福建科技計劃項目

1、福建省科技計劃項目技術(shù)總結(jié)項目技術(shù)總結(jié)項目名稱（此處寫上）一、項目綜述1.1、的簡介光動力療法（Photodynamic Therapy , PDT是利用光動力效應(yīng)進行疾病診斷和治療的一種新技術(shù)。其作用基礎(chǔ)是光動力效應(yīng)（省（1）惡性胛博起者：2）掙脈注射光戟刑，優(yōu).先聚篥在惡性腫瘤組織上：（3）光敏側(cè)在腫禱組 球申富集.熒龍診斷；2）激蕪照射治療；（印腫瘤細葩壞吧或;用亡*犠創(chuàng)方扎清快罷性腫癟.光動力治療圖解1.2、光動力治療的意義及其前景傳統(tǒng)的化療藥物通過全身性給藥后，會產(chǎn)生巨大的毒副作用， （省略）1.3、光敏劑的發(fā)展現(xiàn)狀光動力治療的三要素是光敏劑、適當波長的激光和生物體內(nèi)的氧氣 其中光敏

2、劑是關(guān)鍵目前國外臨床上所使用的光敏劑主要是1996年被美國FDA正式批準用于臨床的Photofrin ，（省略）Solucion inyectable 75 mg(faifccchiw pfinfrt ssatfPhotofrinPorfimfo.*5 ngaxcan fmariaPhotofri n相對于國外而言，我國光敏劑的發(fā)展略顯滯后 （省略）產(chǎn)晶Jtt萍I :芳效期至I福大賽因注射液目前國內(nèi)正在開發(fā)的具有獨立知識產(chǎn)權(quán)的第二代光敏劑主要有金屬酞菁、血卟啉單甲醚、竹紅菌素類和二苯基卟吩（DPCOH等。其中,1.4、項目的特色與創(chuàng)新點：（即化學新藥“光汰凈”的先進性）首先，理想的藥物應(yīng)該具有

3、單一的組成與結(jié)構(gòu)，（省略）OODQO“光汰凈”（ZnPc-5K）的化學結(jié)構(gòu)其次，（省略）最后， （省略），原因有：a）改變了（省略）b）使藥物帶正電荷。（省略）c）聚賴（省略）參考文獻：1. Dougherty T J, Kautoradiati on therapy for treatme nt of malig nan t-tumors. Cancer Research, 1978,38 (8): 262& 26352. Radu A, Wagn ieres G(省略)3. Savary J F, Monnier P, Photodynamic therapy for early

4、squamous cell carcinomas of the esophagus, bronchi, th m-tetra (hydroxyphenyl) chlorin. Arch Otolaryngol Head NeckSurg, 1997,123 (2): 16A 1684. Gilson D, Ash D, Driver I, et al. Therapeutic ratio of photodynamic therapy in the treatment of superficialkin and subcutane man. Br J Cancer, 1988, 58 (5):

5、 665 6675. Moriwak(省略)6. Ris H B,(省略)7. Sharman(省略)8 Kennedy J C, Pottier R Hlinically useful photosensitizer for photodynamic therapochem Photobiol B, 1992, 14 (4): 2755 2929.Azab M, Boyer D r N M, et al. Verteporfin therapy of subfoveal minimally classiscularization inage-related macular degenerat

6、ion: 2-year results of a randomized clinical trial. Arch Ophthalmol, 2005, 123 (4): 4485 457二、研究開發(fā)內(nèi)容及結(jié)果2.1 、“光汰凈”的實驗室合成及中試化生產(chǎn)、B -單羧基取代酞菁鋅(B -ZnPcCOO)的實驗室合成及純化圖(略)B -ZnPcCOO化學結(jié)構(gòu)B -ZnPcCOOH是（省略）摸索出一條較為理想的實驗室制備路線:圖（略）B -ZnPcCOO實驗室合成路線圖在帶有回流裝置和攪拌子的取15.00g上述所制備的B-單（省略）酰胺取代酞菁鋅于250ml的三頸瓶中，（省略）、“光汰凈”（即ZnPc-

7、5K）的實驗室合成及純化圖（略）“光汰凈”（即ZnPc-5K）的化學結(jié)構(gòu)“光汰凈”的合成我們 （省略），其制備方法如下圖所示：圖（略）“光汰凈”實驗室合成路線圖（省取B -單羧基取代酞菁鋅（B -ZnPcCOOH 0.05 mmol ,略）依利特P230高效液相分析半制備系統(tǒng)ZnPc-5K的純化 （省略）半制備方法及最終得到的樣品純度分析如下所示:表1:半制備梯度洗脫方法時間（min）流速(ml/mi n)流動相A （水，含1%。TFA）百分比流動相B （甲醇：乙 腈=1: 1,含 1%TFA） 百分比檢測波長（n m）圖（略）經(jīng)過半制備純化后的樣品HPLC分析譜圖、“光汰凈”（即ZnPc-5

8、K）的中試生產(chǎn)路線“光汰凈”的產(chǎn)業(yè)化生（省略）Wang樹脂的制備。福建省功能材料工程研究中心中試生產(chǎn)線（坐落于福建省龍華藥業(yè)）B -ZnPcCOOH中間產(chǎn)品的制備工藝已獲得專利授權(quán)（相關(guān)證明請查閱附件），（省略）（1）五聚賴氨酸Wang樹脂的制備，根據(jù)下一步的合成要求，我們通過自 主設(shè)計并委托上海吉爾生化有限公司進行生產(chǎn)，第一批產(chǎn)量50g。為了保證“光汰凈”的質(zhì)量，我們在完成了 （省略）2） 最后的偶聯(lián)合成及分離純化，中試生產(chǎn)工藝流程圖圖（略）生產(chǎn)過程實景圖2.2 、“光汰凈”的結(jié)構(gòu)表征及雜質(zhì)鑒定2.2.1 、結(jié)構(gòu)表征 -紫外可見光譜：“光汰凈”在 DMF 溶劑中的紫外最大吸收峰在 678 n

9、m“光汰凈”在 DMF 中的紫外 -可見吸收光譜圖2.2.2 、結(jié)構(gòu)表征 -紅外光譜：分析“光汰凈”的紅外光譜圖顯示： .（省略）圖（略）“光汰凈”的紅外光譜圖2.2.3 、結(jié)構(gòu)表征 -質(zhì)譜“光汰凈”理論上分子量 M 為 1262.8，該化合物的質(zhì)譜圖顯示該化合物 m/z 1263.6 的峰為M+H +, m/z 632.1 的峰為M+2H2+。圖（略）“光汰凈”的質(zhì)譜圖2.2.4 、結(jié)構(gòu)表征 -1H 核磁共振“光汰凈”的質(zhì)子核磁共振譜圖的分類歸屬所示 .（省略）“光汰凈”的 1H 核磁共振譜圖及其指認2.2.5 、制備過程中的雜質(zhì)鑒定為了確定制備過程中，到底產(chǎn)生了那些主要雜質(zhì)及副產(chǎn)物。我們

10、對。進行了液質(zhì)聯(lián)用分析，從圖中發(fā)現(xiàn)。 。經(jīng)過分析 及檢驗，我們判斷。知道了主要雜質(zhì)成分，使得我們 制備分離的目標變得更加明確簡單。圖（略）“光汰凈”粗產(chǎn)品的 HPLC 分析圖圖（略）主峰的質(zhì)譜分析圖圖（略）次峰的質(zhì)譜分析圖2.3 、“光汰凈”的體外光動力藥效學研究2.3.1 、細胞攝取光敏劑含量的測定：（省略）（1）以.（省略）（2） 收集對數(shù)期細胞， .（省略）（3）37 C、5% CO2條件下孵育，至細胞單層鋪滿孔底（96孔平底板），（省略）（4） 置37C, 5% CO2恒溫箱中孵育2小時后，（省略）（5） 細胞所攝取光敏劑的含量測定 .（省略）（6） 細胞消化液總蛋白含量的測定：根據(jù)l

11、owry 蛋白測定法，在 96孔（省略）（7） 同上法測定細胞提取 .（省略）圖（略）ZnPc-5K 與 ZnPc-S4 對不同細胞的攝取比較（ ZnPc-CO-（Lys）5 代表 ZnPc-5K）232、亞細胞定位測定： .（省略）的步驟如下：（1） 收集（省略）（2）棄去培養(yǎng)液，.（省略）（3） 孵育（省略）（4） 利用激光掃描共聚焦顯微鏡 .（省略）（5） 亞細胞定位測定結(jié)果表 （省略）圖(略)ZnPc-5K 與 ZnPc-S4 的亞細胞定位(ZnPc-C0-(Lys)5 代表 ZnPc-5K)2.3.3 、體外抗腫瘤光動力學：（省略）展“光汰凈”的體外光動力學實驗研究。實驗步驟如下：2

12、）其中六組細胞.（省略）（3） 共同（省略）（4） 在37C、5% CO2的條件下培養(yǎng) （省略）（5） 加入100 h含10% SDS的0.01 N HCI溶液終止反應(yīng)后， .（省 略）（6） 確定光敏藥物在特定條件下對特定細胞的半數(shù)抑制量。 （省略）（7） ZnPc-5K與ZnPc-S4對不同細胞 （省略）圖（略）ZnPc-5K 與 ZnPc-S4 的體外光動力學研究（ ZnPc-（Lys）5 代表 ZnPc-5K）2.4、“光汰凈”的體內(nèi)光動力學研究、小鼠S180肉瘤模型的建立及光動力抗腫瘤活性：（省略）具體操作步驟如下：（a） 將.（省略）（b） 用無菌生理鹽水 （省略）（3）給藥12小時后，.（省略）（4） 10天后，（省略）（5） 實驗結(jié)果顯示： （省略）ZnPc-5K 對 S180 肉瘤的生長抑制作用242、小鼠肝癌H22腫瘤模型的建立及光動力抗腫瘤活性：（省略）具體操作步驟如下：（a） 選擇.（省略）。（b） 接種后四天，.（省略）“光汰凈”（ZnPc-5K）小鼠體內(nèi)抗H22肝癌腫瘤光動力學實驗步驟:（1）