乙草胺致癌病理學(xué)試驗的評價

1、乙草胺致癌病理學(xué)試驗的評價            關(guān)鍵詞： 乙草胺 毒理  乙草胺(Acetochlor)是選擇性旱田芽前除草劑，主要用于玉米、大豆、棉花、甘蔗及多種菜田，每畝一次施藥5080 g可控制整個生長期無雜草危害，是有推廣價值的新型除草劑。急性毒性經(jīng)口、經(jīng)皮LD50分別為2 148 mg/kg、4 166 mg/kg，SD大鼠亞慢性90 d喂喟試驗的最大無作用劑量為12

2、0;mg·kg-1.d-1,Ames、微核及睪丸染色體試驗結(jié)果均為陰性。我們又進一步作了兩年致癌試驗，現(xiàn)報告如下。 1材料與方法 1.1供試樣品95%乙草胺由江蘇省昆山化工廠、南通化工廠、遼寧省大連農(nóng)藥廠、河北省宣化農(nóng)藥廠分批提供。 1.2實驗動物清潔級5周齡SD健康大鼠，由上海BK公司提供，動物檢疫馴化1周開始給藥。設(shè)1個對照組，200、700、2 000 mg/kg·飼料3個投藥組，按鼠日均進食量折算劑量相當(dāng)于12、42、120 mg·kg-1.d-1。應(yīng)用計算機隨機分組，每組雌雄各48只，共384只。 1.3動物飼養(yǎng)試驗在全封閉

3、屏障系統(tǒng)內(nèi)進行。其系統(tǒng)內(nèi)平均溫度(22±4)，濕度(55±10)%，光照200 lx左右，空氣經(jīng)初、中、高三級過濾(過濾率為99.97%)，換氣1216次/h，系統(tǒng)保持微正壓，噪音60 dB以下，氨濃度20 mg/kg以下。采用自動飲水裝置供動物飲用。動物在懸掛式鋁合金籠內(nèi)單籠飼養(yǎng)。飼料經(jīng)60Co照射為無菌粉料。試驗期間動物自由攝食飲水。 1.4臨床觀察體重稱量013周每周1次，1426周每2周1次，27104周每4周1次。耗食稱量：每周1次。每天觀察1次，瀕死動物每天觀察兩次。 1.5病理檢查試驗期間瀕死或自然死亡動物隨時解剖檢查，于第52周

4、做階段解剖，每組雄雌動物各5只，其余均在活體試驗終期(第104周)全部解剖。取出腦、腦垂體、甲狀腺、甲狀旁腺、胸腺、氣管、肺、心、肝、脾、腎、腎上腺、食道、胃、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、盲腸、直腸、肛門、胰腺、膀胱、前列腺、精囊腺、睪丸、卵巢、附睪、子宮、乳腺、皮膚、大腿骨、胸骨、淋巴結(jié)、眼球、唾液腺及所有肉眼認為異常的組織及臟器。稱重臟器包括心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、腦、睪丸、卵巢。標(biāo)本經(jīng)體積分數(shù)為10%的中性福爾馬林緩沖液固定57 d，取材之后再次固定12 h。組織以乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，HE染色，樹膠封固。光鏡檢查。記錄病變的種類及程度。 1.6數(shù)

5、據(jù)處理體重、耗食等用t檢驗。腫瘤發(fā)生率、死亡率等用2檢驗。 2實驗結(jié)果 2.1腫瘤發(fā)生率本試驗384只動物其中222只出現(xiàn)腫瘤，雄性95只(42.97%)，雌性127只(57.21%)，雄雌比11.3，這種差異與雌鼠腦垂體和乳腺腫瘤的自然發(fā)生率較高有關(guān)?；写贵w腫瘤高劑量與低劑量分別為25%和37.5%，雌性分別為54%和62.5%。乳腺腫瘤雄性各組只是偶發(fā)12例，雌性對照組為33.33%，高劑量組為35.41%。白血病雄性對照組1例，而高劑量組未發(fā)現(xiàn)，雌性對照組1例。高劑量組2例。肺腺瘤雄性對照組及中、高劑量組各1例，雌性僅高劑量組出現(xiàn)1例。肝癌雄性對照組和高劑量組各1例，雌性各劑量組均未發(fā)

6、生。甲狀腺瘤雄性劑量組發(fā)生率較高，低劑量組2例，中、高劑量組各1例，而雌性僅高劑量組有1例。甲狀腺癌雄性對照組、高劑量組各1例，雌性僅高劑量組有1例，這些差異均無顯著性(表1)。 2.2腫瘤檢出數(shù)在222只發(fā)生腫瘤的大鼠中共檢出298個腫瘤，其中每只有1、2、3、4、6個腫瘤的大鼠分別為166、41、6、8、1只。平均腫瘤數(shù)對照組、低、中、高劑量組雄性依次為1.0、1.45、1.11、1.18個；雌性依次為1.43、1.43、1.41、1.81個。各組均無明顯的劑量-反應(yīng)關(guān)系。 2.3不同時期腫瘤發(fā)生數(shù)各劑量組大鼠腫瘤發(fā)生時間，除雄性低劑量組1例腦垂體腫瘤發(fā)生于第10個月外，其余都在1年半以后

7、發(fā)生，在發(fā)生時間上各劑量組和對照組差異無顯著性。    2.4動物自然死亡累積、時間及死因分析中途自然死亡動物的累積數(shù)，對照組與高劑量組雄性分別為18只(37.50%)、15只(31.31%)；雌性分別為19只(39.58%)、16只(33.33%)，無統(tǒng)計學(xué)意義。動物死亡時間各劑量組間差異亦無顯著性。中途死亡動物主要死因為腦垂體腫瘤、乳腺腫瘤、白血病等，各劑量組無明顯差異。 3討論 本試驗結(jié)果高劑量組出現(xiàn)輕度中毒現(xiàn)象，與對照組比較體重受到抑制7%，各劑量組104周生存率均在50%以上。而且死亡大鼠自溶不能進行病理檢查者不超過5%，這些都符合國際致癌試驗

8、的設(shè)計要求1。  表1各劑量組腫瘤類型及發(fā)生數(shù)(只) 腫瘤雄性雌性 0(mg/kg)200(mg/kg)700(mg/kg)2 000(mg/kg)0(mg/kg)200(mg/kg)700(mg/kg)2 000(mg/kg) 肺腺瘤10110001 心纖維瘤01000000 肝癌10010000 膽管瘤00000010 腎胚胎瘤00200000 胰島細胞瘤10200000 胰腺瘤00010000 胰腺癌00110000 甲狀腺腺瘤02110001 甲狀腺腺癌10010001 腦垂體腺瘤1817161228232624 腦垂體腺癌00102532 乳腺腺瘤010

9、02521 乳腺纖維腺瘤03111391312 乳腺癌00201004 腎上腺嗜鉻細胞瘤11011000 胃乳頭狀瘤00100100 胃惡纖組00000100 腦血管瘤00100000 腦腺瘤01000000 脾網(wǎng)織細胞瘤01000001 白血病22101012 子宮血管纖維瘤00001000 子宮肌瘤00000010 皮下纖維瘤01000000 纖維肉瘤00010000 血管瘤00000101 血管惡纖組00010020 皮膚鱗癌01000000 腹腔纖維瘤00010000 腸系膜淋巴囊腫00000001 每組實驗動物數(shù)為48只農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所2參考WHO的致癌試驗判定標(biāo)準(zhǔn)，制定出我國致癌試驗結(jié)果出現(xiàn)下列之一，并經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有顯著差異者可以認為致癌陽性結(jié)果：(1)腫瘤僅發(fā)生在染毒組，對照組無此類腫瘤；(2)染毒組與對照組均發(fā)生腫瘤，但染毒組明顯高于對照組；(3)染毒組多發(fā)生腫瘤多，而對照組無或少數(shù)動物有多發(fā)性腫瘤；(4)染毒組與對照組腫瘤發(fā)生率無明顯差異，但染毒動物發(fā)生時間較早。本試驗結(jié)果不具有上述情況，此外從惡性腫瘤、癌前病變發(fā)生率來看，染毒組與對照組差異無顯著性，而且出現(xiàn)的各類腫瘤其發(fā)生率都在SD大鼠自發(fā)性腫瘤背景范圍之內(nèi)3，林裕造等1還提出值得重