番石榴葉總黃酮提取工藝研究

1、番石榴葉總黃酮提取工藝研究        【摘要】     目的為充分利用番石榴葉資源，優(yōu)選番石榴葉總黃酮的最佳提取工藝。方法以總黃酮含量為考察指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)的方法研究提取番石榴葉總黃酮的工藝條件。結(jié)果影響番石榴葉總黃酮提取效果的主次因素為：乙醇濃度>回流時(shí)間>提取次數(shù)>溶劑用量。結(jié)論番石榴葉總黃酮最佳提取工藝為10倍量70%乙醇加熱回流提取兩次，2h/次。     【關(guān)鍵詞】  番石榴葉； 總

2、黃酮； 正交設(shè)計(jì)    The Extraction Technology for Total Flavonoids from Psidium guajava LeavesCAI Danzhao, LIU Huagang*, WEI Qi（Guangxi Medical University, Nanning 530021, China ）Abstract：ObjectiveTo study an extraction technology for total flavones from leaves of Psidium guajava L. Meth

3、odsThe extraction conditions of total flavones were studied through measuring the content of the total flavones extracted.ResultsThe factors which influenced the extraction rate were sorted as follows: A > D > C > B, where A , B, C, D stood for the concentration of ethanol, the dosage of et

4、hanol, extraction times and heated times . ConclusionThe optimum process of the extraction technology which obtained through orthogonal design is: 70% ethanol, ten-fold solvent, two times extraction, two hours each time.Key words：Psidium guajava Leaves;   Total l flavones;   Orth

5、ogonal design    番石榴葉為桃金娘科植物番石榴Psidium guajava L.的干燥葉及帶葉嫩莖，分布于華南各地至四川西南部，含-谷甾醇、榭皮素、番石榴苷、無(wú)色車菊素、番石榴酸等成分1?，F(xiàn)代藥理研究表明，番石榴葉提取出的總黃酮苷及單黃酮苷具有降血糖的作用2；近年來(lái)對(duì)黃酮類化合物的藥理作用研究較多，發(fā)現(xiàn)其具有抗心腦血管病、抗氧化、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等作用3，4。為了進(jìn)一步研究番石榴葉總黃酮的功效，充分開(kāi)發(fā)我國(guó)豐富的番石榴葉植物資源, 我們以總黃酮含量為考察指標(biāo)，對(duì)番石榴葉總黃酮提取工藝進(jìn)行了研究。1   材料與儀器

6、1.1   儀器722N型分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；SHB循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；ZFQ85A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海醫(yī)械專機(jī)廠)；AL204電子天平（METTLER  TOLEDO），HWS-20恒溫水浴箱（江蘇太倉(cāng)市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）。1.2   試劑蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所)；番石榴葉（購(gòu)自廣西藥材站)， 95%乙醇；亞硝酸鈉；硝酸鋁；氫氧化鈉等皆為市售分析純。2  方法與結(jié)果2.1  番石榴葉總黃酮的提取取干番石榴葉，粉碎，準(zhǔn)確稱取50g，置于1000ml圓底燒瓶中，按要求加入一定量的

7、提取劑，加熱回流提取一定時(shí)間，濾過(guò)，濾液減壓回收溶劑，真空干燥，稱重，得待測(cè)番石榴葉干膏。2.2  總黃酮含量測(cè)定方法2.2.1   測(cè)定波長(zhǎng)的確定精密稱取干燥蘆丁對(duì)照品20 mg，置100 ml容量瓶中，60%乙醇溶解，定容，得標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液（含無(wú)水蘆丁0.200 0g/L）。精密移取蘆丁對(duì)照液2.0 ml置25 ml容量瓶中，加入50g/L亞硝酸鈉溶液0.75 ml，搖勻，靜置6 min；再加100g/L硝酸鋁溶液0.75 ml，搖勻，靜置6 min；再加40 g/L氫氧化鈉溶液10 ml，60%乙醇稀釋至刻度,搖勻，靜置10min，以60%乙醇調(diào)零，從200 n

8、m至600 nm進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，測(cè)得500 nm處有最大吸收，因此以500 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。2.2.2   標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制分別精密移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液0，1.5，2.5，3.5，4.5，5.5ml置25ml容量瓶中，按“2.2.1”項(xiàng)下“加入50 g/L亞硝酸鈉溶液”起操作，以第一瓶溶液為空白調(diào)零，于500 nm測(cè)各瓶溶液吸光度；以濃度（ C ）和吸光度（ A ）進(jìn)行線性回歸，得方程為：A = 9.975 4C - 0.003 5；r= 0.998 9。2.2.3  精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取蘆丁對(duì)照液2.0 ml置25ml容量瓶中，按“2.2.1”項(xiàng)下操作，60%乙醇調(diào)零，

9、于500 nm測(cè)溶液吸光度，結(jié)果RSD 為0.85%（n=6）。2.2.4  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)將同一待測(cè)番石榴葉干膏按樣品總黃酮含量測(cè)定方法項(xiàng)下操作，分別于0，2，4，6，8 h進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果RSD 1.27% ，表明各供試品溶液中總黃酮在測(cè)定的8 h內(nèi)可保持穩(wěn)定。2.2.5  重復(fù)性實(shí)驗(yàn)將同一待測(cè)番石榴葉干膏按樣品總黃酮含量測(cè)定方法項(xiàng)下操作，平行測(cè)定6次，結(jié)果RSD為1.84%。2.2.6  回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法。精密稱取已知含量的樣品5份，分別加入精密稱定的對(duì)照品適量，按樣品總黃酮含量測(cè)定方法項(xiàng)下操作，測(cè)定吸光度并計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為96.86% ，RS

10、D為0.82%。2.2.7   番石榴葉樣品總黃酮含量測(cè)定精密稱取不同提取條件所得番石榴葉干膏12 mg，置10 ml容量瓶中，60%乙醇溶解，定容，精密移取5 ml置25 ml容量瓶中，按“2.2.1”項(xiàng)操作，60%乙醇調(diào)零，于500 nm測(cè)溶液吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算總黃酮濃度，并計(jì)算樣品總黃酮含量。    總黃酮量（mg）= 總黃酮濃度 ×溶液體積×樣品干膏量 / 6    總黃酮含量（%）=（總黃酮量/干藥材量）×100%2.3  提取工藝研究由于乙醇作為提取溶劑具有

11、選擇性好，滲透性強(qiáng)，浸出率較高的優(yōu)點(diǎn)，因此本實(shí)驗(yàn)選擇一定濃度的乙醇溶液作為提取劑。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇溶劑濃度、溶劑用量、提取次數(shù)、回流提取時(shí)間4個(gè)因素進(jìn)行正交設(shè)計(jì)，選用L9(34)正交表，因素水平表見(jiàn)表1。    按表2所列各工藝組合制備樣品，按“2.2.7”項(xiàng)方法測(cè)定，計(jì)算總黃酮含量。結(jié)果見(jiàn)表2。方差分析見(jiàn)表3。由分析結(jié)果可知影響番石榴葉總黃酮提取的主次因素依次為乙醇濃度>回流時(shí)間>提取次數(shù)>溶劑用量；其中乙醇濃度對(duì)提取率的影響有顯著性差異（P<0.05）；提取的最佳方案為A2B1C2D2，即10倍量70%乙醇加熱回流提取兩次，2h/次

12、。表1  正交設(shè)計(jì)因素水平表（略）表2  正交實(shí)驗(yàn)方案及結(jié)果分析 L9(34)（略）表3  方差分析表（略）3  討論    番石榴葉總黃酮是番石榴葉主要成分，我們經(jīng)正交設(shè)計(jì)的直觀分析和方差分析，發(fā)現(xiàn)影響番石榴葉總黃酮提取的主次因素依次為乙醇濃度>回流時(shí)間>提取次數(shù)>溶劑用量，提取的最佳方案為A2B1C2D2，即10倍量70%乙醇加熱回流提取兩次，2 h/次。按此方案提取，所得總黃酮含量最高。    【參考文獻(xiàn)】  1 國(guó)家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會(huì).中華本草(第5冊(cè))M.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,1998: 642.2 黎肇炎, 曾寶月, 簡(jiǎn)錦溢,等. 番石榴葉提取