重慶應(yīng)用基礎(chǔ)研究項(xiàng)目申請書

1、 (一)、立項(xiàng)依據(jù)項(xiàng)目研究的重要性、必要性（2000字以內(nèi)）人口老齡化是全世界面臨的重大課題。我國人口年齡結(jié)構(gòu)在2000年即跨入老年型，比世界總體人口年齡結(jié)構(gòu)提前了10年左右，據(jù)預(yù)測到2050年，60歲以上人口的比例將由2000年的10.3上升到35左右。重慶人口老齡化也十分嚴(yán)重，根據(jù)重慶市老齡委辦公室的數(shù)據(jù)，我市60歲以上人口超過465萬，占全市人口總數(shù)的15%，這個(gè)比例遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于全國老齡化平均水平。人口老齡化為醫(yī)療保障事業(yè)提出了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，如何更有效地預(yù)防衰老和防治老年性疾病，是迫切需要解決的科研和社會問題。衰老是全身性的、多方面的、十分復(fù)雜的、循序漸進(jìn)的退化過程，研究表明基因調(diào)控在衰老過程

2、中發(fā)揮著重要的作用。近年來抗衰老基因在老年疾病中的發(fā)病機(jī)制研究逐漸成為老年醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。在眾多抗衰老基因中，Klotho基因被認(rèn)為是最理想的抗衰老基因之一1。Klotho基因于1997年由Kuro在研究轉(zhuǎn)基因小鼠時(shí)發(fā)現(xiàn)。Klotho表達(dá)缺陷的小鼠表現(xiàn)出幾乎全部與人類衰老類似的表型，如壽命縮短、不育癥、動脈硬化、皮膚萎縮、骨質(zhì)疏松、肺氣腫等，給予基因補(bǔ)救治療后其衰老表型可得到明顯改善并延長壽命，提示Klotho基因的表達(dá)產(chǎn)物具有抗衰老作用，因而被研究者用希臘神化中掌管生命之線女神Klotho來命名。Klotho基因可通過其表達(dá)蛋白發(fā)揮激素樣作用，通過調(diào)控多種細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，激活離子通道受體等途徑

3、發(fā)揮改善胰島素抵抗和對抗氧化應(yīng)激，起到抗衰老及預(yù)防老年疾病的作用24。上調(diào)Klotho基因表達(dá)是預(yù)防衰老和防治老年疾病的新途徑。人類Klotho基因變異可明顯增加年齡相關(guān)疾病的患病率。人類90的基因變異來源于單核苷酸多態(tài)性（Single Nucleotide Polymorphism, SNP）5，近年研究發(fā)現(xiàn)Klotho基因有多個(gè)SNP位點(diǎn)與臨床疾病具有遺傳關(guān)聯(lián)。由于Klotho基因是遺傳上相對保守的基因，位于編碼序列的SNP往往發(fā)生在特定的人群，如根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)顯示（/SNP/snp_ref.cgi?rs=9536314），代表編碼序列

4、常見SNP位點(diǎn)的KL-VS在中國漢族人群及日本人群頻率為零。位于Klotho基因調(diào)控序列的SNP在疾病發(fā)生中有更重要的意義。既往對于調(diào)控序列主要集中在G-395A多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)與骨質(zhì)疏松、冠狀動脈狹窄、高血壓、認(rèn)知功能障礙、腦血管疾病等均有相關(guān)性，而且通過凝膠電泳遷移率（EMSA）分析顯示該位點(diǎn)G/A替換后可影響DNA和蛋白的結(jié)合6。但既往研究多是針對臨床疾病的基因流行病學(xué)調(diào)查，單一SNP單一人群的研究對不同人種間遺傳背景的差異不夠重視，針對SNP位點(diǎn)的功能研究不夠深入。我們前期工作中發(fā)現(xiàn)，在重慶漢族人群中Klotho基因G-395A多態(tài)性與動脈僵硬度增高有相關(guān)性4，初步的功能分析提示G-

5、395A可能是潛在的具有調(diào)控意義的SNP位點(diǎn)（regulatory SNP， rSNP）,對這一SNP位點(diǎn)進(jìn)行功能分析，明確該位點(diǎn)在Klotho基因表達(dá)調(diào)控中的作用及其機(jī)制，有助于老年疾病的早期預(yù)防，并為抗衰老藥物靶點(diǎn)提供新的理論依據(jù)。主要參考文獻(xiàn)：1 Wang Y, Sun Z. Current understanding of klotho. Ageing Res Rev. 2009, 8(1):43-51. 2 Russell SJ, Kahn CR. Endocrine regulation of ageing. Nat Rev Mol Cell Viol. 2007,8:681-91

6、3 Kuro-O M. Klotho and aging. Biochim Biophys Acta. 2009 Feb 18. Epub ahead of print 4 Kuro-o M.Klotho as a regulator of oxidative stress and senescence.Biol Chem. 2008,389(3):233-41. 5 Bahlo M, Stankovich J, Speed TP, et al. Detecting genome wide haplotype sharing using SNP or microsatellite haplot

7、ype data. Hum Genet, 2006, 119:38-50.6 Kawano K, Ogata N, Chiano M, et al. Klotho gene polymorphisms associated with bone density of aged postmenopausal women. J Bone Miner Res 2002,17:17441751.7 王虎林, 司良毅, 孫蘭英, 等. Klotho基因G-395A多態(tài)性與動脈硬化的相關(guān)性研究. 中華老年心腦血管病雜志,2008,10: 96-98.(二)、研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢目前研究現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢（重點(diǎn)項(xiàng)目

8、需附查新報(bào)告）單核苷酸多態(tài)性是人類基因組中分布廣泛、密度高、易于批量檢測且相對穩(wěn)定的第三代遺傳標(biāo)記，在疾病易感性、藥物敏感/抵抗研究中發(fā)揮著越來越重要的作用。由于SNP在基因組中不僅僅是定位標(biāo)記，有一定數(shù)量的SNP直接影響了基因表達(dá)調(diào)控及蛋白活性。近年來SNP與疾病遺傳關(guān)聯(lián)研究急劇增加，如何更好的利用這些研究結(jié)果成了當(dāng)前一個(gè)重要課題。與編碼序列的SNP相比，非編碼序列中SNP密度更高，其中有不少具有調(diào)控意義的SNP。對于調(diào)控性SNP進(jìn)行深入的功能分析是當(dāng)前研究的一個(gè)重要趨勢1。在對Klotho基因的SNP研究中，有多個(gè)SNP位點(diǎn)與老年疾病有遺傳關(guān)聯(lián)。其中位于5側(cè)翼的G-395A多態(tài)性位點(diǎn)在體外

9、實(shí)驗(yàn)顯示，G/A替換后的DNA序列結(jié)合核蛋白能力有差異，近年來逐漸受到重視。已有研究表明G-395A多態(tài)性在特定人群中與骨質(zhì)疏松、冠心病、高血壓、腦血管病、認(rèn)知功能障礙有相關(guān)性2-5，在漢族人群中我們也發(fā)現(xiàn)G-395A位點(diǎn)與動脈僵硬度有相關(guān)性。這些臨床疾病關(guān)聯(lián)研究顯示該位點(diǎn)在多種老年疾病中有重要意義，但該位點(diǎn)對Klotho基因表達(dá)調(diào)控的影響到目前為止尚不清楚，針對該位點(diǎn)的功能研究尚未見報(bào)道。通過生物信息學(xué)分析顯示Klotho基因的5側(cè)翼區(qū)無典型的TATA盒，其表達(dá)調(diào)控方式目前仍然不清楚。通過firstEF（/tools/FirstEF/）及promote

10、r scan （/molbio/proscan/）等啟動子預(yù)測工具，分析其啟動子可能位于Klotho基因5側(cè)翼約-500bp范圍內(nèi)，其中存在5個(gè)SP1結(jié)合位點(diǎn)，符合缺少TATA盒的啟動子缺點(diǎn)。我們近期根據(jù)這5個(gè)SP1結(jié)合位點(diǎn)設(shè)計(jì)PCR引物進(jìn)行了啟動子刪減分析，成功構(gòu)建了4個(gè)啟動子缺失突變的報(bào)告基因載體，與內(nèi)參載體共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞及hela細(xì)胞，報(bào)告基因活性檢測顯示在-300bp-500bp存在啟動子活性的序列。G-395A位點(diǎn)也處于區(qū)域，由于體外G/A替換可使該位點(diǎn)所在序列核蛋白結(jié)合能力有差異，我們提出G-395A這個(gè)SNP位點(diǎn)是潛在

11、調(diào)控性SNP位點(diǎn)的假說。運(yùn)用Genomatix（http:/www.genomatix.de/cqi-bin）及MAPPER（）等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測工具分析發(fā)現(xiàn)G-395A位點(diǎn)堿基變異可能影響MZF1、ppar、E2F三個(gè)轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合，但哪個(gè)轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合受到影響及影響程度未經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，細(xì)胞水平的驗(yàn)證也未見報(bào)道。本項(xiàng)目擬在原工作基礎(chǔ)上，進(jìn)一步完善啟動子序列刪減分析和雙報(bào)告基因活性檢測，對G-395A位點(diǎn)進(jìn)行功能定位，確認(rèn)該位點(diǎn)是處于核心啟動子區(qū)域，還是在增強(qiáng)子、沉默子等調(diào)控元件序列中。根據(jù)生物信息學(xué)的預(yù)測，運(yùn)用EMSA結(jié)合單克隆抗體實(shí)驗(yàn)，對G/A替

12、換可能影響的轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行預(yù)測。針對確認(rèn)的轉(zhuǎn)錄因子，運(yùn)用其表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染和序列特異性RNA干擾技術(shù)，從正反兩方面證實(shí)G-395A的功能。主要參考文獻(xiàn)：1 Chorley BN, Wang X, Campbell MR, et al. Discovery and verification of functional single nucleotide polymorphisms in regulatory genomic regions: current and developing technologies. Mutat Res. 2008,659(1-2):147-57。2 Imamura A

13、, Okumura K, Ogawa Y, et al. Klotho gene polymorphism may be a genetic risk factor for atherosclerotic coronary artery disease but not for vasospastic angina in Japanese. Clin Chim Acta. 2006, 371(1-2):66-70.3 Rhee EJ, Oh KW, Yun EJ, et al. Relationship between polymorphisms G395A in promoter and C1

14、818T in exon 4 of the KLOTHO gene with glucose metabolism and cardiovascular risk factors in Korean women. J Endocrinol Invest. 2006,29(7):613-8.4 Rhee EJ, Oh KW, Lee WY，et al. The differential effects of age on the association of KLOTHO gene polymorphisms with coronary artery disease. Metabolism. 2

15、006,55(10):1344-51.5 王虎林, 肖航, 司良毅. Klotho基因與心血管病的關(guān)系及研究現(xiàn)狀. 中華老年心腦血管病雜志, 2007, 9: 136-138.（三）、擬解決的主要科學(xué)問題詳細(xì)闡述所要解決的主要科學(xué)問題內(nèi)涵項(xiàng)目組在前期工作中注意到SNP與臨床疾病的遺傳關(guān)聯(lián)研究因不同人種的遺傳背景結(jié)果有一定差異，因而選擇G-395A在重慶人群中做了分析，結(jié)果提示G-395A與動脈僵硬度有相關(guān)性。明確該位點(diǎn)僅僅是一個(gè)遺傳標(biāo)記還是具有調(diào)控作用SNP，對Klotho相關(guān)的多種老年疾病研究有重要意義。因此本項(xiàng)目擬進(jìn)一步明確G-395A在啟動序列中的順式元件作用，闡明在細(xì)胞水平該位點(diǎn)對基因

16、表達(dá)調(diào)控的影響及其機(jī)制。通過研究為Klotho基因的表達(dá)調(diào)控研究提供新的線索，也為防治Klotho基因相關(guān)的多種老年疾病提供新的思路，為老年疾病治療提供新的藥物作用靶點(diǎn)。（四）、主要研究內(nèi)容研究內(nèi)容要圍繞科學(xué)問題擬定，要突出重點(diǎn)，避免分散或拼盤現(xiàn)象。1.進(jìn)一步完善啟動子序列刪減分析，確定Klotho基因的核心啟動子，對G-395A位點(diǎn)進(jìn)行功能定位。前期結(jié)果提示G-395A多態(tài)性位點(diǎn)所在的約200bp序列有啟動子活性。下一步擬繼續(xù)對Klotho基因5側(cè)翼-300bp至-500bp的這個(gè)片斷進(jìn)行缺失突變，構(gòu)建報(bào)告基因載體，通過報(bào)告基因活性檢測明確G-395A位點(diǎn)是否處于核心啟動子位置，或者是否具有

17、增強(qiáng)子或者沉默子作用。2. EMSA結(jié)合單克隆抗體分析，明確其G/A替換影響的轉(zhuǎn)錄因子，對G-395A位點(diǎn)進(jìn)行功能預(yù)測。通過HEK293細(xì)胞核蛋白與生物素標(biāo)記的DNA探針進(jìn)行作用，電泳顯影分析，再用MZF1、ppar、E2F抗體進(jìn)行超遷移反應(yīng)，明確G/A替換對DNA探針與核蛋白相互作用的影響，明確G/A替換影響的轉(zhuǎn)錄因子。3.轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染及位點(diǎn)特異性RNA干擾，從正反兩方面驗(yàn)證G/A替換對基因轉(zhuǎn)錄的影響。根據(jù)第2步確認(rèn)的轉(zhuǎn)錄因子，購買或自行構(gòu)建其表達(dá)載體，與含Klotho基因啟動子的報(bào)告基因載體共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，明確上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)后G/A替換對Klotho基因啟動子啟動活性的

18、影響。構(gòu)建特異性的RNA干擾載體，經(jīng)共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)比較啟動活性。以上可從正反兩方面驗(yàn)證特定轉(zhuǎn)錄因子的作用。（五）、總體研究方案闡述學(xué)術(shù)思路、技術(shù)路線、與國內(nèi)外同類研究相比的創(chuàng)新點(diǎn)與特色、可行性分析等。1. 學(xué)術(shù)思想：由于Klotho基因G-395A多態(tài)性與多種老年疾病有遺傳關(guān)聯(lián)，而該SNP位點(diǎn)又位于啟動子區(qū)域，文獻(xiàn)報(bào)道該位點(diǎn)的變異可引起與核蛋白結(jié)合能力的差異，因而我們提出G-395A位點(diǎn)是個(gè)潛在調(diào)控性SNP位點(diǎn)的假說。通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)G-395A位點(diǎn)對轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的影響，并對所影響的轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行鑒定，則可以明確該位點(diǎn)在Klotho基因表達(dá)調(diào)控中的作用，為人群中Klotho相關(guān)老年疾病的防治提供線索。而

19、該位點(diǎn)有望成為新的藥物作用靶點(diǎn)，為從基因水平上預(yù)防和治療老年病提供新的理論支持。如下圖所示：G-395A與多種老年疾病有遺傳關(guān)聯(lián)G-395A位于啟動子區(qū)G/A替換影響DNA/核蛋白結(jié)合為klotho表達(dá)調(diào)控研究提供新線索為老年疾病防治提供新的思路為老年病治療提供新的藥物靶點(diǎn)假說：G-395A是潛在調(diào)控性SNP位點(diǎn)驗(yàn)證假說2. 技術(shù)路線：本項(xiàng)目分G-395A功能定位、功能預(yù)測和功能證實(shí)三部分進(jìn)行實(shí)施，實(shí)驗(yàn)路線如下頁圖所示。 3.創(chuàng)新點(diǎn)與特色： 既往Klotho基因SNP與臨床疾病關(guān)聯(lián)研究取得了很大進(jìn)展，為老年病早期預(yù)防提供了多個(gè)SNP定位標(biāo)記，但對可能有調(diào)控意義的SNP重視不夠，調(diào)控性SNP的功

20、能研究有待進(jìn)一步深入。本項(xiàng)目首次對抗衰老基因Klotho的調(diào)控性SNP進(jìn)行系統(tǒng)的功能分析，鑒定G-395A多態(tài)性位點(diǎn)影響的轉(zhuǎn)錄因子，并在細(xì)胞水平進(jìn)行驗(yàn)證，有助于明確該位點(diǎn)變異對Klotho基因表達(dá)調(diào)控的意義，為老年病防治及藥物靶點(diǎn)篩選提供理論支持。4.可行性分析：本項(xiàng)目立論依據(jù)充分，實(shí)驗(yàn)路線明確，所用儀器在西南醫(yī)院綜合實(shí)驗(yàn)中心均能滿足，所需試劑均有商品化提供，所用到的實(shí)驗(yàn)技術(shù)本項(xiàng)目組成員均已掌握。前期已有一定前期工作基礎(chǔ)，能保證按時(shí)完成。本項(xiàng)目的技術(shù)路線圖：構(gòu)建系列啟動子缺失突變報(bào)告基因載體與內(nèi)參載體共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞（并在hela細(xì)胞中重復(fù)實(shí)驗(yàn)）測定雙報(bào)告基因活性，確定核心啟動子，為G-

21、395A進(jìn)行功能定位提取HEK293細(xì)胞核蛋白進(jìn)行EMSA反應(yīng)加入MZF1、ppar、E2F抗體進(jìn)行超遷移實(shí)驗(yàn)，明確可能影響的轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)建一對G/A替換的報(bào)告基因載體分別與內(nèi)參載體共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞直接比較報(bào)告基因活性分別與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染后比較經(jīng)位點(diǎn)特異性RNA干擾后比較功能定位功能預(yù)測功能證實(shí)(六)、現(xiàn)有工作基礎(chǔ)和條件1）、相關(guān)研究工作積累。2）、項(xiàng)目實(shí)施所具備的工作條件，包括實(shí)驗(yàn)平臺和大型儀器設(shè)備等。1.相關(guān)工作積累項(xiàng)目組已經(jīng)通過臨床病例對照研究在重慶漢族人群中發(fā)現(xiàn)G-395A多態(tài)性與動脈僵硬度有相關(guān)性。為研究其功能，已經(jīng)構(gòu)建pGL3-Basic-967kl、pGL3-Basic-4

22、98kl、pGL3-Basic-312kl及pGL3-Basic-137kl4個(gè)啟動子序列缺失突變的報(bào)告基因載體并測序驗(yàn)證（有測序圖備索），轉(zhuǎn)染HEK293和Hela細(xì)胞的預(yù)實(shí)驗(yàn)中提示G-395A位點(diǎn)所在序列有啟動子活性。下圖分別為4個(gè)載體的雙酶切電泳圖及報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)圖表。圖1：由上至下分別是1kb DNA ladder、pGL3-Basic-967kl、pGL3-Basic-498kl、pGL3-Basic-312kl、pGL3-Basic-137kl和100bp DNA ladder圖2：分別為陰性對照、陽性對照及4個(gè)載體轉(zhuǎn)染兩種細(xì)胞的報(bào)告基因相對活性。 項(xiàng)目組已經(jīng)用EMSA法成功檢測過N

23、F-b、AP-1、PPAR-等轉(zhuǎn)錄因子，如下圖所示。顯示項(xiàng)目組可以完成EMSA實(shí)驗(yàn)。 項(xiàng)目組構(gòu)建過小鼠FGFR3可控性RNAi載體并轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行驗(yàn)證，可完成本項(xiàng)目中RNA干擾載體構(gòu)建及細(xì)胞轉(zhuǎn)染工作。2.項(xiàng)目組所具備的工作條件：項(xiàng)目組可依托對全醫(yī)院開放的西南醫(yī)院綜合實(shí)驗(yàn)中心進(jìn)行全部課題研究，該實(shí)驗(yàn)中心的儀器能滿足本項(xiàng)目需要。（七）、研究隊(duì)伍項(xiàng)目負(fù)責(zé)人和主要學(xué)術(shù)骨干研究工作簡歷、主要學(xué)術(shù)業(yè)績、近五年發(fā)表的代表性論文或?qū)Ｖ夸洠ú怀^3篇）、獲得國家及省部級科技獎(jiǎng)勵(lì)情況（1500字以內(nèi)）1.項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：徐強(qiáng)：男，38歲，講師，主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，重慶市醫(yī)學(xué)會老年醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會委員。1995年畢業(yè)于華

24、西醫(yī)科大學(xué)。2002年第三軍醫(yī)大學(xué)獲心血管專業(yè)碩士學(xué)位。目前在職攻讀老年醫(yī)學(xué)專業(yè)博士學(xué)位。作為負(fù)責(zé)人已完成第三軍醫(yī)大學(xué)中青年基金糖基化終產(chǎn)物促發(fā)動脈粥樣硬化斑塊泡沫細(xì)胞形成機(jī)制研究（XG200524）,已結(jié)題。2005年參與的急性心肌血運(yùn)障礙機(jī)制及多因素干預(yù)研究獲重慶市科技進(jìn)步獎(jiǎng)三等獎(jiǎng)（第四作者）。近年以第一作者發(fā)表論著8篇，參編專著兩部。代表性論著如下：1 徐強(qiáng)，司良毅，趙曉蘭，王璋。大鼠心肌缺血再灌注時(shí)心肌細(xì)胞凋亡Caspase3活性變化規(guī)律及藥物對其影響。第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，25（15）：13551357 2 徐強(qiáng)，司良毅，趙曉蘭，張紅，唐維平.Caspase3活性對老年大鼠心肌

25、缺血再灌注損傷影響。實(shí)用老年醫(yī)學(xué)， 2004，18（2）：71743 YANG Qi-hong, XU Qiang, ZHANG Hong and SI Liang-yi. Effects of Rosiglizatone on Expression of Acyl-coenzyme A:Cholesterol Acyltransferase-1 Induced by Advanced Glycation End-products in THP-1 macrophages. Journal of Medical Colleges of PLA,2008,23:127-136.2.主要學(xué)術(shù)骨干：

26、司良毅：男，52歲，教授，主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士，博士生導(dǎo)師。重慶市老年醫(yī)學(xué)專委會主任委員，全軍老年醫(yī)學(xué)專委會副主任委員。1983年畢業(yè)于中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)，繼續(xù)攻讀心血管專業(yè)，并獲碩士及博士學(xué)位。1998年任西南醫(yī)院老年病科主任。是本項(xiàng)目負(fù)責(zé)人的的博士導(dǎo)師，負(fù)責(zé)項(xiàng)目進(jìn)展質(zhì)控。楊啟紅：女，34歲，主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士。1998年畢業(yè)于同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)，2004年7月于第三軍醫(yī)大學(xué)獲醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位。2008年7月于第三軍醫(yī)大學(xué)獲醫(yī)學(xué)博士學(xué)位。熟悉細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)和蛋白技術(shù)，擅長EMSA實(shí)驗(yàn)，本項(xiàng)目中負(fù)責(zé)EMSA實(shí)驗(yàn)。發(fā)表論文中以下文章涉及到本項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)技術(shù)：1 楊啟紅，陳林，朱京慈.小鼠脛骨骨

27、折愈合中FGFR3基因表達(dá)的原位定位.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，24（5）：215-218.2 楊啟紅，徐強(qiáng)，司良毅.糖基化終產(chǎn)物對人單核/巨噬細(xì)胞過氧化物酶體增殖物激活受體表達(dá)的影響.中華老年心腦血管病雜志，2008,10:214-217.3 楊啟紅，徐強(qiáng)，張紅，司良毅。糖基化終產(chǎn)物對THP-1巨噬細(xì)胞酰基輔酶A:膽固醇?；D(zhuǎn)移酶-1表達(dá)的影響.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008,30:1630-1633.袁僑英：女，31歲，主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士。2007年7月在重慶醫(yī)科大學(xué)獲心血管內(nèi)科博士學(xué)位，在讀博士研究生期間，先后參與導(dǎo)師黃晶教授承擔(dān)的國家自然基金重點(diǎn)項(xiàng)目、國家科學(xué)自然基金主任基金、重慶市科委

28、攻關(guān)課題、重慶市衛(wèi)生局課題等項(xiàng)目?，F(xiàn)在第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院老年特診科從事臨床及科研工作。博士論文題目：心腔內(nèi)超聲輻照增加基因表達(dá)治療犬心肌梗死。熟悉臨床研究及數(shù)據(jù)分析工作，在本項(xiàng)目中負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)分析。代表性論文如下：1 YUAN Qiao-ying, HUANG Jing, ZHU Zhengwei, ZHENG Yongping, DENG Chang-ming, LIU Di-chuan, WANG Zhigang, Guo rui. Catheter-based Intramyocardial Injection of Naked DNA Encoding EGFP and Intracardiac Irradiation to Enhance Gene Expression by an Ultrasound Catheter in Dogs ABSTRACT. International Jou