植物組織培養(yǎng)開(kāi)題范文

1、北京師范大學(xué)珠海分校開(kāi)題報(bào)告姓名（小組成員）：學(xué)院（系、所）： 學(xué)科專業(yè)： 導(dǎo)師姓名：開(kāi)題時(shí)間:姓名性別入學(xué)時(shí)間院系工程技術(shù)學(xué)院專業(yè)生物技術(shù)研究方向植物組織培養(yǎng)論文中文胡蘿卜愈傷組織培養(yǎng)題目英文Carrot callus cultivat ing論文工作計(jì)劃簡(jiǎn)述（開(kāi)題報(bào)告內(nèi)容）1、本論文課題國(guó)內(nèi)外概況和文獻(xiàn)綜述:應(yīng)用細(xì)胞的全能性（totipote ncy）理論，即已經(jīng)分化的細(xì)胞仍然具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能，可以將成熟胡蘿卜直根的部分組織培養(yǎng)成完整胡蘿卜植株。國(guó) 內(nèi)外研究者在探討胡蘿卜愈傷組織的成因時(shí)，發(fā)現(xiàn)影響胡蘿卜愈傷組織的發(fā)生頻率主要有基因型、外植體、培養(yǎng)基、激素等因素。胡蘿卜的基因型是影響

2、其離體培養(yǎng)再生能力的重要因素。對(duì)于不同品種的胡蘿卜種子，大多數(shù)研究者認(rèn)為利用其剛萌發(fā)的無(wú)菌苗的下胚軸誘導(dǎo)愈傷組織，1-3出愈率較高 。同一基因型的不同外植體其愈傷組織的發(fā)生能力有明顯差異，這與不同外植體的分化程度和脫分化能力不同有關(guān)。近年來(lái)的研究表明，以胡蘿卜下胚軸為外1,3,4植體出愈率要高于子葉和貯藏根。此外，楊寧等（1999）選取胡蘿卜貯藏根的皮層、木質(zhì)部及韌皮部為外植體，發(fā)現(xiàn)從韌皮部誘導(dǎo)出的愈傷組織有較好的5生長(zhǎng)效果。在胡蘿卜愈傷組織誘導(dǎo)和分化中，基本培養(yǎng)基成分對(duì)胚性愈傷組織的誘導(dǎo)率和質(zhì)量均有顯著影響，一般認(rèn)為MS培養(yǎng)基對(duì)體細(xì)胞胚的發(fā)生更為有利。但也有1認(rèn)為B5基礎(chǔ)培養(yǎng)基略優(yōu)于 MS基

3、礎(chǔ)培養(yǎng)基。不同的激素種類、濃度及其組合對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)率有顯著影響。已有的研究結(jié)果表明，在培養(yǎng)基中加入2,4-D,6-BA,BA,KT 等，會(huì)影響胚性愈傷組織的發(fā) 生。2,4-D的濃度從0.110.0 mg/L 不等，6-BA的濃度從0.24.5mg/L不等，2,3,6BA的濃度從0.51.0mg/L不等，KT的濃度從0.22.0mg/L不等 。此外還有研究結(jié)果表明，2,4-D/KT比值是影響愈傷組織形成的關(guān)鍵因素，隨著比值的增7大，愈傷組織誘導(dǎo)率有逐漸升高的趨勢(shì)。2、本論文課題的理論和實(shí)際應(yīng)用意義:胡蘿卜(Daucus carrot ),屬于十字花科植物，是一種十分重要的蔬菜植物。由于其營(yíng)養(yǎng)

4、價(jià)值高，及其適于生食、加工、烹調(diào)等多種用途，在世界范圍內(nèi)廣泛栽培。中國(guó)是農(nóng)業(yè)大國(guó)，胡蘿卜作為蔬菜作物在人們生活中起著重要的作 用因此，加快我國(guó)胡蘿卜育種研究以成為迫切需要。近些年來(lái)，隨著生物技術(shù)與分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，作為生物技術(shù)研究的理想材料，許多國(guó)家對(duì)胡蘿 卜體細(xì)胞雜交技術(shù)、遺傳轉(zhuǎn)化與再生技術(shù)、分子標(biāo)記與基因克隆技術(shù)進(jìn)行了廣泛深入的研究。我國(guó)科研工作者在胡蘿卜的生物技術(shù)與分子生物學(xué)研究上也取得了一定進(jìn)展，特別是在組織培養(yǎng)、原生質(zhì)體融合、遺傳轉(zhuǎn)化及再生等方面。 但是在胡蘿卜細(xì)胞培養(yǎng)方面并不是太多。因此繼續(xù)深入研究還是很有必要的。此外，由于市面上的胡蘿卜價(jià)格比較便宜，材料易得，而且在組織培

5、養(yǎng)方面容易誘導(dǎo)發(fā)生，我們可以通過(guò)這個(gè)實(shí)驗(yàn)熟悉植物組培。3、論文的基本內(nèi)容、結(jié)構(gòu)框架以及要突破的難點(diǎn):（1）材料及設(shè)備：6個(gè)培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、吸水紙、鑷子、解剖刀、無(wú)菌操作臺(tái)、胡蘿卜直根（長(zhǎng)度至少200mm直徑不小于 40mn）、大約 20% （體積比）濃度的次氯酸鈣溶液1000ml、75%酉精、MS培 養(yǎng)基、 2,4-D、KT（2）實(shí)驗(yàn)步驟設(shè)計(jì)：A. 培養(yǎng)基的配制： 取無(wú)菌水200ml 依次加入母液：大量元素25ml、微量元素2.5ml、鐵鹽2.5ml、有機(jī)元素2.5ml、重復(fù)6次，在6個(gè)培養(yǎng)瓶中加入生長(zhǎng)素2,4-D、KT （用量如下表）實(shí)驗(yàn)號(hào)基本培養(yǎng)基2,4-D (mg/L)KT (mg/L)

6、1MS002MS00.53MS104MS10.55MS21.56MS42.5誘導(dǎo)率=（形成愈傷組織的外植體數(shù) /接種外植體數(shù)）X 100% 在個(gè)瓶中稱取并加入瓊脂2g,蔗糖7.5g 放微波爐里融化 每瓶定容500ml 調(diào) PH(5.86.0) 包扎后高溫滅菌，待凝固后備用B. 外植體的清洗和消毒：用小刷在流動(dòng)的自來(lái)水下洗刷胡蘿卜，除去表面的屑粒。用小刀給其削去表皮，并切成小段放入燒杯中。先用75%酒精對(duì)胡蘿卜直根消毒5min，用無(wú)菌吸水紙吸干，再用 10%的次氯酸鈣溶液消毒 10min，放入無(wú) 菌水中漂洗23次，用無(wú)菌吸水紙吸干待用。C. 接種：在無(wú)菌操作臺(tái)上操作，把消毒好的胡蘿卜直根放入無(wú)菌

7、培養(yǎng)皿中，用消毒好的小刀沿截面將其橫切成厚度1mm左右的小圓片，然后將小圓片的韌皮部和木質(zhì)部切去，留下形成層，再將形成層切成大約長(zhǎng)5mm寬5mm高1mm的小長(zhǎng)塊。將凝固的培養(yǎng)基融化后適量倒入6個(gè)培養(yǎng)皿，用鑷子將切好的胡蘿卜外植體接種在固體培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)皿5塊，按上表放入 6個(gè)培養(yǎng)皿中，表上編號(hào)。放于黑暗處 25C條件下進(jìn)行暗培養(yǎng)。D. 培養(yǎng)：接種后的培養(yǎng)皿放在無(wú)菌箱里培養(yǎng)，培養(yǎng)期間定期更換培養(yǎng)基 ，避免營(yíng)養(yǎng)不足影響效果。并且要定期消毒，嚴(yán)格控制溫度，定時(shí)光照，使實(shí)驗(yàn)免受無(wú)關(guān)變量影響。注意觀察記錄外植體的變化，是否有污染或誘導(dǎo)出愈傷組織。(3) 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：A. 防火。實(shí)驗(yàn)中要經(jīng)常用酒精消

8、毒、用酒精燈燒鑷子、刀具，注意安全。B. 無(wú)菌操作。超凈工作臺(tái)的消毒，在工作臺(tái)內(nèi)部所用儀器的消毒以及工作 臺(tái)面上的用品要有合理的布局。手要用酒精擦干凈；鑷子和刀經(jīng)常在火焰上燒； 錐形瓶、手不要放在盛材料的培養(yǎng)皿上方。C. 材料處理。材料不易切得過(guò)小，消毒時(shí)間不易過(guò)長(zhǎng)。切取外植體時(shí)盡量 取胡蘿卜的形成層進(jìn)行接種，形成層相對(duì)木質(zhì)部和韌皮部較容易誘導(dǎo)出愈傷組 織，而且要把胡蘿卜的消毒接觸部位切除干凈。D. 培養(yǎng)基配制。按實(shí)際配制含量準(zhǔn)確吸取母液，PH的調(diào)節(jié)(PH計(jì)的正確操作)都是制備 MS培養(yǎng)基的重要操作。要先滅菌再凝固。(4) 實(shí)驗(yàn)可能遇到的困難：A.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所需要用到的實(shí)驗(yàn)用具以及培養(yǎng)基沒(méi)有經(jīng)

9、過(guò)嚴(yán)格的滅菌，實(shí) 驗(yàn)污染導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。B.培養(yǎng)基中植物生長(zhǎng)激素的濃度不對(duì)，導(dǎo)致出愈率低。4、論文計(jì)劃及進(jìn)度:理論日程（可參考）實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)時(shí)間分離胡蘿卜直根的新鮮外植體及接種進(jìn)入培養(yǎng)基第1天愈傷組織的顯著增殖約14天約兩周后，觀察并計(jì)算胡蘿卜的誘導(dǎo)率實(shí)驗(yàn)號(hào)基本培養(yǎng)基2,4-D(mg/L)KT ( mg/L)誘導(dǎo)率（%1MS002MS00.53MS104MS10.55MS21.56MS42.5期間作如下記錄簡(jiǎn)表：記錄人：溫度：濕度：日光照時(shí)間記錄項(xiàng)目日期培養(yǎng)物數(shù)目肉眼觀測(cè)形態(tài)變化污染物數(shù)目所作處理備注5、主要參考文獻(xiàn):1 張婭，曾君祉，周志勇，等.胡蘿卜組織培養(yǎng)和高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立J.植物學(xué)通報(bào)，2005,22(增刊):7-42.2 鄭回勇，鄭金貴，等.胡蘿卜再生體系及高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立J.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2002(5):237-241.3 尹文兵，李麗娟，黃勤妮，李艷紅.胡蘿卜愈傷組織的誘導(dǎo)及細(xì)胞懸浮培養(yǎng)研究J.山西師范大學(xué)學(xué)報(bào)，2004(2):72-76.4 高金秋，于麗杰.胡蘿卜體細(xì)胞胚再生系統(tǒng)的建立J.北方園 藝,2009(8):73-77.楊寧，郭勇胡蘿卜細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生胡蘿卜素的研究J.廣西植 物,1999,19(1)