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文檔簡介
1、第四章紫外-可分光光度計一、名詞解釋1 .分光光度計: 是指能夠從含有各種波長的混合光中將每一單色光分離出來并測量其強度的儀器。2 .吸收光譜:不同的物質會吸收不同波長的光。改變入射光的波長,并依次記錄物質對不同波長光的吸收程度,就得到該物質的吸收光譜。3 .朗伯-比爾定律:當用一束單色光照射吸收溶液時,具吸光度與液層厚度及溶液濃度的乘積成正比。4 .摩爾吸光系數(shù)()和比吸光系數(shù)(a):摩爾吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù)表示在一定波長下測得的液層厚度為1cm溶液濃度c為1mol/L時的稀溶液吸光度值。吸光系數(shù)a與入射光波長、溶液溫度、溶劑性質及吸收物質的性質等多種因素有關。當其它因素固定不變時,吸光系數(shù)
2、只與吸收物質的性質有關,可作為該物質吸光能力大小的特征數(shù)據(jù)。5 .顏色互補光:如果將兩種顏色的單色光按一定的強度比例混合,可以成為白光,這樣的兩種光互稱為互補光。6 .單色器:將來自光源的復合光分解為單色光并分離出所需波段光束的裝置,是分光光度計的關鍵部件。主要由入射狹縫、出射狹縫、色散元件和準直鏡組成。7 .吸收池:又稱為比色皿、比色杯、樣品池或液槽等,是用來盛放被測溶液的器件,同時也決定著透光液層厚度、特定波長光的透光度等多種參數(shù),應具有良好的透光度和較強的耐腐蝕性。8 .光電管:是利用堿金屬的外光電效應制成的光電裝換元件,按電極結構不同可分為中心陽極式、中心陰極式和平行平板式;按管內充氣
3、與否又可分為真空光電管與充氣光電管。按使用范圍不同分為紫敏光電管和紅敏光電管兩種。9 .光電倍增管:是在光電管的陰極和陽極之間增加了若干個倍增電極構成。光電倍增管大大增加了光照的靈敏度。10.波長準確度:指儀器波長指示器上所示波長值與儀器此時實際輸出的波長值之間的符合程度。可用二者之差來衡量分光光度計的準確性。11.波長重復性:是指在對同一個吸收帶或發(fā)射線進行多次測量時,峰值波長測量結果的一致程度。通常取測量結果的最大值與最小值之差來作為衡量分光光度計的準確性指標之一。12.光度準確度是指儀器在吸收峰上讀出的透射率或吸光度與已知真實透射率或吸光度之間的偏差。二、選擇題【A型題】在五個選項中選出
4、一個最佳答案。1 .分光光度計是臨床檢驗實驗室的常用儀器,主要用于(A)A.比色分析B.結構分析C.成分分析D.發(fā)光分析E.熒光分析2 .紫外-可見分光光度計的工作原理主要依據(jù)(C)A.光的互補原理B.光譜分析原理C.光的吸收定律D.光的波粒二象性E.以上都不是3 .下列哪一項不是紫外-可見分光光度計的主要部件(D)A.光源B.單色器C.吸收池D.反光鏡E.檢測器4 .棱鏡或光柵可作為(C)A.濾光元件B.聚焦元件C.分光元件D.感光元件E.截光元件5 .鴇燈或鹵鴇燈是常用的光源之一,它所產(chǎn)生的光具有的特點是(B)A.主要是紫外光B.連續(xù)光譜、紫外光區(qū)較窄C.波長為550620nm、高光強D.
5、589nm單色光、高光強E.銳線光譜6 .鹵鴇燈的適用波長范圍是(A)A.3202500nmB.150-400nmC.254-734nmD.800-1600nmE.150800nm7 .下列哪一項不是常見的分光光度計(D)A.單光束可見分光光度計8 .單光束紫外分光光度計C.雙光束紫外-可見分光光度計D.動力學分光光度計E.雙波長分光光度計8.關于單光束紫外-可見分光光度計特點描述錯誤的是(E)A.只有一條光路8 .只有一套色散元件C.結構簡單D.可以用電表或數(shù)字顯示E.可進行光譜掃描9 .關于雙光束紫外-可見分光光度計特點描述正確的是(B)A.只有一條光路B.有兩條光路C.結構簡單D.可以不
6、用參比溶液E.不可進行光譜掃描10.檢測有色溶液最大吸收峰用下列哪個儀器最好(C)A.單光束可見分光光度計B.單光束紫外-可見分光光度計C.雙光束紫外-可見分光光度計D.雙波長紫外-可見分光光度計E.熒光光度計11.下列哪一項不是考察紫外-可見分光光度計性能的指標(D)A.波長準確度和波長重復性B.光度準確度C.光度線性范圍D.升降溫速度E.分辨率12.下列哪一項不是影響紫外-可見分光光度計準確性的因素(E)A.單色光不純B.雜散光過多C.吸收池不配套D.狹縫過大E.靈敏度13.紫外-可見分光光度計不能調零的原因是(E)A.保險絲壞B.光門不能完全打開C.預熱時間不夠D.吸收池有污垢E.光門不
7、能完全關閉14.紫外-可見分光光度計不能置100%T的原因是(B)A.保險絲壞B.光門不能完全打開C.預熱時間不夠D.吸收池有污垢E.光門不能完全關閉15.下列哪個項目可以用紫外-可見分光光度計檢測(A)A.血糖檢測B.乙肝病毒DNA定量檢測C. T淋巴細胞亞群檢測D.紅細胞直徑測量E.細胞周期檢測【X型題】每題的備選答案中有兩個或者以上正確答案,請選擇正確答案1 .分光光度計根據(jù)使用光的波長范圍不同,可分為(ABDEA.紫外分光光度計B.可見光分光光度計C.熒光光度計D.紅外分光光度計E.全波段分光光度計2 .紫外-可見分光光度計中常用的光源有(ABCA.鴇燈或鹵鴇燈B.氫燈或笊燈C.汞燈D
8、. ICPE.高能閃爍光源3 .能發(fā)射波長范圍150400nm紫外線的光源是(A。A.氫燈B.鹵鴇燈C.笊燈D.汞燈E.鴇燈4 .紫外-可見分光光度計的單色器主要組成部件有(ABCEA.入射狹縫B.色散元件C.準直鏡D.光電管E.出射狹縫5 .下列材料中可以用來做吸收池的有(ABCDA.塑料B.玻璃C.石英D.藍寶石E.樹脂6 .吸收池應具有的特征包括(BCDEA.為了使用方便,不同儀器的吸收池可以混合使用B.良好的透光性和較強的耐腐蝕性C.同一套吸收池的厚度應嚴格保持一致D.透光面的透射、反射、折射應保持一致E.使用前后必須清洗干凈7 .對檢測器的主要要求包括(ABCEA.產(chǎn)生的電信號與照射
9、到它上面的光強有恒定的函數(shù)關系8 .接受光的波長范圍大C.靈敏度高,響應速度快D.受外界光線干擾少E.產(chǎn)生的電信號易于檢測、放大,噪聲低8 .下述中不是單光束分光光度計特點的是(DE)A.結構簡單,使用、維護比較方便,應用廣泛B.從光源到試樣至接收器只有一個光通道C.不能做全波段光譜掃描D.采用兩個光柵或棱鏡加光柵的雙單色器E.從光源到試樣至接收器只有兩個光通道9 .下述中是雙光束分光光度計特點的有(AC)A.從光源到檢測器有兩條光路B.只有一個色散元件C.增加了一個光束分裂器或斬波器D.不能做全波段光譜掃描E.從光源到試樣至接收器只有一個光通道10.下述中是雙波長分光光度計特點的是(ABCD
10、EA.采用兩個單色器B.采用兩束不同波長的單色光C,可自動扣除背景的影響D.不用參比溶液,只用一個待測溶液E.能夠進行工作方式轉換,即轉變?yōu)閱尾ㄩL雙光束分光光度計11.分光光度計的性能指標包括(ABCDEA.波長準確度和波長重復性B.分辨率C.光度準確度和光度線性范圍D.基線穩(wěn)定度和基線平直度E.光譜帶寬12.分光光度計出現(xiàn)不能調零、可能的原因包括(AB)A.光門不能完全關閉B.微電流放大器損壞C.光能量不夠D.光源損壞E.吸收池架沒安裝到位13.分光光度計出現(xiàn)不能置100%T,可能的原因包括(ACD)A.光能量不夠或光源損壞B.光門不能完全關閉C.吸收池架沒安裝到位D.光門不能完全打開E.微
11、電流放大器損壞14.分光光度計出現(xiàn)光精度不準,可能的原因包括(ABQA.波長位移B.吸收池有污垢C.樣品混濁D.吸收池架沒安裝到位E.光源老化15.分光光度計出現(xiàn)噪聲指標異常時,可能的原因包括(ABCDA.光源老化B.環(huán)境振動過大C.樣品室不正D.預熱時間不夠E.樣品混濁三、簡答題1 .紫外-可見分注光度計的基本結構及各部分功能是什么?紫外-可見分光光度計基本結構由光源、單色器、樣品池、檢測器和放大顯示系統(tǒng)等五部分組成。光源提供入射光,單色器的作用是將來自光源的復合光分解為單色光并分離出所需波段光束。 吸收池用來盛放被測溶液, 檢測器作用是把光信號轉換為電信號,信號顯示系統(tǒng)是把放大的信號以適當
12、的方式顯示或記錄下來。2 .簡述朗伯-比爾定律的適用條件。朗伯-比爾定律的適用條件為:入射光為單色光。波長范圍越大,單色光純度越低,對朗伯-比耳定律的偏離越大;溶液中鄰近分子的存在并不改變每一給定分子的特性,即分子間互不干擾。當溶液濃度很大時,由于溶液分子的相互干擾,該定律不再成立。3 .紫外-可見分光光度計常見的基本類型有哪些?紫外-可見分光光度計按其光學系統(tǒng)可分為單波長分光光度計(包括單光束和雙光束)和雙波長分光光度計。4 .單波長單光束分光光度計的特點是什么?單波長單光束分光光度計結構簡單,使用、維護比較方便,應用廣泛。具設計原理和結構具有以下特點:單光束光路,從光源到試樣至接收器只有一
13、個光通道,使用中依次對參考樣品和待測試樣進行測定,然后將二次測定數(shù)據(jù)進行比較、計算,獲得最終結果;儀器只有一個色散元件,工作波長范圍較窄;通常采用直接接收放大顯示的簡單電子系統(tǒng),用電表或數(shù)字顯示;結構簡單、附件少、功能范圍小,不能做特殊試樣如渾濁樣品、不透明樣品等的測定。5 .單波長雙光束分光光度計的結構特點是什么?|單波長雙光束分光光度計的光路設計在出射狹縫和樣品吸收池之間增加了一個光束分裂器或斬波器,作用是以一定的頻率將一個光束交替分成兩路,使一路經(jīng)過參比溶液, 另一路經(jīng)過樣品溶液, 然后由一個檢測器交替接收或由兩個匹配器分別接收兩路信號; 從光源到檢測器有試樣光路和參考光路兩條通路, 可
14、同時對檢測樣品和參考樣品進行測定, 直接獲得檢測數(shù)據(jù), 還可自動補償檢測時因條件的隨機變化或樣品中非測定組分的干擾所引起的影響; 一般采用兩個光柵或棱鏡加光柵的雙單色器, 能有效地提高分辨率和降低雜散光;可以自動進行波長掃描、自動記錄光譜曲線,也可以外接計算機,實現(xiàn)自動化運行;可裝備各種附件,光、電、機緊密結合,功能范圍寬。6 .簡述紫外-可見分光光度計的性能評價指標。紫外-可見分光光度計分析結果的可靠性取決于儀器的性能是否達標。評價紫外-可見分光光度計的性能指標如下:波長準確度和波長重復性;光度準確度;光度線性范圍;分辨率;光譜帶寬;雜散光;基線穩(wěn)定度;基線平直度。7 .簡要說日A紫外-可見
15、分光光度計的工作原理是什么?不同的物質會吸收不同波長的光。改變入射光的波長,并依次記錄物質對不同波長光的吸收程度,就得到該物質的吸收光譜。每一種物質都有其特定的吸收光譜,依次可根據(jù)物質的吸收光譜來分析物質的結構、含量和純度。遵循光的吸收定律(朗伯-比爾定律)。8 .紫外-外見分曲注度計常用哪些曲源提供入射注?分別有什么特件?常用的光源有鴇燈、鹵鴇燈、氫燈、笊燈和汞燈。鴇燈和鹵鴇燈是紫外-可見分光光度計使用最多的光源之一,發(fā)出的波長范圍是3302500nm,是連續(xù)光譜,需要單色器分光,紫外光區(qū)較窄,不適用于紫外分析。氫燈和笊燈是紫外-可見分光光度計的紫外光源, 具發(fā)出的波長范圍是150400nm
16、,是連續(xù)光譜,需用單色器分光。汞燈發(fā)射的是離散譜線,在254734nm范圍內產(chǎn)生一系列譜線,能量大部分集中在253nm波長處。主要用作紫外檢測器或熒光分析儀的光源,在分光光度計中可利用汞燈的幾根特征譜線來校正分光光度計單色器的波長精度。9 .簡要說明單色器的主要功能并說明如何獲得單色光。單色器的功能是將來自光源的復合光分解為單色光并分離出所需波段光束的裝置。主要有入射狹縫、色散元件、準直鏡和出射狹縫組成。入射狹縫的作用是限制雜散光進入;色散元件的作用是將復合光分解為單色光,有棱鏡和光柵兩種;準直鏡的作用是將來自色散元件的平行光束聚集在出射狹縫上;出射狹縫的作用是將固定波長的光射出單色器。10.紫外-可見分光光度計的常用檢測器有哪些?常用檢測器有光電管、光電二極管或光電二極管陣列檢測器。11.雙波長分光光度計的基本工作原理是什么?雙波長的選擇有何要求?雙波長分光光度計的基本工作原理是
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