單個(gè)實(shí)驗(yàn)室化學(xué)檢測方法的確認(rèn)ppt課件

1、單個(gè)實(shí)驗(yàn)室化學(xué)檢測方法確實(shí)認(rèn)單個(gè)實(shí)驗(yàn)室化學(xué)檢測方法確實(shí)認(rèn)National Association of Testing Authorities(NATA)概要概要 根本情況 單個(gè)實(shí)驗(yàn)室方法確認(rèn)的接受 什么是確認(rèn)方法？ 什么是方法確認(rèn)？ 化學(xué)檢測方法確認(rèn)需求十個(gè)步驟例如例如: 確認(rèn)一個(gè)方法去檢測動(dòng)物組織中抗生素的殘留確認(rèn)一個(gè)方法去檢測動(dòng)物組織中抗生素的殘留根本情況根本情況 NATA Technical Note 17 (new version) IUPAC Harmonized Guidelines for Single Lab. Validation LGC (UK) In-house Met

2、hod Validation a Guide for Chemical Laboratories規(guī)范方法規(guī)范方法 Organisation for International Standardisation (ISO) American Society for Testing Materials (ASTM) Association of Official Agricultural Chemists (AOAC) Standards Australia British StandardsPublication of Standard Methods a specialist, core bus

3、iness of the organisations concerned規(guī)范方法規(guī)范方法 要經(jīng)過很多實(shí)驗(yàn)室的協(xié)作研討來確認(rèn)要經(jīng)過很多實(shí)驗(yàn)室的協(xié)作研討來確認(rèn).過程慢過程慢 在方法需求與方法建立之間有很長的時(shí)間滯后性在方法需求與方法建立之間有很長的時(shí)間滯后性方法驗(yàn)證方法驗(yàn)證Method Verification 沒有方法確認(rèn)這么嚴(yán)厲沒有方法確認(rèn)這么嚴(yán)厲 能否實(shí)驗(yàn)室運(yùn)轉(zhuǎn)都得要專門的規(guī)范方法能否實(shí)驗(yàn)室運(yùn)轉(zhuǎn)都得要專門的規(guī)范方法?單個(gè)實(shí)驗(yàn)室方法確認(rèn)的成認(rèn)單個(gè)實(shí)驗(yàn)室方法確認(rèn)的成認(rèn) EU (Decision 2019/657/EU) Codex Committees Methods of Analysis a

4、nd Sampling Residues of Veterinary Drugs in Foods Pesticide Residues National Regulators APVMA AQIS FSANZ NRS States & Territories 貿(mào)易同伴貿(mào)易同伴Trading Partners 什么是確認(rèn)方法什么是確認(rèn)方法? 該方法被證明適用于該目的該方法被證明適用于該目的 運(yùn)用該方法所測得結(jié)果可靠運(yùn)用該方法所測得結(jié)果可靠; 結(jié)果合理可用于作決議結(jié)果合理可用于作決議什么是方法確認(rèn)什么是方法確認(rèn)? 系統(tǒng)評價(jià)一個(gè)方法，提供客觀證據(jù)證明該方法可以滿系統(tǒng)評價(jià)一個(gè)方法，提供客觀證

5、據(jù)證明該方法可以滿足特定檢測目的的需求。足特定檢測目的的需求。 證明該方法是符合證明該方法是符合NATA要求的。要求的。 方法確認(rèn)方法確認(rèn)16107893542VALIDATED METHOD61078935421步驟步驟1: 方法的具本要求方法的具本要求為特定明確用途的特殊需求為特定明確用途的特殊需求.需求對所開展的方法的需求對所開展的方法的檢測對象有的具本要求。檢測對象有的具本要求。什么是方法的需求什么是方法的需求? 他要檢測什么他要檢測什么? 在什么樣品基質(zhì)中在什么樣品基質(zhì)中? 他需求檢測到什么濃度程度他需求檢測到什么濃度程度? 對結(jié)果他需求有多大可靠性對結(jié)果他需求有多大可靠性? 多少濃

6、度范圍多少濃度范圍? 能否客戶還有其它特殊需求能否客戶還有其它特殊需求?例如：具本要求例如：具本要求: 動(dòng)物組織中抗生素殘留檢測動(dòng)物組織中抗生素殘留檢測自在自在化合物化合物 或或 結(jié)合化合物結(jié)合化合物?僅母體僅母體, 或母體加代謝物或母體加代謝物?特殊動(dòng)物組織特殊動(dòng)物組織, 如如. 豬的腎臟豬的腎臟調(diào)整檢測限調(diào)整檢測限, 所需的定量限所需的定量限 LOQ?在定量限在定量限 LOQ或或 MRL值上的可接受確實(shí)證限值上的可接受確實(shí)證限?樣品里的預(yù)期濃度樣品里的預(yù)期濃度?所需的檢測周期所需的檢測周期?多個(gè)的還是單個(gè)樣品多個(gè)的還是單個(gè)樣品?步驟步驟 1: 方法的具本要求方法的具本要求對這些具本要求確實(shí)

7、認(rèn)將根本定義方法的范圍對這些具本要求確實(shí)認(rèn)將根本定義方法的范圍步驟步驟 1: 方法的詳細(xì)要求方法的詳細(xì)要求為了確認(rèn)方法的具本要求為了確認(rèn)方法的具本要求,還有哪些方法的任務(wù)特性還有哪些方法的任務(wù)特性需求開展呢需求開展呢?以下九個(gè)步驟以下九個(gè)步驟VALIDATED METHODDEVELOP SPECS6107893542步驟步驟 2: 方法選擇性方法選擇性在在(與樣品一同提取出的與樣品一同提取出的)干擾存在下檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性干擾存在下檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性目的目的: 沒有艱苦干擾沒有艱苦干擾 方法內(nèi)在的選擇性變化方法內(nèi)在的選擇性變化 經(jīng)過分析含有能夠干擾的樣品來檢查經(jīng)過分析含有能夠干擾的樣品來檢查例如

8、：方法選擇性例如：方法選擇性: 動(dòng)物組織中抗生素的殘留檢測動(dòng)物組織中抗生素的殘留檢測進(jìn)展系列在日常檢測中能夠碰到的樣品基質(zhì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)展系列在日常檢測中能夠碰到的樣品基質(zhì)實(shí)驗(yàn)用交叉反響法檢查用交叉反響法檢查(如免疫測定法如免疫測定法)VALIDATED METHODDEVELOP SPECS61078954 SELECTIVITY3步驟步驟 3: 線性范圍線性范圍對方法而言是用一個(gè)計(jì)算模型去定義儀器呼應(yīng)與濃度對方法而言是用一個(gè)計(jì)算模型去定義儀器呼應(yīng)與濃度之間的關(guān)系之間的關(guān)系通常線性模型由圖表表示通常線性模型由圖表表示測定線性范圍要求測定線性范圍要求: 6點(diǎn)校準(zhǔn)標(biāo)樣，每點(diǎn)反復(fù)測定兩次點(diǎn)校準(zhǔn)標(biāo)樣，每點(diǎn)反

9、復(fù)測定兩次 在能夠濃度的在能夠濃度的0-150% 或或 50-150%嚴(yán)厲評價(jià)數(shù)據(jù)嚴(yán)厲評價(jià)數(shù)據(jù), 不要只依賴不要只依賴 r2 值值R2 = 0.984Response vs ConcentrationR2 = 0.98402468101214160102030405060CONCENTRATIONRESPONSE步驟步驟 3: 線性范圍線性范圍對方法而言是用一個(gè)計(jì)算模型去定義儀器呼應(yīng)與濃度對方法而言是用一個(gè)計(jì)算模型去定義儀器呼應(yīng)與濃度之間的關(guān)系之間的關(guān)系通常線性模型由圖表表示通常線性模型由圖表表示測定線性范圍測定線性范圍: 6點(diǎn)校準(zhǔn)標(biāo)樣，每點(diǎn)反復(fù)測定兩次點(diǎn)校準(zhǔn)標(biāo)樣，每點(diǎn)反復(fù)測定兩次 在能夠濃度

10、的在能夠濃度的0-150% 或或 50-150%嚴(yán)厲評價(jià)數(shù)據(jù)嚴(yán)厲評價(jià)數(shù)據(jù), 不要只依賴不要只依賴 r2 值值還要思索能夠的基質(zhì)效應(yīng)還要思索能夠的基質(zhì)效應(yīng)Response vs Concentration02468100246810CONCENTRATIONRESPONSEwith matrixwithout matrixResponse vs Concentration02468100246810CONCENTRATIONRESPONSE(additive effect)without matrixwith matrix 例如：線性范圍例如：線性范圍: 動(dòng)物組織中抗生素殘留檢測動(dòng)物組織中抗生素

11、殘留檢測 一切方法運(yùn)用的根本原那么一切方法運(yùn)用的根本原那么 檢查一切目的化合物的線性檢查一切目的化合物的線性 范圍覆蓋期望濃度的范圍覆蓋期望濃度的 0150% 清楚基質(zhì)效應(yīng)清楚基質(zhì)效應(yīng)VALIDATED METHODDEVELOP SPECS6107895 SELECTIVITY LINEARITY4步驟步驟 4: 靈敏度靈敏度呼應(yīng)變化與濃度變化的比例呼應(yīng)變化與濃度變化的比例例如：靈敏度例如：靈敏度: 抗生素在動(dòng)物組織中的殘留檢測抗生素在動(dòng)物組織中的殘留檢測 能夠每天變化能夠每天變化 每天例行檢查保證稱心的靈敏度每天例行檢查保證稱心的靈敏度 操作時(shí)帶入部分操作時(shí)帶入部分QC(質(zhì)量控制質(zhì)量控制)

12、樣品樣品VALIDATED METHODDEVELOP SPECS610789 SELECTIVITY LINEARITY SENSITIVITY5步驟步驟 5: 準(zhǔn)確度與準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度與準(zhǔn)確度兩部分內(nèi)容兩部分內(nèi)容;準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度; 隨機(jī)誤差隨機(jī)誤差準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度(真實(shí)度真實(shí)度); 系統(tǒng)誤差系統(tǒng)誤差 (與真值的偏離與真值的偏離)步驟步驟 5: 準(zhǔn)確度與準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度與準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度 反復(fù)測定間的預(yù)期符合程度反復(fù)測定間的預(yù)期符合程度準(zhǔn)確度的不同測定方法準(zhǔn)確度的不同測定方法; 可反復(fù)性可反復(fù)性 可重現(xiàn)性可重現(xiàn)性 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的重現(xiàn)性 (通常運(yùn)用的最好反映通常運(yùn)用的最好反映)經(jīng)過對獨(dú)立預(yù)

13、備的適宜樣品組分反復(fù)分析來測定經(jīng)過對獨(dú)立預(yù)備的適宜樣品組分反復(fù)分析來測定 可控參考物質(zhì)可控參考物質(zhì)CRM(Controlled Refernce Material ) 參考物質(zhì)參考物質(zhì)RM(Refernce Material) 有典型分析濃度的真實(shí)樣品有典型分析濃度的真實(shí)樣品 添加回收添加回收 樣品樣品 步驟步驟5:準(zhǔn)確度與準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度與準(zhǔn)確度 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度 檢測結(jié)果與真值的接近程度檢測結(jié)果與真值的接近程度 (或者與公認(rèn)的參考值的接近程度或者與公認(rèn)的參考值的接近程度)經(jīng)過含有知濃度的樣品的反復(fù)分析來測定經(jīng)過含有知濃度的樣品的反復(fù)分析來測定; 鑒定過的參考物質(zhì)鑒定過的參考物質(zhì)CRM(Certif

14、ied Refernce Material ) 參考物質(zhì)參考物質(zhì)RM(Refernce Material) 添加回收添加回收 樣品樣品或其它不常用方法或其它不常用方法;即經(jīng)過與知系統(tǒng)偏向的參考方法來比較即經(jīng)過與知系統(tǒng)偏向的參考方法來比較 例如例如:準(zhǔn)確度與準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度與準(zhǔn)確度: 動(dòng)物組織中抗生素殘留檢測動(dòng)物組織中抗生素殘留檢測 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢測的重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢測的重現(xiàn)性, 更適宜用含有知?dú)埩舻臉悠穪磉M(jìn)展更適宜用含有知?dú)埩舻臉悠穪磉M(jìn)展 回收率通常是重要的目的回收率通常是重要的目的 CRMs 或或 RMs 很難得到很難得到 需求依賴添加回收樣品需求依賴添加回收樣品 100% 的回收率并不能保證結(jié)果的

15、真實(shí)性的回收率并不能保證結(jié)果的真實(shí)性 對樣品中含有知?dú)埩粑锏奶砑踊厥蘸苤匾獙悠分泻兄獨(dú)埩粑锏奶砑踊厥蘸苤匾?能夠的話經(jīng)過能夠的話經(jīng)過PT? 確證回收率確證回收率VALIDATED METHODDEVELOP SPECS10789ACCURACY SELECTIVITY LINEARITYTRUENESS PRECISION SENSITIVITY6步驟步驟 6: 檢測限與定量限檢測限與定量限LOD & LOQ檢測限檢測限能可靠檢測到的最低濃度能可靠檢測到的最低濃度 通常用在一種樣品基質(zhì)中的倍信噪比表示通常用在一種樣品基質(zhì)中的倍信噪比表示定量限定量限能檢測到的有可接受不確定度的最低濃

16、度能檢測到的有可接受不確定度的最低濃度 通常通常,定量限是檢測限的倍定量限是檢測限的倍 沒必要對一切方法都要有確定的檢測限與定量限沒必要對一切方法都要有確定的檢測限與定量限步驟步驟 6: 檢測限與定量限檢測限與定量限(LOD & LOQ)檢測限檢測限 規(guī)范溶液的信噪比規(guī)范溶液的信噪比(S/N)不是一個(gè)適當(dāng)?shù)挠?jì)算檢測限的方法不是一個(gè)適當(dāng)?shù)挠?jì)算檢測限的方法經(jīng)過反復(fù)分析經(jīng)過一切測試步驟的樣品所得數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)而得經(jīng)過反復(fù)分析經(jīng)過一切測試步驟的樣品所得數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)而得例：檢測限與定量限例：檢測限與定量限: 動(dòng)物組織中抗生素殘留檢測動(dòng)物組織中抗生素殘留檢測 非常重要典型的殘留檢測方法非常重要典型的殘留檢測

17、方法 對確切的目的有詳細(xì)的要求對確切的目的有詳細(xì)的要求 對每一個(gè)的檢測對象有不同的檢測限與定量限對每一個(gè)的檢測對象有不同的檢測限與定量限 報(bào)告的結(jié)果表述為報(bào)告的結(jié)果表述為“未檢出有重要意義未檢出有重要意義NATA 要求對痕量有機(jī)物殘留進(jìn)展確證要求對痕量有機(jī)物殘留進(jìn)展確證 檢測限檢測限 = 能被有效檢測到與確證的最低濃度能被有效檢測到與確證的最低濃度 VALIDATED METHODDEVELOP SPECSLOD&LOQ1089ACCURACY SELECTIVITY LINEARITY SENSITIVITY7TRUENESS PRECISION步驟步驟 7: 線性范圍線性范圍方法的

18、任務(wù)范圍，該方法下對結(jié)果有一個(gè)可接受的不確定度方法的任務(wù)范圍，該方法下對結(jié)果有一個(gè)可接受的不確定度程度程度 定量限定量限 線性校正范圍的高限即最下限線性校正范圍的高限即最下限 定量限定量限 用在方法確認(rèn)中的最低濃度用在方法確認(rèn)中的最低濃度例：線性范圍例：線性范圍: 動(dòng)物組織中抗生素殘留檢測動(dòng)物組織中抗生素殘留檢測 定量限定量限 能可靠定量的最低濃度能可靠定量的最低濃度VALIDATED METHODDEVELOP SPECS10RANGE9LOD&LOQACCURACY SELECTIVITY LINEARITY SENSITIVITY8TRUENESS PRECISION步驟步驟 8

19、: 方法順應(yīng)性方法順應(yīng)性方法中對微小變化的順應(yīng)性方法中對微小變化的順應(yīng)性 象象 pH, 溫度溫度, 流速流速,試劑濃度試劑濃度, 提取時(shí)間等的微小變化的影響提取時(shí)間等的微小變化的影響. 方法的開展與實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重現(xiàn)性的研討將提示化學(xué)家能夠的潛方法的開展與實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重現(xiàn)性的研討將提示化學(xué)家能夠的潛在影響在影響 能夠的影響可以經(jīng)過一次或同時(shí)進(jìn)展的仔細(xì)設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)來評能夠的影響可以經(jīng)過一次或同時(shí)進(jìn)展的仔細(xì)設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)來評價(jià)價(jià) 引見限制影響的控制方法引見限制影響的控制方法例：方法順應(yīng)性例：方法順應(yīng)性: 動(dòng)物組織中抗生素殘留檢測動(dòng)物組織中抗生素殘留檢測 在方法開展中經(jīng)常運(yùn)用在方法開展中經(jīng)常運(yùn)用在方法開展和或確認(rèn)中

20、研討任何確定的影響在方法開展和或確認(rèn)中研討任何確定的影響 必要的話必要的話, 引見在可接受的限制內(nèi)減少影響的控制方法引見在可接受的限制內(nèi)減少影響的控制方法 方法偏向方法偏向 方法修正方法修正 內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo)VALIDATED METHODDEVELOP SPECS10RANGELOD&LOQACCURACY SELECTIVITY LINEARITY SENSITIVITY RUGGEDNESS9TRUENESS PRECISION步驟步驟 9: 計(jì)算不確定度計(jì)算不確定度與計(jì)算結(jié)果關(guān)聯(lián)的一個(gè)參數(shù)，用于表示所得結(jié)果的離差情況與計(jì)算結(jié)果關(guān)聯(lián)的一個(gè)參數(shù)，用于表示所得結(jié)果的離差情況ISO 17025

21、 和和 NATA要求要求 方法的不確定度知識(shí)對結(jié)果的比較以及斷定結(jié)果的合法性或方法的不確定度知識(shí)對結(jié)果的比較以及斷定結(jié)果的合法性或調(diào)整檢測限都是必要的調(diào)整檢測限都是必要的 好確實(shí)認(rèn)結(jié)果會(huì)有一個(gè)合理的不確定度好確實(shí)認(rèn)結(jié)果會(huì)有一個(gè)合理的不確定度 不確定度的估算對于檢測對象及其結(jié)果的運(yùn)用應(yīng)該是合理的不確定度的估算對于檢測對象及其結(jié)果的運(yùn)用應(yīng)該是合理的例例:方法不確定度估算方法不確定度估算: 抗生素在動(dòng)物組織中的殘留抗生素在動(dòng)物組織中的殘留 估算定量限及其相關(guān)控制濃度結(jié)果的不確定度估算定量限及其相關(guān)控制濃度結(jié)果的不確定度 對方法所檢測的每一個(gè)化合物者估算其結(jié)果的不確度對方法所檢測的每一個(gè)化合物者估算其

22、結(jié)果的不確度VALIDATED METHODDEVELOP SPECS MURANGELOD&LOQACCURACY SELECTIVITY LINEARITY SENSITIVITY RUGGEDNESS10TRUENESS PRECISION步驟步驟 10: 溯源溯源檢測結(jié)果必需求溯源到一定的規(guī)范檢測結(jié)果必需求溯源到一定的規(guī)范,通常是經(jīng)過完好的關(guān)系鏈通常是經(jīng)過完好的關(guān)系鏈溯源到國家或國際規(guī)范溯源到國家或國際規(guī)范,一切的步驟都有相應(yīng)的不確定度一切的步驟都有相應(yīng)的不確定度 沒有計(jì)算不確定度無法溯源沒有計(jì)算不確定度無法溯源 方法確認(rèn)對溯源而已是首要步驟方法確認(rèn)對溯源而已是首要步驟以下是量值溯源圖以下是量值溯源圖Traceable Chemical Test ResultsPhysical MeasurementsChemical Measurements例例:溯源溯源: 動(dòng)物組織中抗生素的殘留動(dòng)物組織中抗生素的殘留 保證分析所用規(guī)范品都被檢定