(fā)育不良有關(guān)，EGFR在胎兒胎盤(pán)的生長(zhǎng)發(fā)育及IUGR的發(fā)生中起重要調(diào)節(jié)作用?！娟P(guān)鍵詞】表皮生長(zhǎng)因子受體胎盤(pán)病理學(xué)胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)遲緩免疫組化Relationship between placental epidermal growth factor receptor expression and intrauterine gro

3、wth retardationLi Guiyu，Sun Changxue（Obstetric and Gynecologic Department of Guiyang Medical college,Guiyang 550004）【Abstract】ObjectiveTo investigate if the placental epidermal growth factor receptor(EGFR)differs between women with intauterine growth retardation(IUGR),fetal macrosomia and normal pre

4、gnancies,and analyze if that difference has a bearing on pathological changes of microvilli.MethodsTissue samples from 63 term placentas were obtained immediately after term delivery and fixed in 4% buffered neutral formalin.The expression of EGFR in human placenta was analyzed by streptavidin perox

5、idase techniques.The size of microvillus capillary and villi area density were also measured by multifuction colour pathological picture analysis system.ResultsIncreased expression of EGFR in placentas of IUGR group was found clearly increased compared with the normal control(P<0.01)and macrosomi

6、a group(P<0.05).By contrast,the number of capillary in a microvillus and the area ratio of capillary to microvillus both significantly decreased in IUGR group(P<0.05,P<0.001).Whereas there were no significant differences between macrosomia and the normal group in all above items.Neither vil

7、li area density in IUGR nor that in macrosomia differed from that in the control(P>0.05).ConclusionOur findings imply that IUGR is associated with higher expression of EGFR in placentas,which may has a bearing on placental growth retardation.But marosomia is without effect.These fundings are cons

8、istent with the important role of EGFR in the regulation of fetal and placental growth.【Key words】Epidermal growth factor receporPlacentaPathologyFetal growth retardationImmunohistochemistry表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor,EGF)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種重要細(xì)胞生長(zhǎng)因子，可刺激多種細(xì)胞增生或分化。研究表明，EGF可誘導(dǎo)正常人胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞分化并影響胎盤(pán)激素的分泌，可能在胎兒胎盤(pán)生長(zhǎng)發(fā)育

9、中起重要作用1。其調(diào)節(jié)作用是通過(guò)與靶細(xì)胞上的EGF受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)結(jié)合，激活受體自身酪氨酸激酶并引發(fā)自身和底物磷酸化反應(yīng)而實(shí)現(xiàn)的，而胎盤(pán)富含EGFR1，2。本文采用免疫組化方法研究了胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)遲緩(IUGR)胎盤(pán)上EGFR的表達(dá)情況，并與正常胎兒和巨大兒胎盤(pán)比較，同時(shí)分析各組胎盤(pán)絨毛血管的改變情況。1材料與方法1.1研究對(duì)象和材料來(lái)源隨機(jī)選取1997年12月至1998年6月在貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院產(chǎn)科自然分娩或剖宮產(chǎn)的足月單胎妊娠婦女共63例，孕齡3742周，年齡2130歲。根據(jù)新生兒出生體重分組，新生兒體重小于胎齡兒23例為IU

10、GR組；巨大兒15例為巨大兒組；正常適齡兒25例為正常對(duì)照組。采取胎盤(pán)組織標(biāo)本的同時(shí)詳細(xì)記錄新生兒出生體重、胎盤(pán)重量和孕婦年齡、身高、孕齡等臨床資料。以新生兒出生體重低于同孕齡兒的第10百分?jǐn)?shù)者為IUGR(標(biāo)準(zhǔn)參照中國(guó)15城市不同胎齡新生兒出生體重百分位數(shù)分布表)，新生兒出生體重4000g者為巨大兒。1.2標(biāo)本制備標(biāo)本均于分娩后立即取得，取胎盤(pán)中間帶胎兒面組織塊0.50.8cm3大小，迅速固定于4%中性甲醛緩沖液中。48小時(shí)后脫水、石蠟包埋，5m連續(xù)切片。每例標(biāo)本分別進(jìn)行HE染色和EGFR免疫組化染色。1.3免疫組化染色方法及結(jié)果評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)采用過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素(SP)法。SP試劑盒購(gòu)自

11、北京中山生物技術(shù)有限公司；鼠抗人EGFR單克隆抗體為美國(guó)Santa Cruz公司產(chǎn)品，工作質(zhì)量分?jǐn)?shù)(濃度)為180。以正常鼠血清(相同質(zhì)量分?jǐn)?shù))代替一抗作陰性對(duì)照。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，光鏡下觀(guān)察胞膜或(和)胞漿中有棕黃色特異著色者為陽(yáng)性染色，觀(guān)察5個(gè)視野(200倍)。結(jié)果評(píng)定分四級(jí)：與背景相比，“-”為細(xì)胞內(nèi)無(wú)棕黃色陽(yáng)性顆?；虺逝c背景均勻一致的淡黃色；“+”為膜或漿內(nèi)可見(jiàn)淡棕黃色顆粒；“+”為膜、漿內(nèi)可見(jiàn)較深棕黃色顆粒；“+”為膜、漿內(nèi)可見(jiàn)深棕黃色顆粒。1.4HE染色像分析用多功能真彩色病理像分析系統(tǒng)CMIAS在光鏡下進(jìn)行場(chǎng)測(cè)量。絨毛面密度(絨毛面積與總場(chǎng)面積比值)測(cè)量每例觀(guān)測(cè)5個(gè)視野(1

12、00倍)。在400倍視野下觀(guān)測(cè)單個(gè)末梢絨毛橫切面內(nèi)毛細(xì)血管直徑d，絨毛直徑D及血管數(shù)n(D、d測(cè)量時(shí)選擇較短徑線(xiàn)并保持二者測(cè)量方向一致)。計(jì)算血管占絨毛橫切面積比=d2*n/D2，每例選擇不同視野觀(guān)測(cè)10個(gè)絨毛。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理等級(jí)資料用秩和檢驗(yàn)，計(jì)量資料用單因素方差分析進(jìn)行相關(guān)組間顯著性檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)=0.05，計(jì)量資料結(jié)果用±s表示。2結(jié)果2.1各組臨床資料分析三組間孕婦年齡、身高、孕齡和胎兒男女比例分別比較均無(wú)顯著性差異。新生兒出生體重為IUGR組<正常對(duì)照組<巨大兒組，有顯著性差異，見(jiàn)表1。2.2EGFR在各組胎盤(pán)中的表達(dá)EGFR主要表達(dá)于胎盤(pán)的合體滋養(yǎng)細(xì)胞(ST

13、)和中間型滋養(yǎng)細(xì)胞(IT)胞膜和胞漿中，ST較IT表達(dá)豐富，個(gè)別細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞(CT)亦有表達(dá)，尤其IUGR胎盤(pán)中明顯，染色強(qiáng)度以刷狀緣最強(qiáng)。IUGR組胎盤(pán)EGFR染色強(qiáng)度較正常對(duì)照組和巨大兒組明顯增加，差異具顯著性。而巨大兒組與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異，見(jiàn)表2。表1IUGR組、巨大兒組和正常對(duì)照組臨床資料比較(±s)組別例數(shù)孕婦年齡(歲)孕婦身高(cm)孕齡(周)新生兒性別比(男女)新生兒出生體重(g)IUGR組2326.4±3.331)157.3±4.351)39.8±1.871)1.111)2376.1±243.112)、3)巨大兒組1527

14、.3±1.58161.0±3.3240.3±0.821.414112.9±128.942)正常對(duì)照組2526.8±2.17157.9±4.6839.5±1.231.413213.9±202.891)P>0.05三組比較，2)P<0.01與正常對(duì)照組比較，3)P<0.001與巨大兒組比較 表2IUGR組與巨大兒組和正常對(duì)照組胎盤(pán)絨毛EGFR表達(dá)的比較組別例數(shù)EGFR表達(dá)密度級(jí)別-+IUGR組1)、2)2313811巨大兒組3)150681正常對(duì)照組252111021)P<0.01與正常對(duì)照組比

15、較，2)P<0.05與巨大兒組比較，3)P>0.05與正常對(duì)照組比較2.3各組胎盤(pán)絨毛組織計(jì)量分析IUGR組與對(duì)照組比較不僅胎盤(pán)末梢絨毛血管數(shù)減少，而且血管占絨毛橫斷面積比也明顯減少，差異具有顯著性。巨大兒組與正常對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。三組胎盤(pán)絨毛面密度比較無(wú)顯著性差異。但I(xiàn)UGR組胎盤(pán)重量較正常對(duì)照組和巨大兒組低，有顯著性差異，見(jiàn)表3。 3討論EGF被廣泛認(rèn)為可刺激多種組織細(xì)胞的增生分裂或分化，在人體和動(dòng)物多數(shù)組織器官的發(fā)育和成熟中起重要作用。既往研究普遍認(rèn)為EGF可促進(jìn)人胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞的分化，調(diào)節(jié)hCG和hPL的分泌，并在胚胎和胎盤(pán)的植入中發(fā)揮作用13。研究表明， 在足月妊娠胎

16、盤(pán)中EGFR主要分布于有絲分裂不活躍的ST和IT中，在ST中表達(dá)較豐富，且刷狀緣表達(dá)強(qiáng)烈。證實(shí)正常晚期妊娠時(shí)，EGFR及配子主要與合體滋養(yǎng)細(xì)胞的分化功能有關(guān)。但個(gè)別CT也有EGFR表達(dá)，尤其在IUGR胎盤(pán)明顯，說(shuō)明即使在足月妊娠，EGFR也可能存在促增殖作用。絨毛刷狀緣是直接與母血接觸并支持母胎交換的部位，有動(dòng)物研究表明EGF可增加孕鼠胎盤(pán)的通透性4。EGFR在刷狀緣表達(dá)最強(qiáng)，提示EGF及受體可能通過(guò)調(diào)節(jié)胎盤(pán)細(xì)胞膜的通透性而影響母兒某些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的交換，調(diào)節(jié)胎兒的生長(zhǎng)。表3IUGR組、巨大兒組與正常對(duì)照組胎盤(pán)絨毛組織計(jì)量分析結(jié)果組別例數(shù)末梢絨毛血管數(shù)(個(gè))血管占絨毛面積比(橫切面)絨毛面密度(絨

17、毛面積與總面積比)胎盤(pán)重量(g)IUGR組232.60±0.701)0.1899±0.09762)0.4265±0.05634)437.30±43.775)、6)巨大兒組153.10±0.693)0.4879±0.18753)0.4556±0.0817625.50±35.915)正常對(duì)照組253.30±0.580.3659±0.09960.4448±0.042521.10±44.351)P<0.05與正常對(duì)照組和巨大兒組比較，2)P<0.001與正常對(duì)照組和巨大兒

18、組比較，3)P0.05與正常對(duì)照組比較，4)P>0.05三組比較，5)P<0.05與正常對(duì)照組比較，6)P<0.01與巨大兒組比較 研究結(jié)果表明，IUGR表達(dá)密度較正常對(duì)照組和巨大兒組明顯增加，而絨毛面密度(絨毛面積與總場(chǎng)面積比值)則無(wú)明顯改變，提示胎盤(pán)絨毛EGFR的表達(dá)增加與IUGR病變有關(guān)。研究同時(shí)表明IUGR兒胎盤(pán)末梢絨毛內(nèi)不僅毛細(xì)血管數(shù)減少，而且血管占絨毛橫斷面積比也顯著減小。此外，我們觀(guān)察IUGR胎盤(pán)絨毛還較多伴細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞增生和血管細(xì)胞合體膜減少現(xiàn)象。這些提示IUGR兒胎盤(pán)絨毛存在發(fā)育不良或遲緩。既往研究表明，隨妊娠進(jìn)展胎盤(pán)EGFR表達(dá)密度逐漸減弱2，3。因而，我

19、們認(rèn)為IUGR兒胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞中EGFR表達(dá)密度的增加可能與其胎盤(pán)絨毛發(fā)育不良有關(guān)。關(guān)于二者的關(guān)系可有兩種解釋?zhuān)阂环矫婵赡苡捎谔ケP(pán)絨毛發(fā)育不良，滋養(yǎng)細(xì)胞功能下降，致使產(chǎn)生EGF減少，從而刺激滋養(yǎng)細(xì)胞上EGFR生成增多，此可視為一種代償反應(yīng)。既往有研究表明IUGR兒羊水及臍血中EGF水平均較正常兒下降5，6，可以推測(cè)在IUGR胎盤(pán)微環(huán)境中，EGF與EGFR間存在某種形式負(fù)反饋調(diào)節(jié)，研究證明EGF對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞功能調(diào)節(jié)屬受體水平調(diào)節(jié)，不同濃度EGF對(duì)其受體具有不同的調(diào)節(jié)作用，小劑量EGF可使EGFR數(shù)量增加，而大劑量EGF則使受體數(shù)量減少7。另一方面更可能由于某些病理因素或基因變化導(dǎo)致絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞中EG

20、FR表達(dá)數(shù)目增加而活性下降，終致滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育不良及細(xì)胞功能低下。因此我們認(rèn)為，即便IUGR胎兒胎盤(pán)中EGFR含量增加，但其磷酸化活性可由于基因表達(dá)類(lèi)型改變、滋養(yǎng)細(xì)胞分化異?；駿GF反應(yīng)減弱等原因而降低，而EGFR活性下降或功能蛋白減少可導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞分化不良及功能低下，從而終致胎兒胎盤(pán)絨毛發(fā)育障礙，影響胎兒-胎盤(pán)單位的功能。研究中，巨大兒胎盤(pán)末梢絨毛血管數(shù)、血管絨毛橫斷面積比及絨毛面密度分別與正常對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異，其胎盤(pán)EGFR表達(dá)密度也無(wú)明顯改變。提示巨大兒無(wú)胎盤(pán)絨毛發(fā)育障礙及胎兒灌流不良，胎盤(pán)功能基本正常。Varner等5也證明巨大兒羊水中EGF水平與正常兒比較無(wú)改變。上述研究結(jié)果提示

21、EGFR及其配子作為調(diào)節(jié)因子與IUGR的發(fā)生及其胎盤(pán)病變有關(guān)，從而在胎兒胎盤(pán)的生長(zhǎng)發(fā)育中起重要作用。但是，其中的具體調(diào)節(jié)及作用機(jī)制還需進(jìn)一步探討研究。作者單位：李貴瑜（貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院婦產(chǎn)科550004）孫長(zhǎng)學(xué)（貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院婦產(chǎn)科550004）參考文獻(xiàn)1，Morrish DW,Bhardwai D,Dabbagh LK,et al.Epidermal growth factor induces differentiation and secretion of human chorionic gonadotropin and placental lactogen in normal human placenta.J Clin Endocrinol Metab,1987;65(5):12822，Cecilia A,Takeshi M,Augustos,et al.Cytologic localization of EGF and its receptor in developing human placenta varies over the course of