不同處理方法對草果種子生活力測定的影響

1、不同處理方法對草果種子生活力測定的影響         11-04-23 16:28:00     編輯：studa20               作者：楊耀文，普春霞，劉小莉，楊加龍，錢子剛【摘要】  目的建立草果種子生活力測定的方法，為種子保存、種苗生產(chǎn)提供依據(jù)。方法采用TTC(四唑)法測定8組不同處理的草果種子

2、生活力。結(jié)果草果種子存在吸漲損傷，8組不同處理方法在不同程度上避免吸漲損傷;草果種子對0.5% TTC染色反應(yīng)比1.0% TTC敏感。結(jié)論室溫浸泡4 h，25 恒溫浸濕48 h的處理能有效避免吸漲損傷，0.5% TTC染色48 h以測定草果種子生活力。 【關(guān)鍵詞】  草果種子; 生活力; 吸漲損傷草果Amomum tsao-ko Crevost et Lemaire為姜科豆蔻屬多年生宿根草本植物1，2，果實(shí)入藥，以個(gè)大、飽滿、氣辛香者為佳3。草果為芳香化濕藥，入脾、胃二經(jīng)，暖脾和胃，理氣寬中，治心腹痛，止嘔補(bǔ)胃，下氣，消酒毒4。草果是云南特產(chǎn)的中藥材和調(diào)味品，約占全國產(chǎn)量的百分之九十

3、五3。TTC(四唑)染色方法測定種子生活力，方法簡便快捷，適用范圍廣，新采收種子、休眠種子、儲存多年種子都可以用此方法，而且結(jié)果準(zhǔn)確57。本文采用TTC法59對草果種子生活力進(jìn)行了初步研究，為快速了解種子潛在的發(fā)芽能力，為種子的保存和生產(chǎn)、以及藥材生產(chǎn)提供依據(jù)6，7。目前，草果種子生活力測定未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。1 材料和方法草果Amomum tsao-ko Crevost et Lemaire種子采自高黎貢山標(biāo)坡居群，該居群位于N 24 °50.289 E 98 °46.501;海拔2 070 m。2007-10采收，室內(nèi)自然干燥，用牛皮紙袋存放。隨機(jī)抽取200粒種子，隨機(jī)分

4、為8份，每份25粒種子，分別做8種不同的處理10(見表1)，將處理后的種子剝?nèi)ゼ俜N皮，沿種脊小心地通過胚中心切成兩瓣，分別放入培養(yǎng)皿內(nèi)，注入TTC溶液浸沒剖面，分別采用1.0% 和0.5% TTC溶液在3035 下進(jìn)行不同染色時(shí)間的處理，觀察種子切面，根據(jù)種胚各部分的染色反應(yīng)，確定種子有無生活力。種胚全部染色的為有生活力種子，子葉有1/3以下不染色的也是有生活力的種子;種子完全不染色的為無生活力種子;胚染成淺紅色的為染色淺、生活力弱的種子9。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)4次。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，確定草果種子生活力測定方法。2 結(jié)果與討論2.1 0.5% TTC染色觀察草果種子生活力用0.5% TTC溶液對各組種子染色

5、并統(tǒng)計(jì)(見表2)，染色48 h，有生活力種子平均數(shù)量E組最大，為18.00，B組最小，為2.25;無生活力種子平均數(shù)量B組最大，為13.50，H組最小，為5.50;生活力弱種子平均數(shù)量A最大，為13.13，E組最小，為1.00。表1 不同處理方法48 h染色有生活力種子平均數(shù)量的比較表2 0.5% TTC染色48 h種子生活力統(tǒng)計(jì)2.2 1.0% TTC染色觀察草果種子生活力用1.0% TTC溶液染色各組種子并統(tǒng)計(jì)(表3)。表3 1.0% TTC染色48h種子生活力統(tǒng)計(jì)圖1 0.5% TTC染色不同染色 圖2 1.0% TTC染色不同染色時(shí)間有生活力種子平均數(shù)的變化 時(shí)間有生活力種子平均數(shù)的變

6、化2.3 TTC濃度用0.5%或1.0%TTC染色，有生活力種子平均數(shù)都是E組最高(表1)。 0.5% TTC染色，各組對染色的反應(yīng)時(shí)間存在差異：E組染色6 h，D組染色10 h，F(xiàn)組染色24 h，A組、C組、G組染色27 h，H組染色31 h，有生活力種子平均數(shù)開始緩慢增多。1.0% TTC染色，各組對染色的反應(yīng)時(shí)間差異不如0.5% TTC染色的差異明顯：A、E、F、G、H組染色24 h，B、C、D組染色34 h，有生活力種子平均數(shù)開始緩慢增多(圖1、2)。在實(shí)驗(yàn)過程中，草果種子經(jīng)48 h染色，0.5% TTC染色較1.0% TTC染色顏色更紅，容易觀察計(jì)數(shù)?？赡芴崾静莨N子對0.5% TT

7、C染色更為敏感。2.4 染色時(shí)間兩種不同濃度TTC染色648 h，有生活力種子逐漸被染成紅色，被染成紅色的有生活力種子數(shù)量隨著染色時(shí)間的延長而增多。染色時(shí)間達(dá)到48 h時(shí)，有生活力種子數(shù)量均達(dá)到最高值，在實(shí)驗(yàn)中觀察到繼續(xù)增加染色時(shí)間，有生活力種子數(shù)無增多現(xiàn)象,隨著時(shí)間的延長，TTC染液會在培養(yǎng)皿壁形成朱紅色的沉積，可能也會影響染色結(jié)果，所以染色時(shí)間不宜超過48 h。2.5 吸漲損傷種子猛烈吸水后，吸水不均勻，產(chǎn)生局部壞死，這就是吸漲損傷10。避免吸漲損傷可以保證生活力測定更為準(zhǔn)確，同時(shí)提示種子萌發(fā)時(shí)應(yīng)考慮避免吸漲損傷，提高萌發(fā)率。各組實(shí)驗(yàn)的結(jié)果比較可看出草果種子存在吸漲損傷(表1)。A組和B組

8、比較，室溫下隨著種子浸泡時(shí)間延長，吸漲損傷更加嚴(yán)重;C組和D組比較，室溫下隨著種子浸濕時(shí)間延長，吸漲損傷減輕。B組和D組比較，室溫下種子浸泡48 h引起的吸漲損傷大于種子浸濕48 h;A組和C組比較，室溫下種子浸泡24 h引起的吸漲損傷大于種子浸濕24 h。     11-04-23 16:28:00     編輯：studa20A組、B組、G組用0.5% TTC染色，有生活力種子數(shù)量均低于1.0% TTC染色的數(shù)量。0.5% TTC染色48 h有生活力種子平均數(shù)從高到低依次是E組、F組、H組、D組、G組、C組、A

9、組、B組;1.0% TTC染色48 h有生活力種子平均數(shù)從高到低依次是E組、F組、G組、H組、A組、D組、B組、C組。這種差異的產(chǎn)生可能是由于部分發(fā)生吸漲損傷的種子仍有微弱的呼吸作用，會被高濃度(1.0%)TTC染成紅色，表現(xiàn)為有生活力的種子，而不容易被低濃度的(0.5%)TTC染成紅色，表現(xiàn)為無生活力或生活力弱的種子，導(dǎo)致生活力測定的誤差。部分種子處理時(shí)間不夠，染色時(shí)浸泡在染液中仍然吸水較為猛烈，也產(chǎn)生吸漲損傷，種子仍有微弱的呼吸作用，會被高濃度(1.0%)TTC染成紅色，表現(xiàn)為有生活力的種子，導(dǎo)致生活力測定的誤差。A組和C組比較，室溫24 h的浸泡和浸濕處理，0.5% TTC染色時(shí)，草果種

10、子生活力平均數(shù)量的差異反映出種子存在的吸漲損傷，1.0% TTC染色，則不能從種子生活力平均數(shù)量的差異上反映出種子存在的吸漲損傷;C組和D組比較，都是由于C組浸濕處理時(shí)間不夠，浸泡在染液中產(chǎn)生吸漲損傷。B組和D組比較，室溫48 h的浸泡和浸濕處理，0.5% TTC染色，草果種子生活力平均數(shù)量差異比1.0% TTC染色的差異大，反映出草果種子吸漲損傷差異大，1.0% TTC染色這種差異減少。同時(shí)提示0.5% TTC染色比1.0% TTC染色更能準(zhǔn)確的反映草果種子生活力的細(xì)微變化。2.6 浸濕處理浸濕處理能在一定程度上避免吸漲損傷，H組和G組比較，低溫時(shí)浸濕時(shí)間延長，有生活力種子平均數(shù)量下降;D組

11、和C組比較，室溫浸濕時(shí)間延長，有生活力種子平均數(shù)量上升;H組合C組比較，處理24 h，4 浸濕有生活力種子平均數(shù)量高于室溫浸濕的數(shù)量;D組和G組比較，處理48 h，4 浸濕的有生活力種子平均數(shù)量低于室溫浸濕的數(shù)量;說明在一定的時(shí)間范圍內(nèi)，低溫浸濕比室溫浸濕更能有效避免吸漲損傷，低溫浸濕的時(shí)間延長，有生活力種子平均數(shù)量下降，可能是低溫處理使草果種子呼吸作用減弱，生活力也隨之降低。提示草果種子對低溫的反應(yīng)比較敏感，長期低溫可能損傷種子，降低種子生活力，在種子的萌發(fā)、保存和運(yùn)輸過程中應(yīng)該避免低溫帶來的影響。草果種子直接浸濕，比較H組、D組、G組、C組的試驗(yàn)結(jié)果，4浸濕24 h，草果種子有生活力平均種

12、子數(shù)最高，室溫浸濕24 h，有生活力種子平均數(shù)量最低。室溫浸濕48 h，有生活力種子平均數(shù)量高于室溫浸濕24 h，甚至高于4 浸濕48 h;說明室溫下緩慢濕潤，種子易吸收外部水分，有效避免吸漲損傷。E、F組和其他組比較，表明短時(shí)間的浸泡后，再作浸濕處理，種子能更有效的避免吸漲損傷。E組和F組比較，48 h，25 浸濕比4 浸濕有生活力種子平均數(shù)量更大。低溫緩慢濕潤法是避免吸漲損傷的一種合理方法10，對于草果種子而言，長時(shí)間(48 h)低溫可能對種子造成傷害。草果種子堅(jiān)硬的種皮外還包裹緊密的假種皮，采用室溫浸泡4 h后，25 恒溫箱內(nèi)浸濕48 h的處理，更能有效避免吸漲損傷，對草果種子生活力的影

13、響最小(表1)。3 結(jié)論采用TTC(四唑)法測定草果種子生活力，應(yīng)該避免吸漲損傷對測量結(jié)果的影響。在實(shí)際測量中草果種子對0.5%TTC染色反應(yīng)比1.0%TTC敏感，染色時(shí)間達(dá)到48 h時(shí)，有生活力種子數(shù)量均達(dá)到最高值。通過本研究，建立了草國種子生活力測定的方法：種子在室溫(2125 )下浸泡4 h，25 恒溫浸濕48 h的處理后，用0.5%TTC染色48 h，統(tǒng)計(jì)分析草果種子生活力，為種子保存、種苗生產(chǎn)提供依據(jù)。【參考文獻(xiàn)】  1 中國植物志編委會. 中國植物志 (第16卷第2分冊)M.北京：科學(xué)出版社，1981.2 中國科學(xué)院昆明植物研究所. 云南植物志(第8卷)M.北京：科學(xué)出版

14、社，1997.3 丁艷霞，崔秀明，戴 云.草果的研究進(jìn)展J.特產(chǎn)農(nóng)業(yè)，2005,4：60.4 國家中醫(yī)藥管理局中華本草委員會. 中華本草M.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999.5 胡文多,趙曙國, 郭成亮,等. 進(jìn)境糧谷中截獲的檢疫性雜草種子生活力測定J.檢驗(yàn)檢疫科學(xué)，2008,2:19.6 沈宇峰，王志安，俞旭平,等. 白術(shù)種子生活力測定方法及其與發(fā)芽率的相關(guān)性研究J.中國中藥雜志，2008,33(3):248.7 彭國平，向 華，陳章源,等. 中藥白鮮種子生活力測定及發(fā)芽條件的初步研究J.湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2O07，4：78.8 李淑君，劉書燕.羊柴種子生活力測定方法的研究J.內(nèi)蒙古草業(yè)，19

15、95,2:51.9 張存信.棉花種子生活力測定技術(shù)J.農(nóng)村實(shí)用工程技術(shù)：溫室園藝 ，1996,5:20.10 鄭智禮，任兆光，周長東，等.吸漲損傷對綠蒙古錦雞兒種子生活力測定的影響J.山西林業(yè)科技，1998,4:40.     11-04-23 16:28:00     編輯：studa20A組、B組、G組用0.5% TTC染色，有生活力種子數(shù)量均低于1.0% TTC染色的數(shù)量。0.5% TTC染色48 h有生活力種子平均數(shù)從高到低依次是E組、F組、H組、D組、G組、C組、A組、B組;1.0% TTC染色48 h有

16、生活力種子平均數(shù)從高到低依次是E組、F組、G組、H組、A組、D組、B組、C組。這種差異的產(chǎn)生可能是由于部分發(fā)生吸漲損傷的種子仍有微弱的呼吸作用，會被高濃度(1.0%)TTC染成紅色，表現(xiàn)為有生活力的種子，而不容易被低濃度的(0.5%)TTC染成紅色，表現(xiàn)為無生活力或生活力弱的種子，導(dǎo)致生活力測定的誤差。部分種子處理時(shí)間不夠，染色時(shí)浸泡在染液中仍然吸水較為猛烈，也產(chǎn)生吸漲損傷，種子仍有微弱的呼吸作用，會被高濃度(1.0%)TTC染成紅色，表現(xiàn)為有生活力的種子，導(dǎo)致生活力測定的誤差。A組和C組比較，室溫24 h的浸泡和浸濕處理，0.5% TTC染色時(shí)，草果種子生活力平均數(shù)量的差異反映出種子存在的吸

17、漲損傷，1.0% TTC染色，則不能從種子生活力平均數(shù)量的差異上反映出種子存在的吸漲損傷;C組和D組比較，都是由于C組浸濕處理時(shí)間不夠，浸泡在染液中產(chǎn)生吸漲損傷。B組和D組比較，室溫48 h的浸泡和浸濕處理，0.5% TTC染色，草果種子生活力平均數(shù)量差異比1.0% TTC染色的差異大，反映出草果種子吸漲損傷差異大，1.0% TTC染色這種差異減少。同時(shí)提示0.5% TTC染色比1.0% TTC染色更能準(zhǔn)確的反映草果種子生活力的細(xì)微變化。2.6 浸濕處理浸濕處理能在一定程度上避免吸漲損傷，H組和G組比較，低溫時(shí)浸濕時(shí)間延長，有生活力種子平均數(shù)量下降;D組和C組比較，室溫浸濕時(shí)間延長，有生活力種

18、子平均數(shù)量上升;H組合C組比較，處理24 h，4 浸濕有生活力種子平均數(shù)量高于室溫浸濕的數(shù)量;D組和G組比較，處理48 h，4 浸濕的有生活力種子平均數(shù)量低于室溫浸濕的數(shù)量;說明在一定的時(shí)間范圍內(nèi)，低溫浸濕比室溫浸濕更能有效避免吸漲損傷，低溫浸濕的時(shí)間延長，有生活力種子平均數(shù)量下降，可能是低溫處理使草果種子呼吸作用減弱，生活力也隨之降低。提示草果種子對低溫的反應(yīng)比較敏感，長期低溫可能損傷種子，降低種子生活力，在種子的萌發(fā)、保存和運(yùn)輸過程中應(yīng)該避免低溫帶來的影響。草果種子直接浸濕，比較H組、D組、G組、C組的試驗(yàn)結(jié)果，4浸濕24 h，草果種子有生活力平均種子數(shù)最高，室溫浸濕24 h，有生活力種子

19、平均數(shù)量最低。室溫浸濕48 h，有生活力種子平均數(shù)量高于室溫浸濕24 h，甚至高于4 浸濕48 h;說明室溫下緩慢濕潤，種子易吸收外部水分，有效避免吸漲損傷。E、F組和其他組比較，表明短時(shí)間的浸泡后，再作浸濕處理，種子能更有效的避免吸漲損傷。E組和F組比較，48 h，25 浸濕比4 浸濕有生活力種子平均數(shù)量更大。低溫緩慢濕潤法是避免吸漲損傷的一種合理方法10，對于草果種子而言，長時(shí)間(48 h)低溫可能對種子造成傷害。草果種子堅(jiān)硬的種皮外還包裹緊密的假種皮，采用室溫浸泡4 h后，25 恒溫箱內(nèi)浸濕48 h的處理，更能有效避免吸漲損傷，對草果種子生活力的影響最小(表1)。3 結(jié)論采用TTC(四唑

20、)法測定草果種子生活力，應(yīng)該避免吸漲損傷對測量結(jié)果的影響。在實(shí)際測量中草果種子對0.5%TTC染色反應(yīng)比1.0%TTC敏感，染色時(shí)間達(dá)到48 h時(shí)，有生活力種子數(shù)量均達(dá)到最高值。通過本研究，建立了草國種子生活力測定的方法：種子在室溫(2125 )下浸泡4 h，25 恒溫浸濕48 h的處理后，用0.5%TTC染色48 h，統(tǒng)計(jì)分析草果種子生活力，為種子保存、種苗生產(chǎn)提供依據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 中國植物志編委會. 中國植物志 (第16卷第2分冊)M.北京：科學(xué)出版社，1981.2 中國科學(xué)院昆明植物研究所. 云南植物志(第8卷)M.北京：科學(xué)出版社，1997.3 丁艷霞，崔秀明，戴 云

21、.草果的研究進(jìn)展J.特產(chǎn)農(nóng)業(yè)，2005,4：60.4 國家中醫(yī)藥管理局中華本草委員會. 中華本草M.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999.5 胡文多,趙曙國, 郭成亮,等. 進(jìn)境糧谷中截獲的檢疫性雜草種子生活力測定J.檢驗(yàn)檢疫科學(xué)，2008,2:19.6 沈宇峰，王志安，俞旭平,等. 白術(shù)種子生活力測定方法及其與發(fā)芽率的相關(guān)性研究J.中國中藥雜志，2008,33(3):248.7 彭國平，向 華，陳章源,等. 中藥白鮮種子生活力測定及發(fā)芽條件的初步研究J.湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2O07，4：78.8 李淑君，劉書燕.羊柴種子生活力測定方法的研究J.內(nèi)蒙古草業(yè)，1995,2:51.9 張存信.棉花種子生活

22、力測定技術(shù)J.農(nóng)村實(shí)用工程技術(shù)：溫室園藝 ，1996,5:20.10 鄭智禮，任兆光，周長東，等.吸漲損傷對綠蒙古錦雞兒種子生活力測定的影響J.山西林業(yè)科技，1998,4:40.     11-04-23 16:28:00     編輯：studa20A組、B組、G組用0.5% TTC染色，有生活力種子數(shù)量均低于1.0% TTC染色的數(shù)量。0.5% TTC染色48 h有生活力種子平均數(shù)從高到低依次是E組、F組、H組、D組、G組、C組、A組、B組;1.0% TTC染色48 h有生活力種子平均數(shù)從高到低依次是E組、F組

23、、G組、H組、A組、D組、B組、C組。這種差異的產(chǎn)生可能是由于部分發(fā)生吸漲損傷的種子仍有微弱的呼吸作用，會被高濃度(1.0%)TTC染成紅色，表現(xiàn)為有生活力的種子，而不容易被低濃度的(0.5%)TTC染成紅色，表現(xiàn)為無生活力或生活力弱的種子，導(dǎo)致生活力測定的誤差。部分種子處理時(shí)間不夠，染色時(shí)浸泡在染液中仍然吸水較為猛烈，也產(chǎn)生吸漲損傷，種子仍有微弱的呼吸作用，會被高濃度(1.0%)TTC染成紅色，表現(xiàn)為有生活力的種子，導(dǎo)致生活力測定的誤差。A組和C組比較，室溫24 h的浸泡和浸濕處理，0.5% TTC染色時(shí)，草果種子生活力平均數(shù)量的差異反映出種子存在的吸漲損傷，1.0% TTC染色，則不能從種

24、子生活力平均數(shù)量的差異上反映出種子存在的吸漲損傷;C組和D組比較，都是由于C組浸濕處理時(shí)間不夠，浸泡在染液中產(chǎn)生吸漲損傷。B組和D組比較，室溫48 h的浸泡和浸濕處理，0.5% TTC染色，草果種子生活力平均數(shù)量差異比1.0% TTC染色的差異大，反映出草果種子吸漲損傷差異大，1.0% TTC染色這種差異減少。同時(shí)提示0.5% TTC染色比1.0% TTC染色更能準(zhǔn)確的反映草果種子生活力的細(xì)微變化。2.6 浸濕處理浸濕處理能在一定程度上避免吸漲損傷，H組和G組比較，低溫時(shí)浸濕時(shí)間延長，有生活力種子平均數(shù)量下降;D組和C組比較，室溫浸濕時(shí)間延長，有生活力種子平均數(shù)量上升;H組合C組比較，處理24

25、 h，4 浸濕有生活力種子平均數(shù)量高于室溫浸濕的數(shù)量;D組和G組比較，處理48 h，4 浸濕的有生活力種子平均數(shù)量低于室溫浸濕的數(shù)量;說明在一定的時(shí)間范圍內(nèi)，低溫浸濕比室溫浸濕更能有效避免吸漲損傷，低溫浸濕的時(shí)間延長，有生活力種子平均數(shù)量下降，可能是低溫處理使草果種子呼吸作用減弱，生活力也隨之降低。提示草果種子對低溫的反應(yīng)比較敏感，長期低溫可能損傷種子，降低種子生活力，在種子的萌發(fā)、保存和運(yùn)輸過程中應(yīng)該避免低溫帶來的影響。草果種子直接浸濕，比較H組、D組、G組、C組的試驗(yàn)結(jié)果，4浸濕24 h，草果種子有生活力平均種子數(shù)最高，室溫浸濕24 h，有生活力種子平均數(shù)量最低。室溫浸濕48 h，有生活力種子平均數(shù)量高于室溫浸濕24 h，甚至高于4 浸濕48 h;說明室溫下緩慢濕潤，種子易吸收外部水分，有效避免吸漲損傷。E、F組和其他組比較，表明短時(shí)間的浸泡后，再作浸濕處理，種子能更有效的避免吸漲損傷。E組和F組比較，48 h，25 浸濕比4 浸