萊菔子水溶性生物堿對(duì)ApoE基因敲除小鼠內(nèi)皮細(xì)胞的抗氧化保護(hù)作用

1、萊菔子水溶性生物堿對(duì)ApoE基因敲除小鼠內(nèi)皮細(xì)胞的抗氧化保護(hù)作用    The sea refuses no river.  【摘要】  目的 探討萊菔子水溶性生物堿對(duì)ApoE基因敲除小鼠內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化保護(hù)作用。方法 將50只ApoE基因敲除小鼠隨機(jī)分為5組：模型組、萊菔子水溶性生物堿高、中、低劑量組、血脂康組，每組10只；另取10只C57BL/6J作為空白組。8 w后，眼球取血處死，隨機(jī)選取6個(gè)樣本檢測(cè)指標(biāo)。結(jié)果 與模型組相比，萊菔子各劑量組均能明顯提高ApoE基因敲除小鼠血清NO含

2、量(P0.05)；提高血清SOD的活性（P0.05）；降低血清MDA（P0.01）含量()。結(jié)論 萊菔子水溶性生物堿通過(guò)提高ApoE基因敲除小鼠血清NO含量、提高SOD活性、降低MDA含量，發(fā)揮抗氧化作用，從而保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞。 【關(guān)鍵詞】  萊菔子水溶性生物堿；ApoE基因敲除小鼠；抗氧化Self-confidence is the first requisite to human greatness.  萊菔子是十字花科植物蘿卜(Raphanus sativus L.)的干燥成熟種子，在日華子本草中記為蘿卜子。其性味辛、甘、

3、平，歸肺、脾、胃經(jīng)，主要功效為降氣化痰，消食除脹。本草綱目記載：“萊菔子長(zhǎng)于利氣”。萊菔子水溶性生物堿以芥子堿(Sinapine)為主要成分，廣泛存在于十字花科植物中的一種季胺鹽物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀(guān)察萊菔子水溶性生物堿對(duì)載脂蛋白E（ApoE）基因敲除小鼠血清一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)影響來(lái)探討萊菔子水溶性生物堿抗動(dòng)脈粥樣硬化（AS）作用的機(jī)制。1  材料與方法1.1  實(shí)驗(yàn)材料  1.1.1  藥品制備 萊菔子水溶性生物堿，由吉林省中醫(yī)中藥研究院新藥中心制備(醫(yī)藥學(xué)/臨床醫(yī)學(xué)論文 )

4、。1.1.2  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 北京維通利華公司提供雄性ApoE基因敲除小鼠75只，雄性C57BL/6J小鼠15只，13周齡，體重（22±2）g，清潔級(jí)。1.1.3  主要儀器及試劑 Joy put heart into a man.  電子記重秤AWH（SI）-2.5 kg：國(guó)產(chǎn)；BD/BC518 -20冰箱：國(guó)產(chǎn)；4冰箱：國(guó)產(chǎn)；Q/IFGM0182000低溫高速離心機(jī)：德國(guó)；HH·W21·600電熱恒溫水浴箱，小型臺(tái)式離心機(jī)：上海醫(yī)療器械廠(chǎng)；PERLONG；pus2018

5、60;半自動(dòng)生化分析儀：北京普朗新技術(shù)有限公司。1.1.4  基礎(chǔ)飼料 A man cannot whistle and drink at he same time.  玉米粉26.0，面粉29.0，豆粕28.0，磷酸氫鈣1.4，石粉1.6，魚(yú)粉5.0，骨粉5.0，鹽1.0，多種維生素1.5，多種微量元素1.5。論文分為專(zhuān)題型、論辯型、綜述型和綜合型四大類(lèi)  1.1.5  肥甘飼料 The best of friends must part.  由10.0%豬油，2.0%膽固醇，20.0蔗糖，5.0%蛋黃

6、粉，0.2%膽鹽，0.2%甲基硫氧嘧啶，62.6%基礎(chǔ)飼料配制而成。 論文教育信息網(wǎng)  There is more trouble in having nothing to do than in having much to do.  1.2  方法1.2.1  分組及給藥 將ApoE基因敲除小鼠（高脂飲食）隨機(jī)分為5組，每組15只。模型組，每日灌服飲用水；萊菔子水溶性生物堿高劑量組90 mg·kg-1·d-1，萊中劑量組60 mg·kg-1·d-1，低劑

7、量組30 mg·kg-1·d-1(分別相當(dāng)于生藥60、40、20 g/kg)，血脂康組0.2 g·kg-1·d-1，另取10只C57BL/6J大鼠作為空白對(duì)照組?？瞻讓?duì)照組及模型組給等體積蒸餾水灌胃。給藥時(shí)間為8 w。1.2.2  樣本的采集及檢測(cè) 給藥8 w后，于末次給藥后摘眼球取血處死動(dòng)物。分離血清后，隨機(jī)選取6個(gè)樣本進(jìn)行檢測(cè)。NO試劑盒、SOD試劑盒、MDA試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。1.3  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法   運(yùn)用SPS

8、S13.0軟件進(jìn)行計(jì)算，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用x±s表示，組間比較采用方差分析。2  結(jié)果   治療8 w后，各組小鼠血清NO、SOD及MDA變化比較，見(jiàn)表1。表1  各組治療8 w后各項(xiàng)指標(biāo)變化比較(略)3  討論    在A(yíng)S的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中伴隨著機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)，氧自由基(OFR)產(chǎn)生增加，而機(jī)體具有抗氧化能力的SOD、谷胱苷肽過(guò)氧化物酶（GPX）活性及NO含量等明顯降低，即抗氧化酶系的保護(hù)作用減低。OFR對(duì)血管內(nèi)皮恭能的影響主要表現(xiàn)

9、在1：損傷內(nèi)皮依賴(lài)的血管擴(kuò)張。由于O-2滅活NO、GPX缺失等造成血管內(nèi)皮功能障礙。誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。內(nèi)皮損傷或暴露于O-2和H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，以致AS發(fā)生和促凝血狀態(tài)。誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)。血管新生。除了對(duì)胚胎發(fā)育和創(chuàng)傷修復(fù)發(fā)揮生理作用外；在病理方面其可參與內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖和血管形成；此外，還參與血管VSMC的生長(zhǎng)，遷移。    NO能夠與脂氧化自由基直接反應(yīng)而干擾低密度脂蛋白（LDL）的氧化過(guò)程，從而阻止氧化LDL（oxLDL）的生成及對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的破壞。SOD是一種廣泛存在生物體內(nèi)的金屬酶類(lèi)。以O(shè)2為底物，是清除超氧離子自由基的特效酶類(lèi)。

10、脂質(zhì)氧化應(yīng)激的產(chǎn)物為MDA。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各治療組均能增加小鼠血清NO含量；提高血清SOD活性，降低MDA的含量，其調(diào)節(jié)作用隨著劑量的增加而增強(qiáng)，呈劑量依賴(lài)性。萊菔子高劑量組與血脂康組比較無(wú)顯著差異。    NO是一種理想的抗AS因子，提高NO濃度可以改善血管內(nèi)皮功能2。SOD又是清除氧自由基的專(zhuān)一酶，因此，萊菔子水溶性生物堿可能通過(guò)這一機(jī)制而發(fā)揮抗氧化和保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞的作用?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 陳 瑗，周 玫.氧化應(yīng)激炎癥在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中作用研究的新進(jìn)展J.中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志，2008；26（10）：75762.2