人肺炎支原體抗體IgMMP-IgM酶聯(lián)免疫分析

1、人肺炎支原體抗體 IgM （ MP-IgM ）酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說(shuō)明書(shū) 本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍： 96T1.5 ng/L -40 ng/L使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清、 血漿及相關(guān)液體樣本中肺炎支原體抗 體 IgM （ MP-IgM ）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中人肺炎支原體抗體 IgM （MP-IgM ）水平。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包 被單抗的微孔中依次加入肺炎支原體抗體IgM（MP-IgM ），再與 HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原 -抗體 -酶標(biāo) -抗原復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌 后加底物 TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化

2、成藍(lán)色，并在 酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。 顏色的深淺和樣品中的肺炎支原體抗 體IgM （MP-IgM ）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光 度（ OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人肺炎支原體抗體 IgM（MP-IgM ）濃度。試劑盒組成1 30倍濃縮洗滌液20ml X 1瓶7終止液6ml X 1瓶2酶標(biāo)試劑6ml X 1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（80 ng/L）0.5ml X 1瓶3酶標(biāo)包被板12孔X 8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5mlX 1瓶4樣品稀釋液6ml x 1瓶10說(shuō)明書(shū)1份5顯色劑A液6ml x 1瓶11封板膜2張6 顯色劑 B 液 6mlx 1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)標(biāo)本要求1 標(biāo)

3、本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng) 盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20 C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的 （HRP）活性。操作步驟1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照 下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。40 ng/L 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150卩I的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150卩I標(biāo)準(zhǔn)品稀釋 液20 ng/L 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150卩啲5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150卩I標(biāo)準(zhǔn)品稀 釋液10 ng/L 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150卩啲4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150卩I標(biāo)準(zhǔn)品稀 釋液5.0 ng/L 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150卩I 的 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150卩

4、I標(biāo)準(zhǔn)品稀 釋液2.5 ng/L 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150卩I 的 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150卩I標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其 余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn) 確加樣50卩,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40卩,然后再加待測(cè)樣品 10 口1（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置37 C溫育30分鐘。4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液， 靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。

5、6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50卩,空白孔除外。7. 溫育：操作同 3。8. 洗滌：操作同 5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50,再加入顯色劑B50,輕輕 震蕩混勻，37 C避光顯色15分鐘.10. 終止：每孔加終止液50卩,終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零， 450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（ OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD 值為縱坐標(biāo)， 在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo) 準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀 釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方 程式，

6、將樣品的 OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋 倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使 用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶， 洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試 驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦 使用排槍加樣。4 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè) 物質(zhì)含量過(guò)高（樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值），請(qǐng)先 用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n 倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總 稀釋倍數(shù)（x nx 5）。5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物請(qǐng)避光保存。 7嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的