重大動物疫病采樣監(jiān)測技術(shù)

1、 重大動物疫病采樣重大動物疫病采樣 監(jiān)測技術(shù)監(jiān)測技術(shù) 中牟縣動物疫病預(yù)防控制中心 席雙藝一、畜禽血液采集技術(shù)一、畜禽血液采集技術(shù)v（一）、血液采集的要求：v1、所有采血用具均應(yīng)事先消毒、干燥處理；v2、采血部位要進行剪毛、清拭并按常規(guī)進行消毒。v3、懷疑傳染病時，采血過程要防止到處流散，檢后的殘余血液及所用器皿要進行消毒處理。v4、需抗凝的要加入抗凝劑。v5、需分離血清的血液，試管要靜置、斜放，便于血清晰出。v6、注意安全。二、各種畜禽采樣方法及部位二、各種畜禽采樣方法及部位v（一）、牛:多采用頸靜脈采血、尾靜脈采血。v1、頸靜脈采血一般在頸靜脈溝的上1/3和中1/3交界處的頸靜脈內(nèi)。v2、尾

2、靜脈采血在尾根腹側(cè)中部。牛頸靜脈采血牛頸靜脈采血牛尾靜脈采血（二）、豬：多采用耳靜脈采血、前腔靜脈采血v1、耳靜脈采血（適用于大豬）在耳下緣1/2處。v2、前腔靜脈采血，胸淺窩內(nèi)，即在第一肋骨和胸骨柄結(jié)合處前方。豬耳靜脈采血豬前腔靜脈采血豬前腔靜脈采血（三）、家禽：多采用雞翅內(nèi)側(cè)靜脈采血、雞心臟采血v1、雞翅內(nèi)側(cè)腋靜脈，肉眼可見。v2、雞心臟采血，雞仰臥保定，雞頭部朝向，拔去胸上部少許羽毛，用手指在胸骨上方、嗉囊下方摸得一凹窩，右手持針，自胸骨上方凹窩斜向前下方心臟方向刺入，邊刺邊抽動活塞，若刺入心臟，便有血液涌入注射器，術(shù)畢，局部消毒。v注意：此法采血后，多會引起雞只死亡，僅適用于淘汰雞的采

3、血。雞翅靜脈采血雞翅靜脈采血雞翅靜脈采血雞心臟采血三、畜禽病料采集技術(shù)三、畜禽病料采集技術(shù)v（一）、樣品采集的原則（一）、樣品采集的原則v1、適時采樣。根據(jù)檢測要求及檢測對象和檢驗項目的不同，選擇適當(dāng)?shù)牟蓸訒r機十分重要。樣品是有時間要求的，應(yīng)嚴(yán)格按規(guī)定時間采樣，有臨床癥狀需要作病原分離的，樣品必須在病初的發(fā)熱期或癥狀典型時采樣，病死的動物，應(yīng)立即采樣。v2、合理采樣。根據(jù)診斷檢測的要求，須嚴(yán)格按照規(guī)定采集各種足夠數(shù)量的樣品外，不同疫病的需檢樣品各異，應(yīng)按可能的疫病側(cè)重采樣。對未能確定為何種疫病的，應(yīng)全面采樣。v3、典型采樣。選取未經(jīng)藥物治療、癥狀最典型或病變最明顯的樣品，如有并發(fā)癥，還應(yīng)兼顧采

4、樣。v4、無菌采樣。供病原學(xué)及血清學(xué)檢驗的樣品，必須無菌操作采樣，采樣用具、容器均須無菌處理，尸體剖檢需采集樣品的，先采樣后檢查，以免人為污染樣品。v5、適量采樣。采集樣品的數(shù)量要滿足診斷檢測的需要，并留有余地，以備必要時復(fù)檢使用。v6、樣品處理。采集的樣品應(yīng)一種樣品一個容器，立即密封，根據(jù)樣品的性狀檢驗要求的不同，作暫時的冷藏、冷凍或其它處理。v7、安全采樣。既要保護采樣人員，以要防止病原外泄，還要防止樣品受到污染。v8、樣品包裝。主要是密閉，防止樣品損壞、污染和外泄等意外發(fā)生。v9、迅速送檢。應(yīng)盡快送實驗室進行檢測，延誤送檢時間，會影響到檢測質(zhì)量和結(jié)果的可靠性。四、組織樣品的采集四、組織樣

5、品的采集v組織樣品一般由撲殺動物或病死動物解剖采集。從尸體采樣時，先剝?nèi)游镄馗共科つw，以無菌器械將腹腔打開，根據(jù)檢驗?zāi)康暮蜕耙卟〉某醪皆\斷，無菌采集不同的組織。v1、病毒檢驗樣品。作病毒檢驗的組織，必須以無菌技術(shù)采集，組織應(yīng)分別放入滅菌的容器內(nèi)并立即密封，貼上標(biāo)簽，放入冷藏容器立即送實驗室。如果時間較長，可作凍結(jié)狀態(tài)運送。v2、細(xì)菌檢驗樣品。供細(xì)菌檢驗的組織樣品，應(yīng)新鮮并以無菌技術(shù)采集。如遇尸體已經(jīng)腐敗，某些疫病的致病菌仍可采集于長骨或肋骨，從骨髓中分離細(xì)菌。采集的所有組織分別放入滅菌的容器內(nèi)并立即密封，貼上標(biāo)簽，放入冷藏容器立即送實驗室。豬解剖采樣五、糞便樣品的采集五、糞便樣品的采集v1

6、、病毒檢驗樣品。分離病毒的糞便必須新鮮。少量采集時，以滅菌的棉拭子從直腸深處或泄殖腔粘膜上蘸取糞便，并立即投入滅菌的試管內(nèi)密封，或在試管內(nèi)加入少量PH7.4的保護液再密封。貼上標(biāo)簽冷藏送實驗室。v2、細(xì)菌檢驗樣品。作細(xì)菌檢驗的糞便，最好在動物使用抗菌藥物之前，從直腸或泄殖腔粘膜上采集，采樣方法與供病毒檢驗的相同。可投入無菌緩沖鹽水管內(nèi)，貼上標(biāo)簽冷藏送實驗室。v3、寄生蟲檢驗樣品。糞便樣品應(yīng)選取新排出的或直接從直腸內(nèi)采得，以保持蟲體或蟲體節(jié)片及蟲卵的固有形態(tài)，一般寄生蟲檢驗的糞便用量較多。采得的糞便以冷藏不凍結(jié)狀態(tài)送實驗室。糞便采集用品糞便采集用品糞便采集用品六、畜禽疫病的樣品采集v（一）、口蹄

7、疫樣品的采集（一）、口蹄疫樣品的采集v口蹄疫病毒在病畜的水皰皮內(nèi)及其淋巴液中口蹄疫病毒在病畜的水皰皮內(nèi)及其淋巴液中含毒量最高。在水皰發(fā)展過程中，病毒進入含毒量最高。在水皰發(fā)展過程中，病毒進入血流，分布到全身各種組織和體液。在發(fā)熱血流，分布到全身各種組織和體液。在發(fā)熱期血液內(nèi)的病毒含量最高，退熱后在奶、尿、期血液內(nèi)的病毒含量最高，退熱后在奶、尿、口涎、淚、糞便等都含有一定量的病毒。口涎、淚、糞便等都含有一定量的病毒。v1、組織樣品v（1）、樣品的選擇：用于病毒分離、鑒定的樣品以發(fā)病動物未破裂的水泡皮和水泡液為最好。對臨床健康但懷疑帶毒的動物可在撲殺后采集淋巴結(jié)、脊髓、肌肉等組織樣品作為檢測材料。

8、v（2）、樣品的采集和保存：樣品采集部位可用清水清洗(切忌使用酒精、碘酒等消毒劑消毒、擦拭)，剪取病畜的新鮮水泡皮35克放入滅菌小瓶中，加適量50甘油磷酸鹽緩沖液(pH7.4)，加蓋密封；也可采用無菌器具采集水泡液至少1毫升，裝入滅菌小瓶中(可加適量抗菌素)，加蓋密封。盡快冷凍保存。v（3）、在無法采集水泡皮和水泡液時，可采集淋巴結(jié)、脊髓、肌肉等組織樣品35克裝入潔凈小瓶內(nèi)，加蓋密封盡快冷凍保存。樣品的包裝瓶上均要貼上標(biāo)簽，寫明采樣地點，動物種類，編號，時間等。2、牛、羊 (OP液)樣品采集v（1）、樣品采集：被檢動物在采樣前禁食(可飲水)12小時，以免胃內(nèi)容物反流污染OP液。采樣探杯在使用前

9、經(jīng)02檸檬酸或2氫氧化鈉浸泡5分鐘，再用潔凈水沖洗。每采完一頭動物，探杯要重復(fù)進行消毒并充分清洗。采樣時動物站立保定，將探杯隨吞咽動作送入食道上部1015cm處，輕輕來回移動23次，然后將探杯拉出。v（2）、樣品的保存：將采集到的810mLOP液倒入25 mL以上的滅菌玻璃容器中，容器中應(yīng)事先加有810mL磷酸緩沖液(0.04molL、pH74)，密封后充分搖勻后盡快冷凍保存，用于病原檢測，做出追溯性診斷。3、血清樣品采集v懷疑曾有疫情發(fā)生的畜群，錯過組織樣品采集時機時，可無菌操作采集動物血液，每頭不少于10mL。無菌分離血清裝入滅菌小瓶中，加蓋密封后冷藏保存，通過檢測抗體，做出追溯性診斷。豬

10、口蹄疫樣品采集羊 (OP液)樣品采集牛(OP液)樣品采集牛(OP液)樣品采集（二）、禽流感的樣品采集（二）、禽流感的樣品采集v1、至少從5只瀕死禽采集樣品。樣品包括：泄殖腔拭子和氣管拭子(置于緩沖液中)各5個；氣管和肺的混樣5個，腸管及內(nèi)容物的混樣5個；肝、脾、腎和腦等組織樣品各5個。v2、分別采集至少10個病雞的血樣。采集10只病禽的血樣，使用一次性采血器，心臟或翅靜脈采血，每只禽采血樣2ml3ml，經(jīng)離心或自然析出血清后，將血清移到指形管中。封好口，貼好標(biāo)簽。不同禽只的血樣不能混合。（三）、豬瘟樣品的采集v豬瘟病毒復(fù)制的主要部位是扁桃體，然后經(jīng)淋巴管進入淋巴結(jié)，繼續(xù)增殖，隨即到達(dá)外周血液，從這時起病毒在脾、骨髓、內(nèi)臟淋巴結(jié)和小腸的淋巴結(jié)組織繁殖到高滴度。v樣品：全血、骨髓、淋巴結(jié)、扁桃體、腎臟、脾臟（四）、豬鏈球菌樣品采集（四）、豬鏈球菌樣品采集v致病性鏈球菌經(jīng)呼吸道或其它途徑（受損的皮膚和粘膜）進入機體后，首先在入