苯硫脲嘗味遺傳大實(shí)驗(yàn)

1、LOGO1精選精選ppt精選精選遺傳學(xué)大實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)遺傳學(xué)大實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1實(shí)驗(yàn)的每一步都要詳細(xì)地記錄操作內(nèi)容、時(shí)間、步驟、實(shí)驗(yàn)的每一步都要詳細(xì)地記錄操作內(nèi)容、時(shí)間、步驟、結(jié)果等，以備查詢(xún)。結(jié)果等，以備查詢(xún)。 2對(duì)任何自己不熟悉的實(shí)驗(yàn)儀器都不要隨意操作（尤其對(duì)任何自己不熟悉的實(shí)驗(yàn)儀器都不要隨意操作（尤其是微量移液器）。在操作的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)任何意外的現(xiàn)是微量移液器）。在操作的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)任何意外的現(xiàn)象都要及時(shí)向任課教師匯報(bào)。象都要及時(shí)向任課教師匯報(bào)。3在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中制造的任何垃圾都要丟到垃圾筐里在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中制造的任何垃圾都要丟到垃圾筐里（或先放在自己的桌面一角），嚴(yán)禁隨地投棄！特別（或先放在自己的桌

2、面一角），嚴(yán)禁隨地投棄！特別注意對(duì)廢棄細(xì)菌的殺滅和有毒垃圾的定點(diǎn)投放。注意對(duì)廢棄細(xì)菌的殺滅和有毒垃圾的定點(diǎn)投放。4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要把用過(guò)的器皿清洗后歸放整齊并清點(diǎn)數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要把用過(guò)的器皿清洗后歸放整齊并清點(diǎn)數(shù)目，向教師匯報(bào)征得同意后方可離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。目，向教師匯報(bào)征得同意后方可離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。 精選精選1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?（1）測(cè)定人群中）測(cè)定人群中PTC 嘗味基因的表現(xiàn)型和基因型，理嘗味基因的表現(xiàn)型和基因型，理解孟德?tīng)栠z傳基因型與表現(xiàn)型的對(duì)應(yīng)關(guān)系。解孟德?tīng)栠z傳基因型與表現(xiàn)型的對(duì)應(yīng)關(guān)系。（2）了解酶切擴(kuò)增多態(tài)序列（）了解酶切擴(kuò)增多態(tài)序列（cleaved amplified polymorphic

3、sequence，CAPS）（又稱(chēng)為（又稱(chēng)為PCR-RFLP）技術(shù)的原理，學(xué)會(huì)用）技術(shù)的原理，學(xué)會(huì)用CAPS 技術(shù)技術(shù)檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性（SNPs）。在分子水平上測(cè)定）。在分子水平上測(cè)定PTC 嘗味的基因型。嘗味的基因型。（3）計(jì)算群體中）計(jì)算群體中PTC 嘗味的基因頻率，判斷群體是否嘗味的基因頻率，判斷群體是否達(dá)到達(dá)到Hardy-weiberg 平衡。平衡。精選精選2. 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理2.1 苯硫脲嘗味的遺傳形式苯硫脲嘗味的遺傳形式 苯硫脲（苯硫脲（phenylthiocarbamide，PTC）是硫脲的）是硫脲的 苯基衍苯基衍生物（圖生物（圖2.1），為白色結(jié)晶粉末，因

4、含有硫代酰胺基），為白色結(jié)晶粉末，因含有硫代酰胺基（N-C=S）官能團(tuán)而有苦澀味。能?chē)L）官能團(tuán)而有苦澀味。能?chē)L1/750,0001/50,000 PTC 濃度溶液味道的人（苦澀味，少數(shù)人感到甜味）稱(chēng)濃度溶液味道的人（苦澀味，少數(shù)人感到甜味）稱(chēng)為苯硫脲為苯硫脲“嘗味者（嘗味者（taster）”；只能?chē)L出；只能?chē)L出PTC 濃度大于濃度大于1/24,000 溶液的味道（甚至對(duì)溶液的味道（甚至對(duì)PTC 的結(jié)晶物也嘗不出苦的結(jié)晶物也嘗不出苦味）的人稱(chēng)為苯硫脲味）的人稱(chēng)為苯硫脲“味盲者（味盲者（nontaster）”。精選精選 PTC 嘗味能力是受單基因控制的孟德?tīng)栠z傳嘗味能力是受單基因控制的孟德?tīng)栠z傳性

5、狀，是由位于性狀，是由位于7 號(hào)染色體上（號(hào)染色體上（7q35-7q36）的）的一種苦味味覺(jué)感受器基因一種苦味味覺(jué)感受器基因TAS2R38 決定的，屬?zèng)Q定的，屬于常染色體不完全顯性遺傳。嘗味者中顯性基因于常染色體不完全顯性遺傳。嘗味者中顯性基因T的純合子的純合子(TT)能?chē)L出能?chē)L出1750,000 16,000,000的的PTC 溶液的苦味，雜合子溶液的苦味，雜合子(Tt) 只能?chē)L出只能?chē)L出1480,000l380,000 的的PTC 溶液的苦味。因此溶液的苦味。因此可以利用對(duì)可以利用對(duì)PTC 的嘗味能力測(cè)定家族中的基因傳的嘗味能力測(cè)定家族中的基因傳遞和人群中的基因頻率。遞和人群中的基因頻率。

6、精選精選2.2 人類(lèi)苯硫脲嘗味的基因人類(lèi)苯硫脲嘗味的基因 人類(lèi)的人類(lèi)的 PTC 嘗味基因嘗味基因Homo sapiens taste receptor, type 2, member38(TAS2R38)(NM_176817)，又名，又名PTC、T2R38 或或 T2R61。絕大多數(shù)嘗味者與味盲者的區(qū)別。絕大多數(shù)嘗味者與味盲者的區(qū)別在于三處單核苷酸多態(tài)性（在于三處單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNPs)：精選精選 第一處：第一處：145 位，味盲者為位，味盲者為G145（編碼丙氨酸（編碼丙氨酸ala），嘗味者為），嘗味者為C145（編（編碼脯氨

7、酸碼脯氨酸pro）；）； 第二處：第二處：785 位，味盲者為位，味盲者為T(mén)785（編（編碼纈氨酸碼纈氨酸val），嘗味者為），嘗味者為C785（編碼丙（編碼丙氨酸氨酸ala）；）； 第三處：第三處：886 位，味盲者為位，味盲者為A886（編（編碼異亮氨酸碼異亮氨酸ile），嘗味者為），嘗味者為G886（碼纈（碼纈氨酸氨酸val）。）。精選精選 因此味盲者因此味盲者PTC 多肽中三處對(duì)應(yīng)的氨多肽中三處對(duì)應(yīng)的氨基酸分別是基酸分別是ala49、val262 和和ile262，被稱(chēng)，被稱(chēng)為為AVI 等位基因，而嘗味者的三處是等位基因，而嘗味者的三處是pro49、ala262 和和val262，被稱(chēng)

8、為，被稱(chēng)為PAV 等位基因等位基因（圖（圖2.2，2.3）。）。精選精選精選精選圖 2.2 味盲者PTC 嘗味基因編碼區(qū)（CDS）序列精選精選圖2.3 味盲者PTC 多肽精選精選 味盲者的味盲者的PTC 編碼區(qū)有五個(gè)限制性?xún)?nèi)切編碼區(qū)有五個(gè)限制性?xún)?nèi)切Fnu4H1 的識(shí)別位點(diǎn)（識(shí)別序列的識(shí)別位點(diǎn)（識(shí)別序列5-GCNGC-3），如果是嘗味者，則其第），如果是嘗味者，則其第785 位位SNP 恰好恰好形成了一個(gè)額外的形成了一個(gè)額外的Fnu4H1 識(shí)別位（識(shí)別位（GCTGC）。）。因此可以利用這個(gè)因此可以利用這個(gè)SNP 造成的限制性位點(diǎn)多態(tài)造成的限制性位點(diǎn)多態(tài)性，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增包含性，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增包含78

9、5 位位SNP 位點(diǎn)的位點(diǎn)的PTC 基因編碼區(qū)的一部分，然后用基因編碼區(qū)的一部分，然后用Fnu4H1切割擴(kuò)增切割擴(kuò)增產(chǎn)物，根據(jù)是否能把擴(kuò)增產(chǎn)物切開(kāi)而判定是某產(chǎn)物，根據(jù)是否能把擴(kuò)增產(chǎn)物切開(kāi)而判定是某個(gè)人的單倍型（個(gè)人的單倍型（haplotype）。）。精選精選4. 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 （1）講解實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線(xiàn)。）講解實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線(xiàn)。 （2）講解口腔上皮細(xì)胞總）講解口腔上皮細(xì)胞總DNA 的快速提取、基因的快速提取、基因PCR 擴(kuò)擴(kuò)增、增、DNA 電泳、電泳、PCR 產(chǎn)物純化、產(chǎn)物純化、DNA 酶切、遺傳學(xué)分析等實(shí)驗(yàn)方法及注意事酶切、遺傳學(xué)分析等實(shí)驗(yàn)方法及注意事項(xiàng)。

10、項(xiàng)。 （3）講解高壓蒸氣滅菌鍋、高速離心機(jī)、小型瞬時(shí)離心機(jī)、）講解高壓蒸氣滅菌鍋、高速離心機(jī)、小型瞬時(shí)離心機(jī)、電泳儀、水平電泳槽、渦旋振蕩器、磁力攪拌器、電子天電泳儀、水平電泳槽、渦旋振蕩器、磁力攪拌器、電子天平、平、PCR 儀、微波爐、紫外分光光度計(jì)、電磁爐、恒溫儀、微波爐、紫外分光光度計(jì)、電磁爐、恒溫水浴鍋、恒溫干熱議、凝膠成像儀、制冰機(jī)、超凈工作臺(tái)、水浴鍋、恒溫干熱議、凝膠成像儀、制冰機(jī)、超凈工作臺(tái)、通風(fēng)櫥、恒溫振蕩搖床、通風(fēng)櫥、恒溫振蕩搖床、37培養(yǎng)箱、培養(yǎng)箱、pH 計(jì)、微量移液計(jì)、微量移液器、冰箱、器、冰箱、-80超低溫冰箱等主要儀器設(shè)備以及必須的超低溫冰箱等主要儀器設(shè)備以及必須的電

11、腦軟件的使用方法、注意事項(xiàng)；電腦軟件的使用方法、注意事項(xiàng)；精選精選4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 4.2.1.1 主要儀器設(shè)備主要儀器設(shè)備 高壓蒸氣滅菌鍋、磁力攪拌器、電子天平、超高壓蒸氣滅菌鍋、磁力攪拌器、電子天平、超凈工作臺(tái)、恒溫水浴鍋、冰箱。凈工作臺(tái)、恒溫水浴鍋、冰箱。 潔凈、經(jīng)潔凈、經(jīng)121高壓滅菌高壓滅菌20min 的容量瓶、量的容量瓶、量筒、燒杯、螺口試劑瓶，一次筒、燒杯、螺口試劑瓶，一次 性醫(yī)用無(wú)菌性醫(yī)用無(wú)菌PE 手套、乳膠手套、塑料滴管，一次手套、乳膠手套、塑料滴管，一次性紙杯，記號(hào)筆。性紙杯，記號(hào)筆。4.2 PTC 嘗味能力的測(cè)定嘗味能力的測(cè)定精選精選 4.2.1.2 試劑和材

12、料試劑和材料 （1）材料：受試者為全體修讀遺傳學(xué)大實(shí)驗(yàn)的學(xué)生。）材料：受試者為全體修讀遺傳學(xué)大實(shí)驗(yàn)的學(xué)生。 （2）試劑：苯硫脲（）試劑：苯硫脲（PTC）結(jié)晶，娃哈哈純凈水。）結(jié)晶，娃哈哈純凈水。精選精選 4.2.1.3 溶液配制溶液配制 （1）原液（）原液（1 號(hào)液）：稱(chēng)取號(hào)液）：稱(chēng)取PTC 結(jié)晶結(jié)晶0.65 g，加，加娃哈哈純凈水娃哈哈純凈水500 ml，在室溫，在室溫(20左右左右)下溶解下溶解l2d（經(jīng)常搖晃）（或（經(jīng)常搖晃）（或60水浴中水浴中1 h 充分溶充分溶解），解），PTC 濃度約為濃度約為1750，過(guò)濾滅菌。，過(guò)濾滅菌。 （2）稀釋液：用娃哈哈純凈水逐級(jí)稀釋原液）稀釋液：用娃

13、哈哈純凈水逐級(jí)稀釋原液214 倍，編為倍，編為2-14 號(hào)（表號(hào)（表4.1）。）。 將配好的將配好的14 種濃度種濃度的的PTC 溶液，過(guò)濾滅菌，分別置于滅菌過(guò)的溶液，過(guò)濾滅菌，分別置于滅菌過(guò)的100 ml 螺口試劑瓶中。另取娃哈哈純凈水作為第螺口試劑瓶中。另取娃哈哈純凈水作為第15 號(hào)液。號(hào)液。精選精選精選精選 4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法 （1）讓受試者正坐，仰頭張嘴伸舌，用滴管滴）讓受試者正坐，仰頭張嘴伸舌，用滴管滴23 滴滴 15 號(hào)液于受試者舌根部，讓受試者慢慢咽下反復(fù)咂嘴號(hào)液于受試者舌根部，讓受試者慢慢咽下反復(fù)咂嘴品味液體嘗味，然后用純凈水做同樣的試驗(yàn)，交替給品味液體嘗味，然后用純

14、凈水做同樣的試驗(yàn)，交替給 受試者嘗味，避免受試者的臆意猜測(cè)而影響結(jié)果的準(zhǔn)確。受試者嘗味，避免受試者的臆意猜測(cè)而影響結(jié)果的準(zhǔn)確。 （2）詢(xún)問(wèn)受試者能否鑒別此兩種溶液的味道。）詢(xún)問(wèn)受試者能否鑒別此兩種溶液的味道。 （3）若不能鑒別或鑒別不準(zhǔn)，則依次用）若不能鑒別或鑒別不準(zhǔn)，則依次用 141 號(hào)溶液號(hào)溶液 重復(fù)試驗(yàn)，直到能明確鑒別出重復(fù)試驗(yàn)，直到能明確鑒別出PTC 的苦味為止。的苦味為止。 （4）復(fù)嘗味）復(fù)嘗味3 次，次，3 次結(jié)果相同時(shí)，才是可靠。次結(jié)果相同時(shí)，才是可靠。 （5）記錄所品出苦味的液體的編號(hào)和稀釋濃度。）記錄所品出苦味的液體的編號(hào)和稀釋濃度。精選精選注：統(tǒng)計(jì)民族、生源地是想調(diào)查注：統(tǒng)

15、計(jì)民族、生源地是想調(diào)查PTC 味盲分布與民族和地理位置是否有味盲分布與民族和地理位置是否有相關(guān)性。（此生源地統(tǒng)計(jì)的不是受試者戶(hù)籍所在地，而是其家族或家相關(guān)性。（此生源地統(tǒng)計(jì)的不是受試者戶(hù)籍所在地，而是其家族或家庭成員長(zhǎng)期生活的地方）庭成員長(zhǎng)期生活的地方）精選精選精選精選精選精選精選精選精選精選精選精選精選精選精選精選精選精選4.3 人口腔上皮細(xì)胞總?cè)丝谇簧掀ぜ?xì)胞總 DNA 的提取的提取4.3.1 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 4.3.1.1 主要儀器設(shè)備主要儀器設(shè)備 高壓蒸氣滅菌鍋、磁力攪拌器、電子天平、超凈高壓蒸氣滅菌鍋、磁力攪拌器、電子天平、超凈工作臺(tái)、恒溫水浴鍋、渦旋振蕩器、高速離心機(jī)、工作臺(tái)、恒溫

16、水浴鍋、渦旋振蕩器、高速離心機(jī)、恒溫振蕩搖床、微量移液器、電磁爐、冰箱、恒溫振蕩搖床、微量移液器、電磁爐、冰箱、-80超低溫冰箱、計(jì)時(shí)器、超低溫冰箱、計(jì)時(shí)器、pH 計(jì)。計(jì)。 潔凈、經(jīng)潔凈、經(jīng) 121高壓滅菌高壓滅菌 20min 的量筒、燒杯、螺口試劑的量筒、燒杯、螺口試劑瓶、牙簽、瓶、牙簽、1.5 mL滅菌微量離心管、微量移液器滅菌微量離心管、微量移液器吸頭（槍頭），離心管架，一次性醫(yī)用無(wú)菌吸頭（槍頭），離心管架，一次性醫(yī)用無(wú)菌 PE 手套、乳膠手套、口罩，記號(hào)筆。手套、乳膠手套、口罩，記號(hào)筆。 精選精選4.3 人口腔上皮細(xì)胞總?cè)丝谇簧掀ぜ?xì)胞總 DNA 的提取的提取4.3.1.2 試劑和材料試

17、劑和材料 （1）材料：每實(shí)驗(yàn)小組選取）材料：每實(shí)驗(yàn)小組選取 1 名受試者，用滅名受試者，用滅 菌牙簽刮取口腔上皮細(xì)胞。菌牙簽刮取口腔上皮細(xì)胞。 （2）試劑：滅菌水，）試劑：滅菌水，pH 標(biāo)準(zhǔn)液，細(xì)胞基因組標(biāo)準(zhǔn)液，細(xì)胞基因組 DNA 提取試劑盒提取試劑盒 精選精選4.3 人口腔上皮細(xì)胞總?cè)丝谇簧掀ぜ?xì)胞總 DNA 的提取的提取4.3.2 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法 （1）在）在 1.5 ml 滅菌微量離心管中加入滅菌微量離心管中加入 100 L 滅菌水。滅菌水。 （2）受試者用無(wú)菌牙簽輕刮口腔腮內(nèi)側(cè)，刮下來(lái)）受試者用無(wú)菌牙簽輕刮口腔腮內(nèi)側(cè)，刮下來(lái) 的細(xì)胞在滅菌水中漂洗。的細(xì)胞在滅菌水中漂洗。 （3）渦旋振蕩

18、器渦旋振蕩混勻）渦旋振蕩器渦旋振蕩混勻 10 s， （4）離心機(jī)瞬時(shí)離心）離心機(jī)瞬時(shí)離心 10 s。 （5）沸水浴中煮沸）沸水浴中煮沸 5 min。 （6）離心機(jī)）離心機(jī) 13200rpm 離心離心 2 min。 （7）基因組）基因組 DNA 4C 保存?zhèn)浔４鎮(zhèn)?精選精選4.5 PTC 基因基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳檢測(cè) 4.5.1. 4.5.1. 主要儀器設(shè)備主要儀器設(shè)備 高速離心機(jī)、小型瞬時(shí)離心機(jī)、電泳儀、水高速離心機(jī)、小型瞬時(shí)離心機(jī)、電泳儀、水平電泳槽、電子天平、微波爐、凝膠成像儀、平電泳槽、電子天平、微波爐、凝膠成像儀、制冰機(jī)、超凈工作臺(tái)、通風(fēng)櫥、微量移液器、制冰機(jī)、超

19、凈工作臺(tái)、通風(fēng)櫥、微量移液器、冰箱、冰箱、-80-80超低溫冰箱。超低溫冰箱。 潔凈、經(jīng)潔凈、經(jīng)121121高壓滅菌高壓滅菌20min 20min 的、微量移的、微量移液器吸頭（槍頭），離心管架，液器吸頭（槍頭），離心管架， PCRPCR管架，三管架，三角瓶，一次性醫(yī)用無(wú)菌角瓶，一次性醫(yī)用無(wú)菌 PEPE手套，記號(hào)筆，保手套，記號(hào)筆，保鮮袋，微波爐用手套，三角瓶，搪瓷盤(pán)。鮮袋，微波爐用手套，三角瓶，搪瓷盤(pán)。精選精選4.5.2. 4.5.2. 試劑和材料試劑和材料 （1 1）材料：受試者）材料：受試者PTC PTC 基因基因PCR PCR 產(chǎn)物產(chǎn)物 （2 2）試劑：）試劑：Tris Tris 堿，

20、冰乙酸，堿，冰乙酸，NaNa2 2EDTA.2HEDTA.2H2 2 O, O,溴化乙錠，瓊脂糖，溴化乙錠，瓊脂糖，Marker I Marker I 4.5.3. 4.5.3. 溶液配制溶液配制 （1 1）5050 TAE TAE 電泳緩沖液（儲(chǔ)存液，電泳緩沖液（儲(chǔ)存液，pHpH約約8.58.5）：）：Tris Tris 堿堿 242g242g，57.1ml 57.1ml 冰乙酸，冰乙酸，37.2g 37.2g NaNa2 2 EDTA.2HEDTA.2H2 2 O O ，去離子水定容至，去離子水定容至1L 1L （2 2）1 1 TAE TAE 電泳緩沖液（工作液）：取電泳緩沖液（工作液）

21、：取5050TAE TAE 電泳緩沖液，去離子水稀釋電泳緩沖液，去離子水稀釋5050倍倍 精選精選( (3 3）0.5mg/ml 0.5mg/ml 溴化乙錠（溴化乙錠（EBEB）（）（10001000 儲(chǔ)儲(chǔ)存液）：存液）：50mg 50mg 溴化乙錠溶于溴化乙錠溶于100mL dd 100mL dd waterwater，4 4C C 避光儲(chǔ)存）。避光儲(chǔ)存）。 (4) (4) 溴化乙錠（溴化乙錠（EBEB）工作液：）工作液：0.5mg/ml EB0.5mg/ml EB（10001000 儲(chǔ)存液），去離子水稀釋儲(chǔ)存液），去離子水稀釋 10001000倍倍。（注：。（注：EBEB為扁平分子，可以嵌

22、入為扁平分子，可以嵌入DNADNA，為潛，為潛在誘變劑，接觸時(shí)須帶一次性醫(yī)用無(wú)菌在誘變劑，接觸時(shí)須帶一次性醫(yī)用無(wú)菌PEPE手套手套，但也不是洪水猛獸，不小心濺到皮膚上時(shí)，但也不是洪水猛獸，不小心濺到皮膚上時(shí)，不會(huì)被皮膚吸收只是停留在表面，用大量流水不會(huì)被皮膚吸收只是停留在表面，用大量流水沖洗即可）。沖洗即可）。精選精選（1 1）配制）配制 1.2%1.2%瓊脂糖凝膠：稱(chēng)取瓊脂糖凝膠：稱(chēng)取 0.6g 0.6g 瓊瓊脂糖粉，放入三角瓶，加入脂糖粉，放入三角瓶，加入50ml 1 50ml 1 TAE TAE電電泳緩沖液，放入微波爐中加熱，并不斷取出泳緩沖液，放入微波爐中加熱，并不斷取出混勻，注意觀察

23、燒瓶中的瓊脂糖粉末，直至混勻，注意觀察燒瓶中的瓊脂糖粉末，直至完全熔解（燙，戴手套）。完全熔解（燙，戴手套）。50ml 50ml 正好倒一正好倒一塊大膠（切不可讓膠溶液溢出到微波爐中！塊大膠（切不可讓膠溶液溢出到微波爐中?。?。）。（2 2）將膠液置桌面上室溫冷卻致熱但不燙手）將膠液置桌面上室溫冷卻致熱但不燙手（約（約50-6050-60）。）。 4.5.2 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法精選精選（3 ）把梳子插到凝膠灌制模具的正確位置）把梳子插到凝膠灌制模具的正確位置后緩緩倒入膠溶液。膠溶液倒至與模具的矮后緩緩倒入膠溶液。膠溶液倒至與模具的矮邊緣相平即可。在桌面上靜置邊緣相平即可。在桌面上靜置10-20 分

24、鐘待分鐘待膠完全凝固膠完全凝固.（剩下的膠溶液封口后留待以（剩下的膠溶液封口后留待以后再熔化使用），小心拔出梳子，凝膠沒(méi)入后再熔化使用），小心拔出梳子，凝膠沒(méi)入電泳槽電泳液中，凝膠上有樣品孔的一側(cè)要電泳槽電泳液中，凝膠上有樣品孔的一側(cè)要朝向電泳槽的負(fù)極。朝向電泳槽的負(fù)極。 精選精選（4）?。┤?1 片光面紙，點(diǎn)片光面紙，點(diǎn) 5uL 滅菌水、滅菌水、2uL 6加樣緩沖液，再加入加樣緩沖液，再加入 5uL PCR 產(chǎn)物制成產(chǎn)物制成10uL DNA 樣品。樣品。 （5）在凝膠上選擇相鄰的加樣孔。用）在凝膠上選擇相鄰的加樣孔。用10ul 的吸液頭的吸液頭分別依次加入分別依次加入5uL Marker I

25、對(duì)照，各小組對(duì)照，各小組12uL PCR 產(chǎn)物電泳樣品（互相比較）產(chǎn)物電泳樣品（互相比較） （6）根據(jù)電泳槽的長(zhǎng)度把電泳儀的電壓調(diào)至）根據(jù)電泳槽的長(zhǎng)度把電泳儀的電壓調(diào)至120V(10V/cm)，電泳，電泳2030min。（注意正負(fù)電極的位置連。（注意正負(fù)電極的位置連接正確）。接正確）。 （7）把凝膠小心放入盛有）把凝膠小心放入盛有 EB的搪瓷盤(pán)中，染色的搪瓷盤(pán)中，染色 10分鐘分鐘后，取出用自來(lái)水浸泡后，取出用自來(lái)水浸泡10min 。 （8）放入凝膠成像系統(tǒng)中拍照。）放入凝膠成像系統(tǒng)中拍照。 精選精選4.6.1 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料4.6.1.1 主要儀器設(shè)備主要儀器設(shè)備 高壓蒸氣滅菌鍋、高速離心機(jī)、小型瞬時(shí)離心機(jī)、渦旋振高壓蒸氣滅菌鍋、高速離心機(jī)、小型瞬時(shí)離心機(jī)、渦旋振蕩器、磁力攪拌器、恒溫水浴鍋、恒溫干熱議、制冰機(jī)、蕩器、磁力攪拌器、恒溫水浴鍋、恒溫干熱議、制冰機(jī)、紫外分光光度計(jì)、微量移液器、冰箱、紫外分光光度計(jì)、微量移液器、冰箱、-80超低溫冰箱。超低溫冰箱。 潔凈、經(jīng)潔凈、經(jīng)121高壓滅菌高壓滅菌20min 的的1.5 mL 滅菌微量離心滅菌微量離心管、微量移液器吸頭（槍頭），離心管架，一次性