梅毒螺旋體檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、文件名稱梅毒螺旋體檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編碼頁數(shù)實(shí)施日期制訂人審核人批準(zhǔn)人制訂日期審核日期批準(zhǔn)日期目的：規(guī)范的梅毒螺旋體檢驗(yàn)操作，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確。適用范圍：性病實(shí)驗(yàn)室工作人員責(zé)任人：實(shí)驗(yàn)操作者1、標(biāo)本的采集與處理1.1標(biāo)本采集的基本要求1.1.1操作應(yīng)規(guī)范化。1.1.2所有標(biāo)本都應(yīng)當(dāng)被視為具有傳染性，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)戴手套謹(jǐn)慎操作。1.2梅毒標(biāo)本采集梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷主要有病原體檢測和血清學(xué)檢測方法，各期梅毒的檢測方法 及部位見下表。臨床表現(xiàn)取材部位檢查方法一期梅毒潰瘍、淋巴結(jié)、血液暗視野檢杳、血清學(xué)檢杳二期梅毒皮損、淋巴結(jié)、血液暗視野檢杳、血清學(xué)檢杳潛伏梅毒血液血清學(xué)檢杳二期梅毒血液、腦脊液血清學(xué)檢杳神

2、經(jīng)梅毒血液、腦脊液血清學(xué)檢杳1.2.1血液1.2.1.1 血清標(biāo)本根據(jù)需要，用一次性真空采血針與促凝采血管抽取靜脈血 2-5 ml ，室溫靜置 1- 2小時（或37C靜置30分鐘）,待血液凝固、血塊收縮后，3000r/min離心10- 15分鐘，分離新鮮血清，備用。也可采用保存于2-8 C或-20 C的血清。溶血、脂血或污染的標(biāo)本可影響試驗(yàn)結(jié)果。1.2.1.2 血漿標(biāo)本根據(jù)需要，用一次性真空采血針與抗凝采血管抽取靜脈血 2-5 ml ，輕輕顛倒混 勻8-10 次， 3000r/min 離心 10-15分鐘，分離血漿，備用。血庫血漿以及 EDTA 抗凝血漿同樣可以用于梅毒血清學(xué)實(shí)驗(yàn)（一般僅用于R

3、PR實(shí)驗(yàn)，），但易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)（需用血清復(fù)試） ，如用其他抗凝劑應(yīng)首先評價后再用。1.2.1.3 末梢全血消毒局部皮膚（成人和 1 歲以上兒童可選擇手指或耳垂， 1 歲以下兒童采用足 跟部）。一次性采血針刺破皮膚，用無菌棉簽擦掉第一滴血。收集滴出的血液， 立即用于檢測。1.2.2 皮損部位組織液1.2.2.1 用于病原學(xué)檢查用無菌生理鹽水浸濕的棉拭子擦去皮損表面的污物，鈍刀/刮勺輕刮、擠壓皮損部位，取滲出液與預(yù)先滴加在載玻片上的生理鹽水混合后加蓋玻片立即用于暗 視野顯微鏡檢測，或取滲出液直接涂片，用于鍍銀染色試驗(yàn)。1.2.2.2 用于核酸檢測用無菌生理鹽水浸濕的棉拭子擦去皮損表面的污物，鈍刀

4、/刮勺輕刮、擠壓皮損部位，刮取滲出液，加入有 DNA呆存液（1ml/管）的標(biāo)本管中，備用。1.2.3 淋巴液無菌操作下穿刺腹股溝淋巴結(jié)，注入 0.3ml 無菌生理鹽水并反復(fù)抽吸 2-3 次， 取少量的淋巴液直接滴于載玻片上，加蓋玻片后立即進(jìn)行暗視野鏡檢或備用。1.2.4 腦脊液 操作由專業(yè)人員進(jìn)行，一般用腰椎穿刺術(shù)獲得?；颊邆?cè)臥于硬板床，兩手抱膝 緊貼腹部，頭向前胸屈曲，使軀干呈弓形，以髂后上棘連線與后正中線的交點(diǎn) 為穿刺點(diǎn)，相當(dāng)于第 3-4 腰椎棘突間隙，消毒處理后，用 2%利多卡因自皮膚到 椎間韌帶作局部麻醉。術(shù)者用左手固定穿刺皮膚，右手持穿刺針以垂直背部方向緩緩刺入，針尖稍斜向頭部，成人

5、進(jìn)針深度約4-6cm,兒童約2-4cm。當(dāng)針頭穿過韌帶與硬腦膜時，有阻力突然消失落空感，此時可將針芯慢慢抽出，即可 見腦脊液流出，至于合適的容器中，備用。1.3 標(biāo)本接收的標(biāo)準(zhǔn)1.3.1 核對樣品與運(yùn)送單，檢查樣品管有無破損和溢漏。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將 尚存留的樣品移出，對樣品管和盛器消毒并做記錄。1.3.2 檢查樣品的狀況，記錄有無嚴(yán)重溶血、微生物污染、脂血以及黃疸等情 況。如果樣品污染或者認(rèn)為樣品不能被接受，應(yīng)將樣品安全廢棄。并將樣品情 況立即通知運(yùn)送機(jī)構(gòu)。1.3.3 對不合要求的標(biāo)本，可以拒絕接受。2、梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢查2.1 梅毒螺旋體暗視野顯微鏡檢查2.1.1 原理 梅毒螺旋體侵入人體后

6、，在皮膚黏膜下增殖，并很快沿著淋巴管到達(dá)附近淋巴 結(jié)，經(jīng)過 2-4 周的潛伏期，在侵入部位發(fā)生炎癥反應(yīng)，稱為硬下疳，數(shù)天到 1 周后，淋巴結(jié)腫大。二期梅毒是梅毒螺旋體由局部經(jīng)淋巴結(jié)進(jìn)入血液，在人體 內(nèi)大量播散后而出現(xiàn)的全身表現(xiàn)，一般發(fā)生在感染后的 7-10 周或硬下疳出現(xiàn)后 6-24 周，主要為皮膚黏膜損害，有扁平疣、黏膜斑和玫瑰斑疹等?；济范镜脑?婦可以通過胎盤使胎兒受染。研究證明，在妊娠期 7 周時，梅毒螺旋體即可通 過胎盤。其梅毒患者硬下疳、淋巴結(jié)、皮膚黏膜損害以及孕婦羊水中均可檢查 到梅毒螺旋體。將標(biāo)本置于暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片 上，可使梅毒螺旋體折射出亮光，從而

7、可根據(jù)其特殊形態(tài)和運(yùn)動方式進(jìn)行檢測。2.1.2 方法2.1.2.1 儀器耗材：1) 暗視野顯微鏡2) 無菌紗布3) 不銹鋼刮刀4) 滅菌棉拭子5) 載玻片、蓋玻片6) 注射器，注射針頭7) 滅菌生理鹽水2.1.2.2 檢測流程1) 將待檢標(biāo)本制成生理鹽水涂片，加蓋玻片后立即備檢。2) 在預(yù)先調(diào)整好的暗視野顯微鏡的聚光器上加數(shù)滴浸油，輕輕調(diào)低聚光器， 使之在載物臺下方。3) 將標(biāo)本玻片置載物臺上，上升聚光器，使浸油接觸載玻片底面，避免浸油 內(nèi)有氣泡。4) 鏡檢：先低倍后高倍，尋找有特征形態(tài)和運(yùn)動方式的梅毒螺旋體。2.1.3 結(jié)果2.3.1.1 結(jié)果判讀：在暗視野顯微鏡下觀察 , 發(fā)現(xiàn)有纖細(xì)、白色

8、、有折光的螺旋狀微生物，長6-20um,直徑小于0.2um,有6-14個螺旋，具有旋轉(zhuǎn)、蛇行及伸縮等特征性的運(yùn) 動方式，可判斷為梅毒螺旋體。2.3.1.2 結(jié)果報告：暗視野顯微鏡下若發(fā)現(xiàn)上述特征的梅毒螺旋體則報告陽性結(jié)果；未見到上述特 征的梅毒螺旋體則報告陰性結(jié)果。2.1.4 臨床意義1) 梅毒螺旋體暗視野顯微鏡檢測陽性在臨床上可確診梅毒,特別是對于有皮 膚黏膜損害和淋巴結(jié)病變的一、二期梅毒的診斷具有重要價值,且具有快 速,方便,易操作等特點(diǎn)。2) 若未能發(fā)現(xiàn)梅毒螺旋體,不能排除梅毒診斷。陰性結(jié)果原因可能為：標(biāo)本中的微生物數(shù)量不足(單次的暗視野檢測其敏感性低于50%)、病人已接受治療、皮損已接

9、近自然消退或取自非梅毒性皮損。3) 無論暗視野顯微鏡檢查的結(jié)果如何,都應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行血清學(xué)檢測。2.1.5 注意事項(xiàng)1) 取材前,應(yīng)用無菌生理鹽水清潔皮膚表面,取材時應(yīng)注意無菌操作。2) 應(yīng)取到組織滲出液,盡量避免出血,以提高檢出陽性率。3）取材后應(yīng)立即置暗視野顯微鏡下觀察，如擱置太久，梅毒螺旋體活動能力 會下降，導(dǎo)致鏡下難以觀察到陽性結(jié)果。4）對口腔潰瘍標(biāo)本，在暗視野顯微鏡下如觀察到梅毒螺旋體的特征性形態(tài)和 運(yùn)動方式，應(yīng)與其他螺旋體相區(qū)別。2.2. 甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（ TRUS）T2.2.1 原理 梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主迅速對感染早期被損害的自身細(xì)胞以及梅毒螺 旋體細(xì)胞表面所釋放脂

10、類物質(zhì)做出免疫應(yīng)答，在 3-4 周內(nèi)可產(chǎn)生抗類脂抗原的 抗體（亦稱為反應(yīng)素） 。這種抗體在體外可與心磷脂、卵磷脂和膽固醇等組成的 抗原（ 0.03%心磷脂、 0.21%卵磷脂和 0.90%膽固醇）發(fā)生抗原 -抗體反應(yīng)。心磷 脂、卵磷脂和膽固醇都是醇溶性脂類，遇水形成膠體溶液。當(dāng)含有反應(yīng)素的梅 毒血清與之混合時，即粘附在膠體顆粒的周圍。經(jīng)搖動、碰撞，形成抗原抗體 復(fù)合物，出現(xiàn)凝集顆粒，即為陽性反應(yīng)。甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)即在抗原中 加入甲苯胺紅顆粒作為指示物，與待檢血清（漿）中的反應(yīng)素結(jié)合，形成肉眼 可見的紅色絮狀物。血清不需滅活，肉眼可觀察結(jié)果。2.2.2 方法2.2.2.1 儀器耗材：1）T

11、RUST試劑盒2）水平旋轉(zhuǎn)儀：要求旋轉(zhuǎn)環(huán)狀直徑為2cm,轉(zhuǎn)速為（100土 2） r/min，并帶有計時器和保濕蓋）3）無菌生理鹽水（ 0.9%）2.2.2.2 檢測流程：2.2.2.2.1 定性試驗(yàn)1）試劑準(zhǔn)備：檢測前將試劑盒置室溫預(yù)溫 30分鐘2）加標(biāo)本：吸取50卩l(xiāng)血清（漿）置試驗(yàn)卡片圈中，并均勻地涂布在整個卡 圈內(nèi)。不能將標(biāo)本溢出環(huán)圈外面。3）加抗原：將抗原輕輕搖勻,在每個標(biāo)本圈中,用專用滴管針頭垂直滴加1滴（60± 1滴/ml，約17卩1/滴）抗原,不需要手工混勻。4）反應(yīng)：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀上，建議罩上保濕蓋， （ 100± 2） r/min 旋轉(zhuǎn) 8分鐘5) 從

12、旋轉(zhuǎn)儀中取出卡片后立即在亮光下用肉眼觀察結(jié)果。用手輕微的旋轉(zhuǎn)或 傾斜卡片可有助于弱陽性和陰性標(biāo)本。2.2.2.2.2 定量實(shí)驗(yàn)1) 實(shí)驗(yàn)卡片準(zhǔn)備：在卡片中圈 1 到圈 4中分別標(biāo)上 1:2 ，1：4，1：8，1：162) 稀釋液準(zhǔn)備：在圈1到圈4中加入50卩l(xiāng)生理鹽水，勿將鹽水液滴涂開。3) 標(biāo)本稀釋：吸取50卩l(xiāng)血清(漿)于圈1中，用移液器來回吸放 5-6次已混合圈 1 中的生理鹽水和標(biāo)本，但要避免產(chǎn)生氣泡。從圈 1(1:2)中移取 50卩l(xiāng)到圈2 (1: 4)用上述同樣方法混合后依次稀釋至圈3 (1: 8)和圈4 (1: 16)?；煨髲娜?中棄去50卩l(xiāng)。4) 依次從圈 4- 圈 1 將

13、不同稀釋度的標(biāo)本涂布整個圈內(nèi)。5) 加抗原等以下實(shí)驗(yàn)步驟同定性試驗(yàn)的 2-4。6) 如陽性反應(yīng)滴度大于 1;16, 則繼續(xù)稀釋以測定最高稀釋反應(yīng)滴度。2.2.3 結(jié)果2.2.3.1 結(jié)果判讀1) 陽性反應(yīng)：圓圈內(nèi)出現(xiàn)中或大的紅色絮狀物，液體清亮；2) 弱陽性反應(yīng)：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小的紅色絮狀物，液體混濁；3) 陰性反應(yīng)：圓圈內(nèi)僅見炭顆粒集中于中央一點(diǎn)或均勻分散。2.3.3.2 結(jié)果報告1) 定性試驗(yàn)：出現(xiàn)凝集反應(yīng)報告陽性，不產(chǎn)生凝集反應(yīng)報告陰性。2) 定量實(shí)驗(yàn)：出現(xiàn)凝集反應(yīng)的血清最高稀釋倍數(shù)為抗體滴度，結(jié)果報告滴度為1: X, X依次為1、2、4等稀釋倍數(shù)。2.2.4 臨床意義1) 梅毒螺旋體一旦感

14、染人體后產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體，未經(jīng)治療可長期存 在。經(jīng)適當(dāng)治療后，抗體可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性，早期梅毒(一期、二 期)經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后 3個月，TRUST%體滴度可下降2個稀釋度， 6個月可下降 4個稀釋度，一期梅毒一般約 1 年后可轉(zhuǎn)為陰性，二期梅毒 2 年后可轉(zhuǎn)為陰性。但晚期梅毒治療后血清滴度下降緩慢， 2 年后約 50%病人 血清反應(yīng)仍為陽性。2）TRUST定性試驗(yàn)結(jié)果可用于現(xiàn)癥梅毒診斷。TURST定量試驗(yàn)結(jié)果可用于療效 觀察和判愈。2.2.5 注意事項(xiàng)1）生物學(xué)假陽性：非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)采用的抗原為心磷脂、卵磷 脂和膽固醇的混合物，所檢測的抗心磷脂抗體易見于其他多種疾病，

15、如急 性病毒性感染、自身免疫性疾病、結(jié)締組織病、靜脈吸毒者以及懷孕的婦 女等。因此該類反應(yīng)會出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。所以該類試驗(yàn)陽性標(biāo)本需進(jìn)一步 采用梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（如 TPPA ELISA）等復(fù)檢，以排除生物學(xué) 假陽性，確認(rèn)是否為梅毒螺旋體感染。2）前帶現(xiàn)象：只對早期梅毒患者進(jìn)行非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)時，有時血 清中存在高濃度的抗體，導(dǎo)致抗原抗體濃度不匹配，出現(xiàn)弱陽性、不典型 或陰性反應(yīng)的結(jié)果，此時需將血清稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)，可出現(xiàn)陽性結(jié)果。 該現(xiàn)象稱為前帶現(xiàn)象。2.3 梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（ TPPA）2.3.1 原理梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA是用超聲裂解梅毒螺旋體抗原致敏明膠粒

16、 子，致敏粒子與待檢血清（漿）中的梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可見的顆 粒凝集。2.3.2 方法2.3.2.1 儀器耗材：1）TPPA檢測試劑盒2）移液器3）保濕盒2.3.2.2 檢測流程：1）試劑準(zhǔn)備：試驗(yàn)前 30 分鐘將待檢標(biāo)本和試劑從冰箱中取出，恢復(fù)至室溫。2）加稀釋液：每份樣本作 4 孔，用移液器將血清稀釋液滴入微量反應(yīng)板第 1 孑U 100卩l(xiāng) ），從第2孑L-第4孔各滴25卩l(xiāng)。3）樣本稀釋：用移液器取待檢血清 25卩l(xiāng)置第1孔中，然后以2n的方式從第1 孔稀釋至第 4 孔。4）加對照液：用移液器在第3孔滴入25卩l(xiāng)未致敏粒子；在第4孔滴入25卩I 致敏粒子。5）混合：以不會導(dǎo)致微

17、量反應(yīng)板內(nèi)容物濺出的強(qiáng)度混合30 秒鐘。6）反應(yīng)：加蓋置濕盒內(nèi)，于室溫（15C -30 C）下水平靜置。2小時后觀察并 記錄結(jié)果。附：重吸收試驗(yàn) 對于未致敏粒子和致敏粒子均顯示±以上凝集的樣品，要按照下列程序在完成 吸收操作的基礎(chǔ)上進(jìn)行再試驗(yàn)。1）取用定量的溶解液調(diào)制好的未致敏粒子 0.95ml 至小試管中。2）加入樣品50卩I混合，于室溫（15C -30 C）下放置20分鐘以上。3）離心分離（ 2000rpm、5 分鐘），然后分別吸取上清液【吸收完畢的稀釋樣品（1: 20）】50卩I至反應(yīng)板第3孔中，特別注意不要混入粒子。4）從第4孔以后，要預(yù)先各滴入25卩I血清稀釋液，從第3孔至

18、最后一孔用 移液器以 2n 的方式進(jìn)行稀釋。5）之后的步驟同上。2.3.3 結(jié)果2.3.3.1 結(jié)果判讀首先觀察未致敏粒子反應(yīng)孔是否出現(xiàn)凝集（第 3 孔），判斷試驗(yàn)有效性后，再根 據(jù)致敏粒子與標(biāo)本反應(yīng)孔（第 4孑L）與致敏粒子是否產(chǎn)生 1+2+凝集反應(yīng)凝 集反應(yīng)，判斷結(jié)果。如未致敏粒子反應(yīng)孔出現(xiàn)凝集（第 3 孔）為無效試驗(yàn)，需 要對標(biāo)本進(jìn)行重吸收試驗(yàn)后再進(jìn)行檢測。+ ：產(chǎn)生均一的凝集，凝集粒子在底部，呈膜狀延展；+ ：粒子環(huán)明顯變大，其外周邊緣不均勻且雜亂的凝集在周圍；± ：粒子形成小環(huán)狀，呈現(xiàn)出外周邊緣均勻且平滑的圓形；- ：粒子呈紐扣狀聚集，呈現(xiàn)出外周邊緣均勻且平滑的圓形。2.3

19、.3.2 結(jié)果報告陽性：未致敏粒子反應(yīng)孔（第 3 孔）不出現(xiàn)凝集，致敏粒子反應(yīng)孔（第 4 孔） 出現(xiàn) 1+ 2+凝集反應(yīng)，報告陽性。陰性：未致敏粒子反應(yīng)孔（第 3 孔）和致敏粒子反應(yīng)孔（第 4 孔）均未出現(xiàn)凝4集反應(yīng)，報告陰性。弱陽性：未致敏粒子反應(yīng)孔(第 3 孔)不出現(xiàn)凝集，致敏粒子反應(yīng)孔(第 孔)出現(xiàn)±凝集反應(yīng)，報告弱陽性。2.3.4 臨床意義1) 梅毒螺旋體一旦感染人體后約 2-4 周即可檢測到抗梅毒螺旋體抗體，此抗 體特異性高可達(dá) 98%以上，所以檢測到梅毒螺旋體抗體陽性可確證為現(xiàn)在或 既往有過梅毒螺旋體感染。2) 患者感染梅毒螺旋體后產(chǎn)生的抗梅毒螺旋體抗體一般能保持終生，梅

20、毒患 者即使經(jīng)過正規(guī)療程的抗梅毒治療后，梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)仍可陽 性，故梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)不能作為療效觀察的指標(biāo)。3) 梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)亦不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，試驗(yàn)陽性結(jié)果 應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，以判斷是否為梅毒現(xiàn)癥感染。2.3.5 注意事項(xiàng)1) 若未致敏粒子孔出現(xiàn)凝集反應(yīng)，血標(biāo)本需要進(jìn)行吸收后再重復(fù)試驗(yàn)，或改 用其他方法復(fù)檢。2) 試驗(yàn)加入致敏粒子、未致敏粒子后，應(yīng)以不會導(dǎo)致微量反應(yīng)板內(nèi)容物濺出 的強(qiáng)度混合。3) 紅細(xì)胞及其他血液的有形成分會影響結(jié)果，所以血液標(biāo)本應(yīng)通過離心分離 血清。4) 致敏粒子以及未致敏粒子在使用之前均應(yīng)混合均勻后再使用。5) 微

21、量反應(yīng)板中的內(nèi)容物充分混勻后再靜置，靜置過程中一定要對反應(yīng)板加 蓋并禁止振搖。6) 梅毒螺旋體感染初期，有可能不產(chǎn)生抗體，或雖然產(chǎn)生抗體但數(shù)量很少的 情況。2.4 梅毒螺旋體 IgM 檢測原理 梅毒螺旋體溶解物經(jīng)處理后，將其中的螺旋體蛋白成分用聚丙烯凝膠蛋白電泳 按分子量分餾，之后經(jīng)二次電泳轉(zhuǎn)移至硝化纖維薄膜上，風(fēng)干切片，最后制成 測試條，病人血清稀釋后與檢測條一起孵育，如果存在梅毒螺旋體特異性抗體，則抗體會與相應(yīng)的抗原條帶結(jié)合。沖洗未結(jié)合的酶結(jié)合抗體后，測試條最 后與染色劑反應(yīng)，在與抗原條帶結(jié)合的抗體上產(chǎn)生紫色的沉淀。在特異性條帶(15.5 ,17, 47KD上產(chǎn)生的反應(yīng)具有臨床意義。在其它

22、位置也有可能出現(xiàn)條帶，但并不具有臨床意義。每條測試條的頂端數(shù)字標(biāo)簽下都有血清和酶的加樣 質(zhì)控帶。這些質(zhì)控帶用于確認(rèn)病人樣本和酶的加樣。2.4.1 方法2.4.2.1 儀器耗材1) 梅毒螺旋體 IgM 試劑盒2) 移液器3) 平臺搖擺儀2.4.2.2 檢測流程1) 用鈍頭鑷子按需將電泳條取出(手不能碰到電泳條) ,放在孵育盒的小槽 中,每槽一條,數(shù)字面向上。2) 注意檢測條使用前需預(yù)濕處理,直接對著檢測條中央緩慢加入 2.0ml 樣本 稀釋液 /沖洗液至每一槽中,確保所有檢測條浸濕,檢測條不能部分漂于緩 沖液面上。3) 將孵育盒置于平臺搖擺儀上(設(shè)置最小擺角7°±2°

23、;,40-45 個循環(huán) /分鐘),浸泡及搖擺至少 5 分鐘。4) 在第一第二槽分別加入 80ul 陽性質(zhì)控及陰性質(zhì)控,在各相應(yīng)槽中加入 20ul 病人血清標(biāo)本,當(dāng)緩沖液流至槽的前端時加入。5) 將孵育盒置于平臺搖擺儀,孵育及搖擺 45 分鐘,之后取出。小心傾斜孵育 盒倒出液體。6) 在每槽中加入 2.0ml 樣本稀釋液 /沖洗液,置于平臺搖擺儀搖擺 5分鐘7) 完全倒出小槽中液體,重復(fù) 6, 7步驟 2次8) 在每槽中加入 2.0ml 稀釋后的酶結(jié)合抗人 IgM 抗體,防止平臺搖擺儀賦予 及搖擺 15分鐘。9) 傾斜孵育盒倒出酶結(jié)合抗人IgM抗體10) 在每槽中加入 2.0 樣本稀釋液 /沖洗液,置于平臺搖擺儀搖擺 5分