ICH分析方法驗證

1、Q2（R1）Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology分析方法驗證：文本及方法學Step 52005/11/1PART I:分析方法驗證文件1994年10月27日的ICH策劃委員會會議已經(jīng)進入了ICH進程白勺第4階段，此指導原則推薦給ICH三個監(jiān)管部門采納1 .介紹作為遞交給歐共體，日本和美國新藥注冊申請資料的一部分，對分析方法驗證需考慮 事項的特征的討論在此文件呈現(xiàn)出來。沒有必要在此文件尋找覆蓋在世界其他地區(qū)的藥品 的注冊或出口所要求的測試。此外，此文作為術(shù)語的收集，和他們的定義而服務(wù)的，并沒 有想提供怎樣完成驗證的指示

2、。這些項目和定義是連接那些常存在于歐共體，日本和美國 的各種藥典和規(guī)定之間的差異的橋梁。分析方法驗證的目的是為了闡述分析方法是適用于它要分析的目的的。應(yīng)用于鑒別， 雜質(zhì)控制和含量測定方法的特征項的綜合，可能考慮會加入到今后的文件中。2 .所要驗證的分析方法的類型分析方法驗證的討論通常集中在以下分析方法的四個最通用的方面：?鑒別試驗；?雜質(zhì)含量的定量測試；?雜質(zhì)控制的限度測試；?原料藥或制劑或其他藥品中選擇性的組分的樣品的活性部分的定量測試；雖然有許多其他的分析方法，諸如藥品的溶解性試驗或藥品微粒大小測試，在分析方 法驗證最初的正文中并未給出。那些額外的分析方法的驗證和在這里列出來的分析方法同

3、樣重要，且有可能在后來的文件中提出。對于此文件中考慮到的測試的類型的簡短描述如下：?鑒別試驗是為了鑒定樣品中某個分析物存在。通常將適當?shù)臉悠放c參考標準品進行比較（例如，光譜，色譜行為，化學反應(yīng)等）。?雜質(zhì)測試是對樣品中的雜質(zhì)進行定性或定量試驗。這兩種試驗都是為了準確的反應(yīng)樣品中雜質(zhì)的特性。與限度試驗相比，定量試驗要求不同的驗證試驗項。?含量測試方法是為了測定給定樣品中的被測物的量。此文件的內(nèi)容中，含量測試代表原料藥中的主成分的定量的測試。對于藥物制劑中的活性組分或其他選擇性組分進行含 量測定時，相似的驗證特征也同樣應(yīng)用。同樣的驗證特征也可以應(yīng)用到與其他分析方法相 關(guān)聯(lián)的含量測試中（如，溶解）。

4、分析方法的目的應(yīng)該清晰易懂，因為它將制約需要被評價的驗證特征。應(yīng)考慮的典型 的驗證特征如下：?準確度?精密度-重復性-中間精密度?特異性?檢測限?定量限?線形?范圍每一個驗證特征在附屬的術(shù)語中有定義。此表列出了那些驗證特征，它們被認為是分 析方法不同類型驗證的最重要的部分。此外，以下情況可能有必要重新驗證。?原料藥合成路線變更；?成品組分變更?分析方法變更要求重新驗證的程度取決于變更的性質(zhì)。某些其他變更可能也要重新驗證。TABLE分析方法的類型鑒別試驗雜質(zhì)測試含量測試-溶解度(只是測量)-含量/效力特征士旦 加,甲一限度準確度一十一十精密度重復性 中間精密度一一十+一 一十+特異性(2)十+十

5、+檢測限一-(3)十一定量限一+一一線性一+一十范圍一+一+-表示此項特征通常不用評價十表示此項特征通常要評價(1)如果重復性(見術(shù)語表)已經(jīng)履行，中間精密度不做要求(2) 一個分析方法特異性缺乏，可以通過其他支持性的分析方法補充(3)某些情況下可能需要術(shù)語1 .分析方法分析方法是指分析測試進行的方式。它應(yīng)該詳細地描述執(zhí)行每個分析試驗的必要的步 驟?？赡馨ǖ幌抻冢簶悠?，參考標準品和試劑制備，適用的儀器，標準曲線的產(chǎn)生， 采用的計算公式，等等。2 .特異性（專屬性）特異性是指清晰地評價組分中認為可能存在的被測物的能力。典型的包括：雜質(zhì)，降 解產(chǎn)物，輔料等。一個單獨的分析方法的專屬性缺乏，可以

6、通過其他可支持的分析方法來補充。此定義有以下含義：鑒別：確保某個分析物的身分。純度測試：確保所執(zhí)行的所有分析方法對被測物的雜質(zhì)的含量有一個準確的陳述， 如，有關(guān)物質(zhì)測試，重金屬，殘留溶劑，等。含量測試（含量或效力）：提供準確的結(jié)果，對樣品中被測物的含量或效力有準確的 陳述。3 .準確度分析方法的準確度表達了可接受值，包括常規(guī)真值或可接受的參考值，與測得值之間 的一致性的接近程度。4 .精密度分析方法的精密度表達了，在給定條件下，獲得的一系列的同一均勻樣品的多次取樣 的測量值之間的一致性的接近程度（分散度）。精密度可以從三個水平考慮：重復性，中 間精密度。重現(xiàn)性。精密度應(yīng)該用同一均勻，權(quán)威樣品進

7、行考察。然而，如果不能獲得同一均勻樣品，可 以用人工制備樣品或樣品溶液進行考察。分析方法的精密度常用一系列測量值的變異，標準偏差，或變異系數(shù)來表達。4.1 .重復性重復性表示在短期時間間隔內(nèi)，同樣操作條件下的精密度。重復性也叫批內(nèi)分析精密 度。4.2 .中間精密度中間精密度表示在同一試驗室下的變異：不同天，不同試驗者，不同儀器，等。4.3 .重現(xiàn)性重現(xiàn)性表示試驗室之間的精密度（合作性研究，通常用于分析方法學的標準化）。5 .檢測限一個分析方法的檢測限是樣品中分析物能被檢測到但是沒必要作為精確值定量的最小 量。6 .定量限一個分析方法的定量限是樣品中分析物能夠定量測定，具有合適的精密度和準確度的

8、 最低量。定量限是樣品基質(zhì)中最低含量的化合物的定量分析的一個參數(shù)，特別用于測定雜 質(zhì)和/或降解產(chǎn)物。7 .線性分析方法的線性是獲得的測試結(jié)果與樣品中被測物的濃度成直接比例的能力。8 .范圍分析方法的范圍是樣品中被測物的最高濃度和最低濃度之間的間隔（包括最高和最低 濃度），在此區(qū)間內(nèi)，已經(jīng)證明分析方法有合適的精密度，準確度和線性。9 .耐用性分析方法的耐用性是，在故意對分析方法的參數(shù)進行微小變化后，方法仍然能保持不 受影響的能力的一種測試，并且提供在正常范圍內(nèi)使用的可靠性說明。第II部分：分析方法的驗證方法學介紹最初文件給出了分析方法驗證中應(yīng)該考慮到的特征的討論，此文件是最初文件的補 充。它的目

9、的是，在關(guān)于怎樣考慮每個分析方法的各種驗證特征方面，提供同樣的指導和 薦意。一些情況下，（例如，特異性的證明），為了確保原料藥或制劑的質(zhì)量，可以考察 多個分析方法結(jié)合的全面的能力。此外，文件給出了在注冊申請中要呈報的數(shù)據(jù)指示。所有在驗證收集的相關(guān)的數(shù)據(jù)和用于計算的公式應(yīng)該總結(jié)和做適當?shù)挠懻?。此指導原則中前面的那些方法以外的方法，也是可以應(yīng)用或可以接受的。選擇最適合 于申請者的驗證方法和草案，這是申請者的職責。由于性質(zhì)復雜，生物和生物技術(shù)產(chǎn)品的 分析方法在某些情況下可以和此文件中的方法不同。在驗證研究過程的始終，應(yīng)該采用有備有文件的純度，性能好的參考物質(zhì)。必須達到 的純度取決于應(yīng)用的要求。根據(jù)最

10、初文件，為了更清楚，此文件在不同的部分考慮到各種驗證的特征。這些部分 的安排反應(yīng)了分析方法發(fā)展和評價的過程。實際上，設(shè)計實驗工作通常是可能的，這樣能同時考慮到適當?shù)尿炞C特性，來提供對 分析方法的能力的徹底的完整地認識，例如：特異性，線性，范圍，準確度和精密度。1 .特異性特異性研究應(yīng)該在鑒別試驗，雜質(zhì)鑒別試驗和含量分析中進行。用于證明特異性的方 法取決于分析方法的分析目標。常常不太可能證明一個分析方法對于特定的分析物（完全區(qū)別）是專屬的。在這種情況 下，建議結(jié)合使用兩個或多個分析方法來達到區(qū)別的必要水平。1.1 鑒另I適當?shù)蔫b別試驗應(yīng)該能區(qū)別可能存在的結(jié)構(gòu)相似的化合物。一個方法的區(qū)別可以通過

11、獲得含被測物樣品的肯定的結(jié)果（可以通過與已知參考物質(zhì)比較），和不含被測無樣品的 否定的結(jié)果來證實。此外，鑒別試驗可以運用到與被測物結(jié)構(gòu)相似的或相關(guān)的物質(zhì)中來證 明不能得到正反應(yīng)。這類潛在的干擾物質(zhì)的選擇應(yīng)該依據(jù)徹底的科學的判斷，全面地考慮 可能產(chǎn)生的干擾物。1.2 含量測試和雜質(zhì)測試對于色譜方法，代表性的色譜圖應(yīng)該用于證明專屬性，且各個單獨化合物應(yīng)該適當?shù)?標記。相似的考慮應(yīng)該用于其他分析技術(shù)。色譜中臨界性的分離應(yīng)該進行適當程度地調(diào)查。臨界性分離能夠通過洗脫出來最接近 的兩個化合物的分離度來證明。在沒有使用明確的含量分析的情況下，其他支持的分析方法應(yīng)該用來證明全面的特異 性。例如，采用滴定法測

12、定原料藥釋放度的含量時，含量測定和適當?shù)碾s質(zhì)試驗可以結(jié)合 使用。含量分析和雜質(zhì)測定的方法的方法是類似的：1.2.1 雜質(zhì)是可以得到的對于含量分析，需要證明在雜質(zhì)和輔料存在的情況下區(qū)別出被測物；實際操作中，可 以將一定量的雜質(zhì)和/或輔料加入到純物質(zhì)（原料藥或制劑）中，證明含量分析結(jié)果在這些 物質(zhì)的存在下不受影響（通過比較不含加入物質(zhì)的樣品）。對于雜質(zhì)測定，此項證明用在原料藥或制劑中加入一定量的雜質(zhì)，證明單獨分離Validation of Analytical Procedures: Text這些雜質(zhì)和/或?qū)⑵渑c同樣樣品基質(zhì)中的其他組分的分離開來進行。1.2.2 雜質(zhì)不可以得到如果雜質(zhì)或降解產(chǎn)物標

13、準品不可以獲得，特異性可以通過比較包含雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的 樣品的測試結(jié)果和另一個性能良好的分析方法，例如：藥典方法或其他有效的分析方法（單獨的方法）。適當?shù)?，?yīng)該包括在相對激烈條件下：光，熱，濕度，酸/堿，氧化和還原。?對于含量分析，應(yīng)該比較這兩個結(jié)果；?對于雜質(zhì)測定，應(yīng)該比較雜質(zhì)的圖形。峰純度測試可能對于表明被測物色譜峰不是多于一個組分的峰歸屬（例如，二級管陣 列DAD質(zhì)譜）很有用。2,線性應(yīng)該在分析方法的范圍（見第 3部分）內(nèi)評價線性關(guān)系?？梢杂弥付ǖ姆椒ǎ苯幼C 明原料藥（通過標準溶液的稀釋液）的線性和/或制劑組分的合成混合物的分別的權(quán)重來證明其線性。線性應(yīng)該通過被測物濃度或含量的信號圖作

14、出可視檢測圖來評價。如果有線性關(guān)系， 測試結(jié)果應(yīng)該通過合適的統(tǒng)計方法來評價，例如，用最小二乘法的一級回歸線來計算。在 某些情況下，為了得到含量測試結(jié)果和樣品濃度之間的線性，測試數(shù)據(jù)可能需要在回歸分 析之前經(jīng)過數(shù)學轉(zhuǎn)換。線性回歸得到的數(shù)據(jù)本身可能有助于提供線性程度的數(shù)學評價。應(yīng)該給出相關(guān)系數(shù)，y-截距，線性回歸的斜率和剩余平方和。包括給出數(shù)據(jù)圖。此 外，從線性回歸得到的實際數(shù)據(jù)點的偏差分析對于評價線性也非常有用。一些分析方法，例如免疫分析，在任何轉(zhuǎn)換后沒有進行線性。這種情況下，分析相應(yīng) 應(yīng)該通過樣品中被測無的濃度的合適的功能給與描述。對于建立線性，最少要求5個濃度點。其他方法應(yīng)該適當調(diào)整。3 .

15、范圍特定的范圍通常來源于線性研究并且取決于分析方法預定的應(yīng)用。通過證實分析方法 提供的線性，準確度和精密度的可接受度建立范圍，測定的線性，準確度和精密度時，所 用到的樣品中含被測物的量應(yīng)在分析方法指定的范圍內(nèi)或是在范圍的極值。應(yīng)該烤爐到以下最小指定范圍：?對于原料藥或是成品（藥物）制劑的含量分析：通常是測試濃度的 80120%?對于含量均一度測試，覆蓋測試濃度的最小范圍是70130%除非一個更寬的更合適的范圍，根據(jù)劑型的性質(zhì)（例如，壓入型吸入劑），可以作出適當?shù)恼{(diào)整。?對于溶解度測試：在指定范圍的 +1-20 %;例如，如果控釋制劑的規(guī)格覆蓋的范圍是從1小時后的20%IJ24小時的90%標簽聲

16、明的有效范圍應(yīng)該為1-110%。?對于雜質(zhì)測定：從雜質(zhì)的報告水平到規(guī)格的120%?對于有效的或是產(chǎn)生毒性或非預期的藥效的已知雜質(zhì)，檢測/定量限應(yīng)該與雜質(zhì)應(yīng)該控制的水平相當。注：在研發(fā)期間執(zhí)行的雜質(zhì)測試方法的驗證，可能有必要考慮到可能的限度的范圍。?如果含量和純度測試作為一個試驗進行，且只有用到一個100%勺標準品，線性應(yīng)該覆蓋從雜質(zhì)報道的水平到含量分析規(guī)格的120%4 .準確度應(yīng)該在分析方法指定范圍內(nèi)建立準確度。4.1 .含量分析4.1.1 原料藥測定準確度有幾種方法可以用：a）分析方法應(yīng)用到已知純度的被測物中（例如，參考物質(zhì)）；b）將預定的分析方法與的結(jié)果與另一個良好性能的方法的結(jié)果比較，得

17、到的準確度進行統(tǒng)計和/或定義（單獨方法，見 1.2 ）;c）可以從已經(jīng)建立的精密度，線性和特異性中推斷準確度4.1.2 藥物制劑可以采用的集中測定準確度的方法：a）按用于分析的已知藥物制劑的量來藥物制劑的各個組分進行混合，得到的樣品采用 分析方法進行分析。b）在不能獲得藥物制劑的所有組分的情況下，或者向藥物制劑中加入已知量的被測 物，或者與另一個良好性能的方法所得到的結(jié)果進行比較，都是可以接受的，此法的準確 度要進行統(tǒng)計和/或定義（單獨方法，見 1.2）;c）可以從已經(jīng)建立的精密度，線性和特異性項中推導準確度。4.2 .雜質(zhì)（定量）應(yīng)該用已知量的雜質(zhì)加入到樣品中（原料藥/制齊J）來評價準確度。

18、在不能獲得某種雜質(zhì)和/或降解產(chǎn)物的樣品的情況下，可以考慮將用單獨方法獲得的結(jié) 果進行比較（見1.2）。能采用原料藥的響應(yīng)因子。應(yīng)該明確單雜或總雜是怎樣測定的，例如重量/重量或面積百分比，所有情況都與主要被測物相關(guān)。4.3 推薦數(shù)據(jù)準確度的評價需采用指定范圍內(nèi)的最少9個測定點，最少3個濃度水平（例如，用總分析方法測定3個濃度/每個濃度3個重復樣品）準確度應(yīng)該進行報道作為測定樣品中被測物的已知加入量百分比回收率，或作為平均 值與可接受真值的差異和置性區(qū)間。5 .精密度含量測定和雜質(zhì)的定量測定實驗驗證包括精密度研究。5.1 .重復性重復性的評價用到：a）最少9個測試指覆蓋分析方法的指定范圍（例如，3

19、個濃度/每個濃度3個重復樣品）或者b）最少6個測定值，濃度在100%勺測定濃度5.2 .中間精密度應(yīng)該建立的中間精密度的程度取決于方法所要應(yīng)用的環(huán)境。申請者應(yīng)該建立分析方法 的精密度上的任意事件的影響。要研究的典型變異包括不同分析天，分析者，儀器，等。 沒有必要單獨考慮這些因素。提倡使用實驗設(shè)計（矩陣）。5.3 .重現(xiàn)性重現(xiàn)性是通過內(nèi)部實驗室實驗的方式來評價的。重現(xiàn)性應(yīng)該考慮在分析方法標準化的 情況下，例如，包含藥典中的分析方法。這些數(shù)據(jù)不是市場授權(quán)檔案的一部分。5.4 .推薦數(shù)據(jù)應(yīng)該給出所考察的每種的精密度的標準偏差，相對標準偏差（變異系數(shù)）和置信區(qū) 間。6 .檢測限測定檢測限的幾種方法都是

20、可以的，取決于方法是一個非儀器方法還是儀器方法。除 了那些列表中的方法外的方法是也可能是可接受的6.1 .根據(jù)目測評價目測不僅可以用于非儀器方法也可以用于儀器方法。檢測限的測定是通過分析含已知濃度的被測物樣品且建立可以檢測的被測物的最低的 濃度水平。此方法只能用于表現(xiàn)出基線噪音的分析方法。信噪比的測定，是通過比較測得的已知低濃度的樣品信號和空白樣品的信號，建立能 夠監(jiān)測的被測物的最低濃度所得到的。信噪比在3或2: 1之間通常被認為可接受的作為檢測限的評價。6.3 根據(jù)響應(yīng)和斜率的標準偏差檢測PM ( DL)可以表達成：DL = 3.3 /S此處(T =響應(yīng)的標準偏差S =標準曲線的斜率斜率S可

21、以從被測物標準曲線中計算出來。s的計算可以用各種方法，例如：6.3.1 根據(jù)空白的標準偏差大量的分析的背景響應(yīng)得測定是通過分析一定量的空白樣品并計算這些響應(yīng)的標準偏 差來執(zhí)行的。6.3.2 根據(jù)標準曲線應(yīng)該用在含被測物濃度在檢測限范圍內(nèi)的樣品研究特定的標準曲線?；貧w線的剩余標 準偏差或回歸線y-截距的標準偏差可以作為標準偏差使用。6.4 推薦數(shù)據(jù)應(yīng)該給出檢測限和用于測定檢測限的方法。如果DL是根據(jù)目測或根據(jù)信噪比來測定的，相關(guān)的色譜的呈報應(yīng)該認為其合理性是可接受的。在檢測限的估計值通過計算或推算得到的情況下，此推論可能隨后要通過獨立的分析 適量的接近或在檢測限濃度的樣品來驗證。7 .定量限幾種測定定量限的方法都是可以的，取決于方法是非儀器還是儀器方法。除了下面那 些列舉的方法外的方法都是可以接受的。7.1 .根據(jù)目測目測不僅可以用于非儀器方法也可以用于儀器方法。定量限的測定是通過分析含已知濃度的被測物樣品且建立可以定量測定的被測物的最 低的濃度水平。7.2 .根據(jù)信噪比此方法只能用于表現(xiàn)出基線噪音的分析方法。信噪比的測定，是通過比較測得的已知低濃度的樣品信號和空白樣品的信號，建立能 夠監(jiān)測的被測物的最低濃度所得到的。信噪比在10： 1之間通常被認為作