rasp21癌基因在涎腺腫瘤中表達(dá)的定量研究

1、    ras p21癌基因在涎腺腫瘤中表達(dá)的定量研究        提要目的為了探明ras p21癌基因在涎腺良惡性腫瘤生物學(xué)行為中的作用，方法采用LSAB免疫組化染色技術(shù)及CMIASWIN免疫組化像分析系統(tǒng)，鏡下定量判斷正常涎腺，良惡性腫瘤ras p21癌基因表達(dá)的陽性單位（PU值），通過t檢驗(yàn)和方差分析，結(jié)果正常涎腺組，良性腫瘤組、惡性腫瘤組均有ras p21表達(dá)，良惡性腫瘤組PU值明顯高于正常組（P<0.01)。胞漿中PU值明顯強(qiáng)于胞核、陽性細(xì)胞最多見

2、于腺管樣區(qū)，惡性腫瘤及瘤旁腺泡分別為強(qiáng)陽性和弱陽性表達(dá)，復(fù)發(fā)性腮腺深葉包膜不完整的腫瘤其PU值明顯高于原發(fā)性腮腺淺葉包膜完整的腫瘤。結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明ras p21癌基因的激活在涎腺良惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要的作用。關(guān)鍵詞涎腺腫瘤ras p21癌基因 A quantitative study on ras oncogene p21 expression in salivary gland tumorsZhu Shengrong, wang xiuli, shao Lenan et alDepartment of Stomatology Tongji Hospital Tongji Me

3、dical University Wuhan 430030.AbstractTo determine the role of ras oncogene p21 in biological behaviour of salivary gland neoplasms, the expression of ras p21 in normal salivary acini, benign tumors and carcinomas were microscopically observed by immunohistochemistry. Dealed with quantitative analys

4、is under analysis system of CMIASWIN map, by analysis of variance and student-t test. The results indicated that the expression of ras p21 were discoreved in all three groups which the possitive unit(PU)is higher in benign and malignant groups than that in normal group (P<0.01). Meanwhile the PU

5、of p21 is stronger in cytoplasm than in nucleus, that most of PU cells are seen is salivary duct (intercalated or striated duct) region and appeared possitive cells in the place of infiltration of cancer simultaneously, as well as the PU of ras p21 is stronger in deep lobe of recurrent parotid neopl

6、asm which the coating is incomplete than in shallow lobe of primary parotid neoplasm which the coating is complete. So we consider that activation of ras oncogene p21 may play an inportant roles in the tumorigenesis and the development of the salivary neoplasms.Key wordsSalivary gland neoplasm.Oncog

7、ene ras p21.有關(guān)ras基因的研究表明，它是人體的一個(gè)重要原癌基因，已見有關(guān)ras p21癌基因在人體各部位腫瘤中表達(dá)的報(bào)道1，2。本研究應(yīng)用免疫組化技術(shù)對涎腺瘤中ras p21表達(dá)進(jìn)行定量分析，探討ras p21癌基因在涎腺良惡性腫瘤中的表達(dá)及其臨床意義。材料與方法病例選擇：從19901997年本院存檔的石蠟標(biāo)本中，分別選出腮腺多形性腺瘤（包括復(fù)發(fā)病例），基底細(xì)胞腺瘤、惡性多形性腺瘤、腺樣囊性癌、粘液表皮樣癌、腺泡細(xì)胞癌、腺癌等68例，其中良性腫瘤38例，惡性腫瘤30例，良惡性腫瘤中各選2塊局部淋巴結(jié)標(biāo)本。另選正常涎腺組織標(biāo)本8例。男性36例，女性32例，年齡為1273歲，平均38

8、歲。腫瘤直徑最大者8cm，最小者1cm。腫瘤位于腮腺深葉者29例，位于淺葉者39例。包膜完整者39例，不完整者29例，原發(fā)者58例，復(fù)發(fā)者10例。染色方法：鼠抗人p21蛋白多克降抗體購自美國Santa cruz公司。4組織切片PBS沖洗5分鐘室溫下加1H2O2阻斷內(nèi)源酶10分鐘PBS沖洗微波處理、自然冷卻至室溫PBS沖洗加一抗4過液PBS沖洗加二抗3730分鐘PAP 37 30分鐘PBS沖洗SAB顯色蘇木素復(fù)染梯度脫水透明封片鏡檢。結(jié)果判定：評分標(biāo)準(zhǔn)，采用定量評估法凡胞漿，胞核內(nèi)棕色表達(dá)顆粒均為陽性目標(biāo)，其陽性目標(biāo)PU值0分者為陰性，5分以下者為弱陽，5分以上者為陽性，10分以上者為強(qiáng)陽。隨機(jī)

9、選4個(gè)高視野（400×），以平均數(shù)為分值。 統(tǒng)計(jì)處理：在CMIASWIN真彩色病理像分析系統(tǒng)上計(jì)錄目標(biāo)總個(gè)數(shù)，搜尋陽性目標(biāo)總個(gè)數(shù)，測量陽性目標(biāo)總面積，統(tǒng)計(jì)面密度和數(shù)密度，根據(jù)表達(dá)強(qiáng)度，測定陽性目標(biāo)單位（PU值），將所獲資料進(jìn)行方差分析，q檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取雙側(cè)a=0.05。結(jié)果正常腺體，良性腫瘤，惡性腫瘤p21蛋白表達(dá)免疫組化像統(tǒng)計(jì)分析示表1。表1P 21蛋白表達(dá)像統(tǒng)計(jì)分析（um）陽性細(xì)胞數(shù)陽性細(xì)胞面積面密度數(shù)密度正常腺體1144±526650±3580.137±0.070.241±0.11良性腫瘤1046±332676

10、7;2960.143±0.060.221±0.07惡性腫瘤854±185528±2300.111±0.040.180±0.03F=1.26F=0.65F=0.62F=1.25P>0.05P>0.05P>0.05P>0.05表1所示，免疫組化像分析提示、陽性細(xì)胞數(shù)、陽性細(xì)胞面積以及面密度，數(shù)密度在正常腺體，良惡性腫瘤之間微有差別，經(jīng)方差分析，均無顯著性（P>0.05）表明觀察方法和手段在三組中是一致的。正常腺體，良性腫瘤，惡性腫瘤p21蛋白表達(dá)免疫組比PU值示表2。 表2p21蛋白表達(dá)像PU值比較組數(shù)q值P

11、1.正常腺體4.531±2.9631與229.17<0.012.良性腫瘤12.00±2.2461與344.99<0.013.惡性腫瘤16.05±3.6632與315.82<0.01F=31.43P<0.01 表2所示，p21蛋白表達(dá)PU值在惡性腫瘤中最高，良性腫瘤次之，正常腺體最低，經(jīng)方差分析及q檢驗(yàn)，三組之間具有高度顯著性差異（P<0.01)，按PU值等級分析，惡性腫瘤陽性以上占90，弱陽性以下占10，良性腫瘤陽性以上占75，弱陽性以下占25，正常腺體陽性以上占20，弱陽性以下占80。鏡下所見，p21蛋白主要在胞漿內(nèi)表達(dá)，亦可見胞核

12、表達(dá)。其表達(dá)部位主要在腺管樣區(qū)腺泡，其次為肌上使團(tuán)塊區(qū)，鱗狀化生區(qū)及粘液軟骨樣區(qū)的陽性表達(dá)。部分惡性腫瘤浸潤至瘤旁腺泡p21蛋白分別為強(qiáng)陽性和弱陽性表達(dá)。良惡性腫瘤區(qū)域內(nèi)淋巴結(jié)呈陰性表達(dá)。涎腺腫瘤發(fā)生，部位，包膜不同情況p21表達(dá)（表3）。表3涎腺腫瘤發(fā)生部位包膜情況p21表達(dá)比較（PU值）tP原發(fā)10.73±3.402.611<0.05復(fù)發(fā)15.59±3.76淺葉10.96±3.732.021<0.05深葉15.77±4.69完整10.89±3.643.227<0.01不完整16.18±3.55表3所示，復(fù)發(fā)性腮腺

13、深葉包膜不完整者p21蛋白PU值高于原發(fā)性腮腺淺葉包膜完整者（P<0.05）（14）。 1腮腺多形性腺瘤腺泡，腺管，鱗狀化生及粘液軟骨樣區(qū)均可見p21陽性表達(dá)LSAB法×1002腮腺多形性腺瘤惡變大部分腺泡區(qū)p21呈陽性表達(dá)LSAB法×4003腮腺腺樣囊性癌可見p21強(qiáng)陽性表達(dá)以腺管樣區(qū)腺泡陽性表達(dá)最為明顯LSAB法×1004腮腺腺樣囊性癌可見P21強(qiáng)陽性表達(dá)LSAB法×400討論有關(guān)ras p21蛋白在涎腺腫瘤中表達(dá)的報(bào)道不多，本研究結(jié)果顯示涎腺組織、良性腫瘤、惡性腫瘤中均有p21蛋白表達(dá)，像統(tǒng)計(jì)及方差分析表明三組之間PU值有顯著性差異（P<

14、;0.01)，良惡性腫瘤組p21蛋白陽性表達(dá)明顯高于正常組。涎腺良惡性腫瘤細(xì)胞胞漿p21蛋白表達(dá)明顯強(qiáng)于（或多于）細(xì)胞核的表達(dá)，亦可見部分區(qū)域呈強(qiáng)陽性表達(dá)，部分區(qū)域呈弱陽性甚至陰性表達(dá)。涎腺腫瘤p21蛋白陽性表達(dá)特征主要在腺管樣區(qū)，亦可見其他區(qū)域。部分惡性腫瘤及瘤旁腺泡p21蛋白分別為強(qiáng)陽性和弱陽性表達(dá)的征象。良惡性腫瘤區(qū)域內(nèi)淋巴結(jié)呈陰性表達(dá)。無論良惡性腫瘤，其復(fù)發(fā)性腮腺深葉包膜不完整的腫瘤，PU值高于原發(fā)性腮腺淺葉包膜完整的腫瘤（P<0.05）。關(guān)于涎腺多形性瘤ras p21的表達(dá)率在24100之間3，4。王潔等5的表達(dá)率為78，本文良性腫瘤陽性以上表達(dá)率為75，與之接近。提示ras基

15、因的激活在很大程度上參與了多形性腺瘤的發(fā)生和發(fā)展，我們推測ras p21癌基因在腫瘤細(xì)胞生長增殖過程中起著重要的調(diào)控作用。（致謝本研究承蒙同濟(jì)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心趙西平及病理學(xué)教研室周晟協(xié)助。）作者單位：430030武漢，同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院（朱聲榮，邵樂南，陳衛(wèi)民，吳慧華），湖北醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院（王秀麗，陳新民）參考文獻(xiàn)1Viola MV. Fromowitz F,Oravez S et al. Expression of ras oncogene p21 in prostate cancer. New England J Medicine. 1986;314:133.2Hand PH, Vilasi V, Thor A et al. Quantitation of Havey ras p21 enhanced expression in human breast and colon carcinomas. J Natl cancer Inst, 1987;79:59.3Deguchi H, Hamano H, Hayashi Y c-myc, ras p21 and p53 expression in pleomorphic adenoma and its malignant form of the human salivary gla