類胰島素生長(zhǎng)因子1(IGF-1)定量酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒

1、類胰島素生長(zhǎng)因子1（IGF-1）定量酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒貨號(hào)：AC-27F1【產(chǎn)品名稱】通用名稱：類胰島素生長(zhǎng)因子1（IGF-1）定量酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒【包裝規(guī)格】 96人份/盒【預(yù)期用途】 試劑盒是雙位點(diǎn)免疫酶分析法用來(lái)定量檢測(cè)人類血清或血漿中類胰島素生長(zhǎng)因子，這個(gè)方法合并一個(gè)樣本預(yù)處理的步驟，以避免結(jié)合蛋白的干擾?！竞?jiǎn)介概述】 類胰島素生長(zhǎng)因子1 (IGF-1)是一個(gè)有70個(gè)氨基酸的生物多肽（7650道爾頓），并且是許多出現(xiàn)在循環(huán)中的相關(guān)類胰島素生長(zhǎng)因子中的一種。其分子顯示約有50%的序列與胰島素原的相似并且與胰島素的一些生物活性相似。該肽高度依賴于生長(zhǎng)激素（GH），但有越來(lái)越多的證據(jù)表明它

2、和生長(zhǎng)激素的分泌無(wú)關(guān)。IGF-1對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育的促進(jìn)有很大影響，包括促進(jìn)有絲分裂和促進(jìn)軟骨硫酸化。它也促進(jìn)生長(zhǎng)激素在骨骼和其他體液的作用并協(xié)調(diào)生長(zhǎng)。幾乎所有（超過(guò)95%）的循環(huán)血清中的IGF-1都與特定的IGF結(jié)合蛋白連接，現(xiàn)在已經(jīng)分辨出為6個(gè)種類（IGF-BPs 1-6）。BP3被認(rèn)為是與IGF-1結(jié)合的主要蛋白，與IGF-1和酸不穩(wěn)定性亞單位形成一個(gè)140000道爾頓的三聚體。血清IGF-1的測(cè)量用于有生長(zhǎng)病變的小孩和監(jiān)測(cè)和診斷肢端肥大癥。IGF-1的濃度隨著年齡、營(yíng)養(yǎng)狀況、身體成份和生長(zhǎng)激素分泌而改變。單個(gè)基礎(chǔ)的IGF-1項(xiàng)目的檢測(cè)常常用于評(píng)估小孩矮身高和急性病的病人營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)的研究。對(duì)于診斷

3、肢端肥大癥鑒別，單一的IGF-1診斷比一個(gè)任意的GH診斷更為可靠。【檢驗(yàn)原理】 病人的樣本用試劑短暫孵育以阻止結(jié)合蛋白質(zhì)，然后稀釋樣本以進(jìn)行檢測(cè)。在OCTEIA®IGF-1試劑盒中，一個(gè)純化的多克隆羊抗IGF-1抗體包被在聚苯乙烯微量孔的內(nèi)表面（固相或抗體捕獲）。已預(yù)處理的稀釋的樣本和標(biāo)上辣根過(guò)氧化酶的單克隆抗IGF-1抗體在已經(jīng)有抗體包被的微量孔中室溫下孵育2小時(shí)。微量孔清洗并且加入單一成份的顯色底物（四甲基聯(lián)苯胺）產(chǎn)生顏色。終止混合物的反應(yīng)，吸光度在微量板讀數(shù)儀上讀取，顏色的強(qiáng)度與樣本中IGF-1的數(shù)量成正比關(guān)系?！局饕M成成份】1CAL 0-5 標(biāo)準(zhǔn)品 ( REF AC-270

4、1A - AC-2701F):人類血清干粉包含IGF-1和0.09%的疊氮化鈉。在瓶子的標(biāo)簽上已有打印好的每瓶的準(zhǔn)確值，每瓶0.5 mL，每盒6瓶。2MICROPLAT 抗體包被板 ( REF AC-2702W) :微量板被羊抗IGF-1單克隆抗體連接到聚苯乙烯微量孔的內(nèi)部表面，8X12板條孔附干燥劑。3ENZYMCONJ 酶結(jié)合物 ( REF AC-2703):磷酸鹽緩沖液包含鼠抗IGF-1單克隆抗體，蛋白，酶穩(wěn)定劑和防腐劑。每瓶22 mL。4CTRL 1-2 質(zhì)控品 ( REF AC-2705A - AC-2705B):人類血清凍干粉包含IGF-1和0.09%的疊氮化鈉。每瓶0.5 mL，

5、每盒2瓶。5H2SO4 終止液 ( REF AC-2706):1M硫酸，每瓶12 mL。6RELEASREAG 釋放劑 ( REF AC-2707):從結(jié)合蛋白中分離IGF-1的專用試劑。每瓶21 mL。7SUBS TMB底物 ( REF AC-SUBS):專用的液體形式四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和過(guò)氧化氫，每瓶30 mL。8. SAMPDIL 樣本稀釋 ( REF AC-270B):磷酸鹽緩沖液包含防腐劑，每瓶50 mL。9WASHBUF 20x 濃縮沖洗緩沖液 ( REF AC-WASHL):磷酸鹽緩沖液包含吐溫（Tween），每瓶50 mL?！緝?chǔ)存條件及有效期】 如果試劑的保存是有效的，所有

6、試劑可保存到有效期，收到試劑后放在2-8中保存。復(fù)溶的標(biāo)準(zhǔn)品CAL、質(zhì)控品CTRL在-20°C可保存8星期。試劑效價(jià)可能降低的跡象1.在任何一個(gè)試劑中有異常微粒子出現(xiàn)。2.最高吸光度下降。3. 正常姿態(tài)的曲線傾斜度變化?！具m用儀器】 適用于具有450nm、650nm波長(zhǎng)的所有全自動(dòng)、半自動(dòng)酶標(biāo)儀。【樣本要求】 分析可使用血清或血漿樣本。樣本收集之后應(yīng)該盡快地分離，長(zhǎng)期儲(chǔ)藏需-20°C，避免樣品反復(fù)的凍融。注意：不適當(dāng)?shù)谋４婧吞幚順颖緯?huì)導(dǎo)致樣本中IGF-1的損耗?！緳z驗(yàn)方法】 試劑準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品 CAL和質(zhì)控品 CTRL：標(biāo)準(zhǔn)液CAL和質(zhì)控CTRL以凍干品形式提供。每瓶加0.5

7、mL蒸餾或去離子水復(fù)溶。將蓋子重新蓋上在室溫下靜置10-15分鐘，反復(fù)顛倒幾次確保復(fù)溶完全。如果標(biāo)準(zhǔn)品CAL或質(zhì)控品CTRL使用超過(guò)一次，復(fù)溶后的須馬上（30分鐘內(nèi)）冰凍保存(-20°C)。當(dāng)再使用冰凍標(biāo)準(zhǔn)品CAL或質(zhì)控品CTRL時(shí)，再回復(fù)至室溫，混合后15分鐘內(nèi)使用。沖洗液：每瓶濃縮沖洗液WASHBUF 20x 加950 mL蒸餾或去離子水并且混勻，室溫儲(chǔ)存。所有其他試劑直接使用。所有試劑使用之前應(yīng)該回復(fù)至室溫。試劑使用之前重復(fù)倒置混合混勻。需要的但沒(méi)有提供的材料1 可任意使用的12X75mm的塑料管。2 能精確分配25 L和50 L的移液器。3 可重復(fù)分配100 L和1mL和移液

8、器，如Eppendorf Multipipette 4780或類似的。4 精確的多道加樣器能分配100 L和200 L。5 旋渦混合器6 全自動(dòng)洗板機(jī) (可選配)。7 微量板讀數(shù)儀和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。操作程序按“試劑準(zhǔn)備”里所描述的那樣復(fù)溶或準(zhǔn)備試劑。將所需的微量板條裝到板條架上。推薦雙份檢測(cè)。將剩下的板條放回原裝口袋中并重新封好。不要取更多的板條，這樣就能在30分鐘內(nèi)處理好。注意！確保在包裝內(nèi)的板條在密封保存期間干燥。1 準(zhǔn)確有標(biāo)簽的塑料試管，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品CAL，質(zhì)控品CTRL和樣本各一管。2 每個(gè)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品CAL，質(zhì)控CTRL和樣本各加25 L到相應(yīng)的試管中。3 加100 L的釋放劑RELEAS

9、REAG到每個(gè)試管中。在18-25°C下孵育10分鐘。4 加1 mL的樣本稀釋液SAMPDIL到每個(gè)試管中。旋渦混合所有試管。樣本現(xiàn)在可以用于分析。5 加入50 L已準(zhǔn)確好的每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)CAL，質(zhì)控CTRL和樣本到相應(yīng)的抗體包被的微量孔中MICROPLAT中，雙份檢測(cè)。注意：這些加入必需在10分鐘內(nèi)完成，以減少隨機(jī)誤差。6 使用多道加樣槍加入200 L的酶結(jié)合物ENZYMCONJ到所有微量孔中。在18-25°C下孵育2小時(shí)到2小時(shí)15分之間。7 用沖洗液清洗所有微量孔三次：a)全自動(dòng)洗板機(jī)：設(shè)定洗板機(jī)每個(gè)孔至少300 L的沖洗量，加滿和吸干進(jìn)行3個(gè)循環(huán)。b)手工沖洗：輕輕的顛倒

10、板架使孔內(nèi)的液體倒出，加入250 L的沖洗緩沖液到所有的孔中，倒出并重復(fù)二次。 在進(jìn)行下一步操作時(shí)，將微量板翻轉(zhuǎn)在濾紙上輕打，以確保吸干微量孔內(nèi)多余的沖洗液。8 用多道加樣器在所有微量孔加入200 L的TMB 底物SUBS，在18-25°C下孵育30分鐘。注意：TMB 底物容易受到污染。僅能從瓶子中移出分析所需的用量，不使用的TMB 底物丟掉，不能再倒回瓶子中。9 用多道加樣器在所有微量孔加入100 L的終止液H2SO4。10. 在加入終止液的30分鐘內(nèi)使用微孔板讀數(shù)儀在405 nm（參考波長(zhǎng)為650 nm）下測(cè)量所有孔的吸光度。校準(zhǔn)該試劑盒已參照類胰島素生長(zhǎng)因子-1和胰島素生長(zhǎng)因子

11、-1的國(guó)際參考試劑進(jìn)行校準(zhǔn)。質(zhì)量控制質(zhì)控規(guī)則使用的質(zhì)控樣本要求幾種水平的分析物，以確保每天的結(jié)果在可接受的范圍內(nèi)。提供兩盒試劑的質(zhì)控品。質(zhì)控品應(yīng)作為未知物進(jìn)行檢測(cè)。質(zhì)量控制圖應(yīng)按照測(cè)試的結(jié)果進(jìn)行繪畫(huà)?！緟⒖贾担▍⒖挤秶?以下的范圍是由OCTEIA®IGF-1的試劑進(jìn)行測(cè)定并且僅提供參考。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須建立自己地區(qū)人群的范圍值。年齡 (歲數(shù))ng/L正常范圍<11012-1081-31413-100>3-61926-280>6-91685-230>9-122598-404>12-1517142-525>15-2014146-415>20-3

12、01889-276>30-401822-197>40-501849-147>50-602635-210>60-702530-196>701156-191肢端肥大癥患者10340-635注意：所列出的每個(gè)類型樣本的預(yù)期值是絕對(duì)的范圍每個(gè)類型的樣本范圍有最大值和最小值?！緳z驗(yàn)結(jié)果的解釋】 結(jié)果計(jì)算計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，質(zhì)控和未知樣本的吸光度的平均值。準(zhǔn)備log-log圖紙將每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度均值繪制在縱座標(biāo)與IGF-1濃度值在橫座標(biāo)的對(duì)數(shù)相關(guān)圖。從標(biāo)準(zhǔn)曲線圖中讀出質(zhì)控與未知樣本的g/L結(jié)果。對(duì)于評(píng)估較低濃度值我們建議繪制與低濃度標(biāo)準(zhǔn)值對(duì)應(yīng)濃度的線性圖（linear-linear

13、）。未知樣本的結(jié)果直接在曲線中讀取?？捎羞x擇的使用數(shù)據(jù)減少方法，但是操作人員必須確定所選擇的曲線是合適的并給出可接受的結(jié)果。推薦平整光滑的曲線。單位轉(zhuǎn)換：x 0.131 X g/L Y nmol/L x 7.63樣本數(shù)據(jù)分析：這些數(shù)據(jù)僅作為例子介紹，不能用于任何樣本結(jié)果的計(jì)算?？酌枥L吸光度平均吸光度結(jié)果U/LA1, A2標(biāo)準(zhǔn)00 g/L0.0310.0350.033B1, B2標(biāo)準(zhǔn)19.5 g/L0.0510.0530.052C1, C2標(biāo)準(zhǔn)240 g/L0.1160.1120.114D1, D2標(biāo)準(zhǔn)3100 g/L0.2500.2560.253E1, E2標(biāo)準(zhǔn)4440 g/L1.0001.0

14、021.001F1, F2標(biāo)準(zhǔn)51070 g/L2.0732.0912.082G1, G2樣本10.0680.0680.06818.4H1, H2樣本21.0901.1151.102488.7典型的標(biāo)準(zhǔn)曲線：該樣品刻度曲線僅作例圖【檢驗(yàn)方法的局限性】1 樣本包含的分析物濃度超過(guò)最高的標(biāo)準(zhǔn)液濃度時(shí)，樣本要稀釋重做。2 在任何疾病診斷程序的結(jié)果必須連同病人的臨床癥狀和醫(yī)生取得的信息一同進(jìn)行解釋。3 以下物質(zhì)已經(jīng)通過(guò)測(cè)試并且沒(méi)有發(fā)現(xiàn)對(duì)OCTEIA®IGF-1分析有干擾：血紅蛋白 檢測(cè)最高濃度為490 mg/dL膽紅素 檢測(cè)最高濃度為360 mol/L脂類 檢測(cè)最高濃度為45.1 mmol/

15、L（甘油三脂）4 IGF-1曲線變曲的鉤狀反應(yīng)在10000g/L下進(jìn)行，并且沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有任干擾效應(yīng)。【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 準(zhǔn)確性O(shè)CTEIA® IGF-1 試劑盒與已知定量檢測(cè)IGF-1的雙位點(diǎn)夾心免疫酶分析方法進(jìn)行比較。67個(gè)樣本，選擇寬的IGF-1范圍12-627 g/L，用兩種方法同時(shí)分析。對(duì)比的數(shù)據(jù)使用最小二乘法回歸。y = 0.45 x - 11.82； 相關(guān)系數(shù)(r) = 0.94。精密度批內(nèi)變異分析（n=6）批內(nèi)變異分析（n=21）平均值（g/L）%CV平均值（g/L）%CV66.73.590.77.0120.92.31867.1102.23.3靈敏度靈敏度是由20個(gè)零點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)

16、液乘以2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差的平均值來(lái)決定的，校正后的相應(yīng)濃度為1.9 g/L。線性線性的分析是由稀釋的樣本與“0”標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行分析。樣本測(cè)量(g/L)期望值(g/L)%M/EA106.1-A/ 252.953.0100A/428.026.5105A/813.913.3105B576.5-B/2265.5288.392B/4150.1144.2104B/875.472.1105平均102IGF-1結(jié)合蛋白的失活35個(gè)樣本的IGF-1濃度從10.5到512 g/L與酸-乙醇和IDS釋放劑提取的樣本分別進(jìn)行檢測(cè)分析。酸-乙醇的結(jié)果是IDS釋放劑結(jié)果的92.9%(CV為20.5%)。回收回收試驗(yàn)是在樣本中加入IG

17、F-1作為分析。樣本濃度(g/L)IGF-1加入(g/L)測(cè)量(g/L)回收 (g/L)回收(%)5.4376379.5374.110016.3376414.5398.2106124.4376468.8344.492平均99特異性通過(guò)在“0”和“100” g/L 標(biāo)準(zhǔn)品中加入最高濃度為40,000 g/L的IGF-2、25 IU/L的胰島素和1000 g/L的胰島素原，IGF-2、胰島素、胰島素原的潛在交叉反應(yīng)和干擾已被測(cè)試。發(fā)現(xiàn)并沒(méi)有出現(xiàn)干擾。【注意事項(xiàng)】 警告和預(yù)防OCTEIA® IGF-1試劑盒的分析方法僅用于研究使用，不能在人類或其它動(dòng)物體內(nèi)使用。該產(chǎn)品必須嚴(yán)格按照試劑盒內(nèi)附

18、的說(shuō)明書(shū)內(nèi)所述的操作一致。如果不遵從使用說(shuō)明的用法而產(chǎn)生廢物導(dǎo)致出現(xiàn)任何的損失或損害(除法令所需要)，IDS公司將不負(fù)任何負(fù)責(zé)。注意：該試劑盒含有人類/動(dòng)物來(lái)源的物質(zhì)。處理試劑時(shí)應(yīng)將試劑作為有傳染性的物質(zhì)處理。適當(dāng)?shù)念A(yù)防和好的實(shí)驗(yàn)室操作習(xí)慣必須在試劑盒的保存，使用和處理時(shí)使用。丟棄試劑時(shí)應(yīng)按當(dāng)?shù)氐囊?guī)定程序處理。人類血清：標(biāo)準(zhǔn)品CAL和質(zhì)控品CTRL在這個(gè)產(chǎn)品準(zhǔn)備中使用的人類物質(zhì)已經(jīng)過(guò)FDA推薦的方法檢測(cè)其中的人類免疫缺陷性病毒（HIV I & II）抗體、肝炎B表面抗原、肝炎C表面抗體（HBV& HCV），均顯示為陰性。沒(méi)有測(cè)試能完全保證傳染性的因子不存在，所有試劑應(yīng)該按照生物

19、研究安全性水平（Biosafety Level） 2 處理；疊氮化鈉試劑盒內(nèi)的一些試劑包含作為防腐劑的疊氮化鈉，它可與鋁、銅或者黃銅鋁制品形成高爆炸性的金屬疊氮化物。在處理時(shí)，用大量的水沖以防止生成金屬的疊氮化物。四甲基聯(lián)苯胺TMB底物TMB含 3,3,5,5-四甲基聯(lián)苯胺。R21/22 皮膚的接觸或吞咽都是有害。S36/37穿著適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)衣服和手套。0.1M 硫酸終止液H2SO4包含1M的硫酸。R36/38 刺激眼睛和皮膚；S26如果接觸到眼睛，馬上用大量的水沖洗并且尋求醫(yī)生建議； S36/37穿著保護(hù)適當(dāng)?shù)囊路褪痔??！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1. Daughaday WH, Mariz IK, Ble

20、then SL. Inhibition of access of bound somatomedin to membrane receptor and immunobinding sites: a comparison of radioreceptor and radioimmunoassay of somatomedin in native and acid-ethanol extracted serum. J Clin Endocrinol Metab 1980: 51: 781-788.2. Oppizi G, Petroncini M, Dallabonzana, et al. Rel

21、ationship between somatomedin C and growth hormone levels in acromegaly: Basal and dynamic evaluation. J Clin Endocrinol Metab 1986: 67: 1348-1353.3. Barkan AL, Beitins IZ, Kelch RP. Plasma immunoreactive insulin-like growth factor 1 in acromegaly: Correlation with the degree of growth hormone hypersection. J Clin Endocrinol Metab 1988: 67: 69-73.4. Baxter RC. Characterisation of the acid-labile subunit of the growth hormone dependent insulinlike growth factor binding protein complex. J Clin Endocrinol Metab