高效液相色譜檢查十一酸睪酮其他甾體ppt課件

1、高效液相色譜檢查十一酸睪酮高效液相色譜檢查十一酸睪酮其他甾體其他甾體 何偉康 陳忠堅(jiān)過(guò)程 查資料藥典，文獻(xiàn)，藥物分析及儀器分析課本等 進(jìn)展討論，確定方法，制定儀器清單 實(shí)驗(yàn) 成果實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)一步修正查資料 藥典 藥物的理化性質(zhì)，檢查方法及詳細(xì)操作 網(wǎng)絡(luò) 構(gòu)造式，效果及一些產(chǎn)品名 文獻(xiàn) 同類(lèi)藥物高效液相色譜法的運(yùn)用情況 分析化學(xué)和藥物分析教材 高效液相色譜法實(shí)驗(yàn)方案 主成分本身對(duì)照法無(wú)雜質(zhì)對(duì)照品 將供試品稀釋成與雜質(zhì)限制相當(dāng)?shù)臐舛?，作為?duì)照溶液。分別取供品試溶液和對(duì)照溶液進(jìn)樣，計(jì)算供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)峰面積總和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，確定雜質(zhì)能否超越限量。 供試品溶液配制 取本品約0.1

2、g，精細(xì)稱(chēng)定，參與流動(dòng)相約20ml，溶解，定容至50ml容量瓶制成每1ml中含2mg的供試品溶液。 本身對(duì)照品溶液配制 精細(xì)量取供試品溶液1ml至50ml容量瓶，定容每1ml中含0.04mg。實(shí)驗(yàn)清單 儀器： 高效液相色譜儀，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，柱長(zhǎng)？ 乙腈異丙醇水40:40:20為流動(dòng)相；檢測(cè)溫度室溫，檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm。靈敏度？流速？ 50ml容量瓶2 1ml移液管 電子天平 小漏斗 250ml 燒杯 50ml量筒 濾紙 洗耳球方案修正 供試品溶液 2mg 1ml 0.5mg1ml 本身對(duì)照溶液 0.04 mg 1ml 0.01mg1ml 色譜條件確實(shí)定 ： 色譜柱：Agil

3、ent C185um1504.6mm 流動(dòng)相確實(shí)定：？ 流速：1.0mlmin 靈敏度：0.01檔溶液配置及儀器操作供試品溶液配置：0.5mg/1ml精細(xì)稱(chēng)定50.0mg 乙腈定容至10ml 移液管移取1.0ml 流動(dòng)相定容至10ml乙腈-水=75：25本身對(duì)照品溶液配制：0.01mg/ml移液管移取供試品1.0ml 乙腈溶液定容至50.0ml乙腈溶液：10ml乙腈用75%乙腈定容至100ml液相色譜儀器操作 開(kāi)場(chǎng)：裝柱 檢漏 甲醇沖洗0.5h 流動(dòng)相沖洗0.5h 設(shè)定參數(shù) 待基線(xiàn)穩(wěn)定后進(jìn)樣 終了：用沖柱水沖洗1h 純甲醇沖洗1h 收好柱子。藥典方法藥典方法流動(dòng)相 乙腈-異丙醇-水40：40：

4、20下色譜圖 主峰 R:1.960 T: 1.258 n:9443思索： 1.主成分峰與雜質(zhì)的分別度不夠1.960 2.主成分出峰時(shí)間太長(zhǎng)21.538min如何改動(dòng)條件呢？流動(dòng)相配比流動(dòng)相乙腈異丙醇 水19055285105380155乙腈-異丙醇-水90：5：5R: 1.182 T: 1.329 n: 10321乙腈：異丙醇：水85：10：5R:3.709 T: 1.834 n: 9309乙腈：異丙醇：水80：15：5R: 1.591 T: 1.732 n:10495 流流動(dòng)動(dòng)相相RTn出峰時(shí)間min11.1821.329 10321 11.1712 3.791.84 930916.1293

5、1.5911.732 10495 13.529 第二次思索：乙腈價(jià)錢(qián)昂貴，毒性大。而甲醇粘度小，柱壓低，價(jià)錢(qián)廉價(jià)，適用范圍廣，常用于色譜分析的流動(dòng)相，激素類(lèi)藥物中較常用。藥典為什么不用甲醇替代乙腈呢？ 甲醇甲醇-異丙醇異丙醇-水水=90：5：5 R: 1.225 T: 1.338 n: 8099甲醇-異丙醇-水=80：15：5R：1.208 T : 1.334 n:8564結(jié)論甲醇替代乙腈后分別度較低，柱效有所下降，所以在實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用乙腈較為適宜。 選取流動(dòng)相，進(jìn)展雜質(zhì)限量檢查。 乙腈-異丙醇-水=80：15：5 1.進(jìn)溶劑 2.進(jìn)低濃度對(duì)照溶液 3.進(jìn)高濃度供試品溶液溶劑峰高濃度高濃度0.5mgml低濃度低濃度0.01mgml計(jì)算及結(jié)論 本身對(duì)照溶液主峰峰面積：1691935 樣品溶液雜質(zhì)峰總峰面積：666831 樣品溶液雜質(zhì)峰總峰面積本身對(duì)照溶液主峰 峰面積 即雜質(zhì)含量2