AKTA-explorer-標(biāo)準(zhǔn)操作及維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程

1、文件編號(hào)： AKTA explorer 標(biāo)準(zhǔn)操作及維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程編制審核批準(zhǔn)發(fā)布日期： 2017 年 月 日1 目的闡明和規(guī)范運(yùn)用AKTAexplorer蛋白純化系統(tǒng)。2 范圍本操作規(guī)程適用于AKTAexplorer蛋白純化系統(tǒng)的操作使用及維護(hù)保養(yǎng)。3 職責(zé) 儀器操作人員負(fù)責(zé)儀器的正確使用，清潔及基本維護(hù)。儀器負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)監(jiān)督和培訓(xùn)其他人員對(duì)儀器的正確使用，同時(shí)儀器負(fù)責(zé)人對(duì)儀器進(jìn)行定期維護(hù)和保養(yǎng)。4 引用 4.1 AKTA_Purifier操作手冊(cè) 4.2 AKTA_explorer 英文操作手冊(cè)5 內(nèi)容第 4 頁(yè) 共 4 頁(yè)5.1 準(zhǔn)備工作 5.1.1 將預(yù)先配置好的緩沖液，用0.45微米濾膜過

2、濾，然后進(jìn)行超聲脫氣。 5.1.2 將待分離樣品用0.45微米濾膜進(jìn)行過濾。 5.1.3 將對(duì)應(yīng)的管路放入對(duì)應(yīng)的緩沖液。 5.2 啟動(dòng)層析系統(tǒng) 5.2.1 連接好電源打開AKTAexplorer蛋白純化系統(tǒng)電源，打開電腦點(diǎn)擊操作軟件。 5. 2.2 排出緩沖液管路氣泡檢查進(jìn)液管路有無氣泡，少量氣泡可進(jìn)行泵洗排氣，首先將管路濾頭放入超純水中，點(diǎn)擊操作軟件“system control”中“manual”操作菜單，然后在“pump”中點(diǎn)擊“pump wash explorer”同時(shí)選擇待要排氣的管路，選擇完成點(diǎn)擊“execute”，泵洗結(jié)束點(diǎn)擊“end”。當(dāng)管路中氣泡仍未排除時(shí)，“manual”操

3、作菜單中點(diǎn)擊“flowpath”選擇未排盡氣泡管路，點(diǎn)擊“execute”，用注射器在對(duì)應(yīng)的泵頭上方閥門處抽出氣泡，點(diǎn)擊“end”。 5. 2.3 排除樣品泵管路氣泡將進(jìn)樣管路放進(jìn)超純水中，“manual”操作菜單中點(diǎn)擊“sample flow”設(shè)定流速10-20mL/min，“flowpath”中選擇管路，“Alarms”設(shè)定樣品泵壓力0.3MPa，點(diǎn)擊“execute”排氣結(jié)束后點(diǎn)擊“end”。當(dāng)管路中氣泡仍未排除時(shí)，用注射器連接在injection valve V1的2號(hào)位抽氣?！癲irect load”設(shè)定流速樣品才過柱子，在“sample flow”改變流速樣品不過柱子。 5.2.4

4、 管路液體置換 將使用的管路放進(jìn)純化水中，“manual”操作菜單，然后在“pump”中點(diǎn)擊“pump wash explorer” 同時(shí)選擇管路，選擇完成點(diǎn)擊“execute”，泵洗結(jié)束點(diǎn)擊“end”。將管路放到對(duì)應(yīng)的緩 沖液中，置換成相應(yīng)的緩沖液。5.2.5 連接層析柱連接層析柱若是預(yù)裝填柱，預(yù)先設(shè)定一個(gè)小的流速1-5mL/min，“pump alarm”設(shè)定0.3MPa，先接上面不要太緊，再接柱子下端，擰緊柱子接頭檢查是否漏液 5.3 手動(dòng)操作純化樣品 5.3.1 平衡層析柱 通常用上樣緩沖液平衡5個(gè)柱體積，Manual操作菜單中“pump”設(shè)定流速，“flowpath”設(shè)定柱位、緩沖液

5、進(jìn)口、緩沖液流向、廢液出口F1，“alarm”設(shè)定檢測(cè)波長(zhǎng)、泵壓，選擇完成點(diǎn)擊“execute”，平衡結(jié)束點(diǎn)擊“end”。5.3.2 上樣 樣品環(huán)上樣上樣量較少時(shí)選擇樣品環(huán)上樣，樣品環(huán)接到injection valve V1的2號(hào)位和6號(hào)位，注射器抽取上樣緩沖液沖洗上樣環(huán)，沖洗緩沖液從3號(hào)位注入，注射器將樣品由3號(hào)位注入，Manual操作菜單中“flowpath”“Inject valve”選定“inject”，設(shè)置好其他參數(shù)，選擇完成點(diǎn)擊“execute” 上樣結(jié)束點(diǎn)擊“end”。 樣品泵上樣 上樣量較大時(shí)選擇樣品泵上樣，Manual操作菜單中“derict load”設(shè)定上樣流速、上樣量大

6、小，“alarm”設(shè)定樣品泵泵壓，“flowpath”選定進(jìn)樣管路、柱位、流向、廢液出口，選擇完成點(diǎn)擊“execute”，上樣結(jié)束點(diǎn)擊“end”。 5.3.3 方法洗脫及樣品收集 5.3.3.1 沖洗未結(jié)合樣品 用起始緩沖液沖洗未結(jié)合到層析柱上的樣品，同時(shí)將未結(jié)合樣品收集以備最后結(jié)果分析。 5.3.2 樣品洗脫和收集 Manual操作菜單中設(shè)定好流速、柱位、流向、waste出口選擇F2(F2與收集器相連)、緩沖液進(jìn)口、系統(tǒng)泵壓力（通常0.3MPa）、檢測(cè)波長(zhǎng)。在“pump”中設(shè)定“gradient target B 100%”的各項(xiàng)參數(shù)?！癋rc”中設(shè)定收集器參數(shù)，“Man fraction”

7、選定“serpentine蛇形收集”“Frc size”設(shè)定沒管收集樣品量，選擇完成點(diǎn)擊“execute”。 5.4 編程操作 柱子平衡、上樣、洗脫、收集可采用編程操作，通過運(yùn)行程序來執(zhí)行各步驟實(shí)驗(yàn)操作。 Method Editor頁(yè)面點(diǎn)擊Method wizard，main selection中選擇填料類別，column中選擇柱子類型， column position中選擇柱位，點(diǎn)擊Next設(shè)置檢測(cè)波長(zhǎng)及緩沖液進(jìn)口，點(diǎn)擊Next設(shè)置Equilibration參數(shù)，點(diǎn)擊Next設(shè)置sample injection 參數(shù)通常選擇（Manual/Sample direct loading），點(diǎn)擊N

8、ext設(shè)置設(shè)置平衡過程中收集器收集流穿樣品參數(shù)，點(diǎn)擊Next設(shè)置收集器收集洗脫樣品參數(shù)，點(diǎn)擊Next設(shè)置洗脫參數(shù)。變成完畢運(yùn)行方法進(jìn)行洗脫。具體參照：AKTA explorer 方法編輯標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程6 維護(hù)保養(yǎng)6.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，應(yīng)先用水置換出所有管路的緩沖液，再用20%乙醇置換出所有管路的水。 應(yīng)盡可能避免保存在裝載緩沖液狀態(tài)過夜。尤以高鹽濃度洗脫緩沖液為甚，假如不能避 免應(yīng)于次日盡早用System Wash Method完成以蒸餾水將系統(tǒng)徹底清洗，才予以保存或再 更新使用其它緩沖液再次投入使用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。 6.2 任何時(shí)間當(dāng)不使用系統(tǒng)時(shí)，不要將pH電極留在流動(dòng)池里。電極可作以下處理：從流

9、動(dòng)池 卸下pH電極。先以蒸餾水沖洗一遍，輕拭水份后，使其末端以其合適溶液泡浸保存。 6.3 若長(zhǎng)時(shí)間不使用系統(tǒng)，除用蒸餾水徹底清洗系統(tǒng)外。取下柱和pH電極通過細(xì)管道替 換柱，并安裝虛擬pH電極（如果使用）。然后用20%乙醇再?zèng)_洗所有使用的管件通道和 所有的流動(dòng)池一遍，然后并以此將系統(tǒng)保存。UV流動(dòng)池也可以如上所述地用蒸餾水沖 洗然后用20%乙醇通過流動(dòng)池。 6.4 每月定期保養(yǎng)處理或當(dāng)發(fā)現(xiàn)假峰等問題出現(xiàn)時(shí)，可拆下柱子將所有的緩沖液入口管件 置于0.5mol NaOH中，對(duì)所有的入口管件通路運(yùn)行System Wash Method，以流速為每分 鐘5毫升流速，將整個(gè)系統(tǒng)充分沖洗若60分鐘。然后立即用超純水，將整個(gè)系統(tǒng)運(yùn)行 System Wash Method加以沖洗20分鐘。 6.5 當(dāng)收集器托盤或收集用的管子發(fā)生變化時(shí)，應(yīng)及時(shí)調(diào)整運(yùn)行程序中的相應(yīng)參數(shù)，以免 造成跳管或收集體積錯(cuò)誤情況發(fā)生。6.6