保健食品中總黃酮的測定方法

1、作者簡介肖香蘭(1964-,女,主管檢驗(yàn)技師,主要從事理化檢驗(yàn)研究?！净瘜W(xué)測定方法】保健食品中總黃酮的測定方法肖香蘭,羅仁才,張楠(北京市疾病預(yù)防控制中心營養(yǎng)與食品衛(wèi)生所,北京100013摘要目的:建立以石油醚作為洗脫劑測定保健食品中總黃酮的方法。方法:樣品經(jīng)甲醇提取,用聚酰胺粉吸附,經(jīng)石油醚洗脫雜質(zhì)后,在波長360n m處,用分光光度法測定保健食品中總黃酮的含量。結(jié)果:采用石油醚作為洗脫劑,總黃酮濃度的含量在02010g/m l范圍內(nèi)與吸光度值呈良好的線性關(guān)系(r=019998,方法的檢出限為215g。測定樣品的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在4160%6149%之間,回收率在86167%101150%之間。

2、與用苯作為洗脫劑方法測定結(jié)果比較,兩者無顯著性差異。結(jié)論:該方法操作簡便,重現(xiàn)性及穩(wěn)定性好,線性范圍寬,特別是減少了苯對檢測人員和環(huán)境的污染,可用于保健食品中總黃酮的測定。關(guān)鍵詞保健食品;總黃酮;t檢驗(yàn)中圖分類號(hào)R15515文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)1004-8685(200706-1037-02D eter m i n a ti on of tot a l fl avono i ds i n hea lth foodX iao X iang2lan,L uo Ren2cai,Zhang N an(Beijing Center f or D isease Contr ol and Preventi

3、on,Beijing100013,ChinaAbstractO bjecti ve:To establish a method for deter m ining flavonoids in health food1M ethods:The t otal flavonoids in health f ood were deter m ined by s pectr ophot omet after the sa mp les were distilled by methanol and purified by petr oleu m ether1The detec2 ti on wavelen

4、gth was360n m1Results:Data bet w een the flavonoids content and abs orban had a better linear relati onshi p in the range of02010g/m l(r=0199981The deter m inati on li m its were215g1The relative standard deviati ons were bet w een 4160%6149%1The recoveries were in the range of86167%101150%1Purified

5、 by petr oleu m ether instead of benzene,the results had no obvi ous difference1Conclusi on:The method is si m p le,stable and accurate,and it has been app lied successfully t o deter m ine flavonoids in health food1Key wordsHealth f ood;Total flavonoids;t detecti on黃酮類化合物也稱類黃酮,是廣泛存在于植物界的一大類多酚化合物,多以

6、甙類形式存在,也有一類以游離形式存在。黃酮類化合物泛指兩個(gè)苯環(huán)通過中央三碳鏈相互連接而形成的一系列化合物,母體結(jié)構(gòu)為二苯基色酮。許多黃酮類化合物都有重要的生物活性,如抗氧化、抗腫瘤、保護(hù)心血管、抗突變等功能。類黃酮以其獨(dú)有的特性日益成為全世界研究的熱點(diǎn),在醫(yī)學(xué)、食品、保健食品等領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。目前保健食品中總黃酮的測定通常方法有硝酸鋁比色法和直接紫外測定法,在保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范中,采用的是直接紫外測定法,在測定中需以苯洗脫雜質(zhì),但是,苯的毒性很強(qiáng)且用量大,對環(huán)境極易造成污染,并對實(shí)驗(yàn)者造成傷害。因此本文用石油醚替代苯,實(shí)驗(yàn)結(jié)果滿意。1材料與方法111儀器與設(shè)備7220型分光光度計(jì),

7、恒溫水浴箱,25m l具塞比色管,濾紙,漏斗,分析天平(萬分之一。112試劑11211甲醇分析純。11212石油醚沸程3060。11213總黃酮(以蘆丁計(jì)標(biāo)準(zhǔn)溶液稱取蘆丁010100g,加甲醇溶解并定容至100m l,即得0110mg/m l。113測定方法11311標(biāo)準(zhǔn)曲線吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液:0100、0105、0110、0120、0140、110、1150、2100m l于10m l比色管中,加甲醇至刻度,搖勻,于波長360nm比色,求回歸方程,計(jì)算試樣中總黃酮含量。11312樣品處理。11313樣品測定稱取適量試樣,加乙醇定容至2510m l,搖勻,80水浴提取23h,放冷,重新定容,吸取

8、上清液110m l 于蒸發(fā)皿中,加聚酰胺粉吸附,于水浴上揮去乙醇,轉(zhuǎn)入層析柱,先用2010m l石油醚洗脫,然后用甲醇洗脫黃酮,定容至25m l。此液于波長360n m測定吸收值。2結(jié)果與討論211波長選擇黃酮類化合物是母體結(jié)構(gòu)為二苯基色酮的一類化合物的(下轉(zhuǎn)第1142頁 和小批量樣品的測定。其原理:樣品的BP O經(jīng)乙醚提取濃縮后,被KI還原成苯甲酸,在氣相色譜上分離測定,與標(biāo)準(zhǔn)品比較定量。氣相色譜儀附F I D檢測器,色譜柱為玻璃柱2m3 312mm內(nèi)裝6080目Chr om s orb WAW DMCS涂以5%+ 11%DEGS+磷酸。方法的檢出限為015mg/kg。方法的準(zhǔn)確度和精密度為

9、:過氧化苯甲酰濃度在0102012g/kg范圍內(nèi),回收率為8318%9410%,RSD為315%511%。線性范圍在每毫升含有過氧化苯甲酰20200g。3建議鑒于從1999年2002年6月,3年半時(shí)間內(nèi)各地及國家質(zhì)檢總局檢測BP O使用狀況,建議:(1禁止添加過氧化苯甲酰于面粉中,因?yàn)?106g/kg限量對面粉增白效果不理想。(2如不能禁止使用,則應(yīng)對小面粉加工廠采取嚴(yán)管措施,實(shí)施衛(wèi)生許可制度,對不具備有添加設(shè)備的小企業(yè)不允許向小麥中添加過氧化苯甲酰,對具有添加設(shè)備的企業(yè),要求有專人負(fù)責(zé),并增加對產(chǎn)品的檢測頻次,以確保添加量控制在國家標(biāo)準(zhǔn)限量之內(nèi)。(3建議企業(yè)使用過氧化苯甲酰替代品,如使用生物

10、酶與乳化劑結(jié)合而增白等。(4加強(qiáng)市場監(jiān)督管理力度。(5加大宣傳力度,暴光有問題的面粉,使老百姓在政府的指導(dǎo)下,選購合格面粉,將不合格面粉從市場淘汰出局。參考文獻(xiàn)1G B2760-19961食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)S12F AO/nyo食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)法典M1第1版1北京:中國輕工業(yè)出版社,1993118013郭萬春,陸守政1市售面粉中過氧化苯甲酰添加和殘留量的檢測與分析J1中國公共衛(wèi)生,1999,15(6:51914王燕1面粉中過氧化苯甲酰含量的檢測報(bào)告J1中國公共衛(wèi)生,2000,16(2:11215丁鴻簡,李林,楊其富1高效液相色譜測定面粉中面粉中過氧化苯甲酰J1中國公共衛(wèi)生,2001,17(11

11、:104716Official Methods of A ss ociati on of official Che m ists14th ED,AOAC,VA,1984;Sec14:03817王萌國1HP LC測定過氧化苯甲酰J1環(huán)境與健康雜志,1999,16(1:9818劉仁鳳,易小軍,祁世凱,等1面粉中過氧化苯甲酰含量檢測與分析J1中國公共衛(wèi)生,2001,17(增刊:1201(收稿日期:2007-02-05(上接第1037頁總稱,包括:黃酮、黃酮醇、脫氫黃酮、異黃酮和查耳酮等,這一類化合物有兩個(gè)紫外吸收區(qū),即240280n m和300 400n m,本方法測定的是在300400n m有吸收

12、的黃酮,某些在該波長無吸收的黃酮成分不包括在內(nèi),如異黃酮。212溶劑選擇包括甙和甙原形式的黃酮化合物都有較強(qiáng)的極性,易溶于甲醇、乙醇等溶劑。使用乙醇作為提取液在80水浴提取2h可提取完全。213準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)采用不同種類的樣品,進(jìn)行了高低兩濃度的加標(biāo)實(shí)驗(yàn),3種不同樣品高低兩濃度的平均回收率分別為:93160%、97147%和96176%,見表1。表1準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6樣品加標(biāo)量(mg測定結(jié)果(mg回收范圍(%平均回收率(%硬膠囊3216721712190216121642160861679810089183 6518751795192517251855190951339816797136軟膠囊

13、33111310231242198310731008916710016796172 6611261095198610261095193941510115098122茶葉32184219621973103217921858813310110095183 6518851945191518451775181961179913397169214精密度實(shí)驗(yàn)對不同種類的樣品,分別測定6次,其RSD分別為5127%、6149%、4160%,見表2。215線性范圍在本實(shí)驗(yàn)條件下,黃酮濃度在020g/m l的范圍內(nèi),線性關(guān)系良好,r=019998。表2精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6樣品測定結(jié)果(mg/g平均結(jié)果(mg/

14、gsRSD(%硬膠囊91429140813371898186811981680146885127軟膠囊11118136141291513014125191261312617812276149茶葉181721121914201320181918201030192234160216與保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范所載方法的比較采用5種不同的樣品,分別用保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范所載方法和本法進(jìn)行測定,結(jié)果表明,兩種測定方法測定結(jié)果無顯著性差異,見表3。表3兩種測定方法的t檢驗(yàn)結(jié)果均無顯著性差異樣品規(guī)范方法測定結(jié)果(mg/g本方法測定結(jié)果(mg/gt 硬膠囊9126912391379155913491149142914081337189811981862111軟膠囊1101895149217961591181261312614109151101412519941498101109茶葉181618121917211219141915181721122013191419182