缺血后處理對(duì)高血脂大鼠缺血再灌注心肌Bcl2及Bax蛋白表達(dá)的影響

1、缺血后處理對(duì)高血脂大鼠缺血再灌注心肌Bcl2及Bax蛋白表達(dá)的影響         10-09-08 11:51:00     編輯：studa20                      作者：霍玉娥 尹博英 劉勝輝【摘要】  目的 觀察缺血后處

2、理對(duì)高血脂大鼠缺血再灌注心肌Bcl2及Bax蛋白表達(dá)的影響。方法 選擇高血脂SD大鼠36只，隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組、缺血再灌注組、缺血后處理組，每組12只。制備大鼠心肌缺血再灌注模型。缺血再灌注組:收緊結(jié)扎線(xiàn)缺血40 min，放松結(jié)扎線(xiàn)再灌注240 min;缺血后處理組:缺血40 min后，再灌注10 s,缺血10 s,連續(xù)3個(gè)循環(huán)，然后再灌注240 min;假手術(shù)組:開(kāi)胸后穿線(xiàn)做套環(huán)，但不收緊結(jié)扎線(xiàn)。再灌注結(jié)束后自右頸動(dòng)脈采血測(cè)定血清肌酸激酶(CK)活性,用TUNEL法檢測(cè)再灌注心肌凋亡程度，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Bcl2及Bax蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 血清中CK活性的測(cè)定：再灌注結(jié)束后缺血

3、后處理組和缺血再灌注組CK活性明顯高于假手術(shù)組分別為(789.68±67.34)，(932.86±84.17)，(252.48±19.78)U/L，P<0.05，缺血后處理組明顯低于缺血再灌注組(P<0.05)。心肌凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)：再灌注結(jié)束后假手術(shù)組未見(jiàn)明顯細(xì)胞凋亡(<5%)，缺血后處理組心肌細(xì)胞凋亡率明顯低于缺血再灌注組分別為(11.9±2.7)%，(21.2±3.5)%，P<0.05。與缺血再灌注組相比，缺血后處理組Bcl2蛋白表達(dá)增加(P<0.05)，Bax蛋白表達(dá)減低(P<0.05)。結(jié)論 缺血后處理

4、可以增加高血脂大鼠缺血再灌注心肌Bcl2蛋白表達(dá)、降低Bax蛋白表達(dá)，進(jìn)而抑制凋亡。 【關(guān)鍵詞】  再灌注損傷;缺血后處理;凋亡【Abstract】 Objective To study the effect of ischemic postconditioning on expression of Bcl2 and Bax protein in hyperlipemia rats with myocardial ischemia reperfusion.Methods 36 hyperlipemia SD rats were selected and randomly divide

5、d into 3 groups：sham operation，ischemic reperfusion and ischemic postconditioning groups(n=12)，and rats were made into MIR models.Rats in the ischemic reperfusion group were ligated for 40 minutes ischemia，and then reperfused for 240 min.Rats in ischemic postconditioning group were treated for 40 mi

6、nutes ischemia，reperfused for 10 s and 10 s ischemia for 3 cycles，and then reperfused reperfussed for 240 min.Rats in sham operation group were opened the chest to braid for ringer without deligation.The presence of apoptotic myocytes was detected by(TUNEL). Immunohistochemistry was used to detect t

7、he Bcl2 and Bax protein.Meanwhile，the serum creatine kinase(CK) activity was measured.Results Determination of serum CK activity：it was obviously higher in the ischemic postconditioning group and ischemic reperfusion group after reperfusion than that of the sham operation group(789.68±67.34)，(9

8、32.86±84.17)，(252.48±19.78)U/L respectively, P<0.05， and it was significantly lower in the ischemic postconditioning group than that in the ischemic reperfusion group(P<0.05). Number of apoptotic myocardial cells：there was no significant apoptosis found after the reperfusion in the s

9、hamoperation group(<5%)，and the apoptotic rate in the ischemic postconditioning group was remarkably lower than that in the ischemic reperfusion group (11.9±2.7)%，(21.2±3.5)% respectively， P<0.05. The expression of Bcl2 protein was higher in the ischemic postconditioning group than t

10、hat in the ischemic reperfusion group (P<0.05).The expression of Bax protein was lower in the ischemic postconditioning group than that in the ischemic reperfusion group (P<0.05).Conclusions Ischemic postconditioning may increase the expression of Bcl2 protein and decrease the expression of Ba

11、x protein which may be related with the decreased myocardial apoptosis.【Key words】 Reperfusion injury;Postcondioning;Apoptosis 研究表明缺血后處理可以縮小心肌梗死面積，減少再灌注心律失常，具有心肌保護(hù)作用13。急性心肌梗死患者常合并高血脂，缺血后處理對(duì)高血脂大鼠的作用尚未見(jiàn)研究報(bào)道,本文旨在探討在體情況下缺血后處理對(duì)高血脂大鼠缺血/再灌注心肌Bcl2及Bax蛋白表達(dá)的影響。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇健康清潔級(jí)SD大鼠36只，雄性，喂養(yǎng)高血脂造模飼料(2%膽固醇

12、、10%豬油、0.2%丙基硫氧嘧啶、87.8%基礎(chǔ)飼料) 4 w,體重(250±30)g，甘油三酯(TG)為(2.84±0.68)mmol/L，總膽固醇(TC)為(3.71±0.23)mmol/L;較正常大鼠(n=16)的TG(1.23±0.32)mmol/L和TC(1.96±0.39)mmol/L明顯升高(P<0.05)。1.2 動(dòng)物模型制備及分組1.2.1 動(dòng)物模型制備 實(shí)驗(yàn)大鼠以30 g/L戊巴比妥鈉(45 mg/kg)腹腔注射麻醉，仰臥固定于鼠臺(tái)，行氣管切開(kāi),用呼吸機(jī)進(jìn)行機(jī)械通氣,通氣頻率60次/min，潮氣量2030 ml/kg

13、，取左胸第3肋間進(jìn)胸，暴露心臟,于左心耳根部下方1 mm處進(jìn)針，50 絲線(xiàn)(結(jié)扎線(xiàn)) 穿過(guò)心肌表層在肺動(dòng)脈圓錐處稍下方穿線(xiàn)，線(xiàn)兩端各穿一小縫合墊片后再并線(xiàn)一起經(jīng)內(nèi)徑約2 mm的聚乙烯管中穿出，用血管鉗推壓小管壓迫左冠狀動(dòng)脈前降支造成缺血，放松即可恢復(fù)血流形成再灌注，收緊結(jié)扎線(xiàn)心電圖出現(xiàn)ST段抬高，放松結(jié)扎線(xiàn)ST段下降1/2以上為模型成功。1.2.2 動(dòng)物分組 隨機(jī)分為3組，每組12只：假手術(shù)組：開(kāi)胸后穿線(xiàn)做套環(huán)，但不收緊結(jié)扎線(xiàn);缺血再灌注組：收緊結(jié)扎線(xiàn)缺血40 min，放松結(jié)扎線(xiàn)再灌注240 min;缺血后處理組：缺血40 min后，再灌注10 s,缺血10 s,連續(xù)3個(gè)循環(huán)，然后再灌注240

14、 min。1.3 檢測(cè)指標(biāo)1.3.1 肌酸激酶(CK)的檢測(cè) 再灌注結(jié)束后自右頸動(dòng)脈分別采血2 ml,3 000 r/ min離心10 min，-70冰箱保存待測(cè)。采用7180型全自動(dòng)生化分析儀(日本日立公司)檢測(cè)CK的含量，參照試劑盒(北京中山生物技術(shù)有限公司)說(shuō)明書(shū)操作。1.3.2 凋亡細(xì)胞原位標(biāo)記與凋亡指數(shù)計(jì)算 再灌注結(jié)束后，將缺血區(qū)心肌組織剪下，40 g/L多聚甲醛固定24 h,常規(guī)石蠟包埋,用TUNEL技術(shù)標(biāo)記凋亡的細(xì)胞核，在免疫熒光顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞凋亡,紫外激發(fā)光下，所有細(xì)胞核發(fā)出藍(lán)色熒光，藍(lán)色激發(fā)光下，凋亡心肌細(xì)胞核發(fā)出綠色熒光，每個(gè)標(biāo)本選取5張切片，每張切片選取5個(gè)視野(×400)，計(jì)算細(xì)胞總數(shù)和凋亡細(xì)胞數(shù)，以平均陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所