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文檔簡介

1、前言方法一：直接從細(xì)胞中提取、酶切特點(diǎn)：（1）、如果從基因組DNA獲取目的基因 相對于目的基因的長度，基因組的DNA長度太大。 （2）、從染色體以外的遺傳物質(zhì)中獲得目的基因是常用的做法方法二、化學(xué)合成法人工合成寡聚核苷酸技術(shù)：60bp 1.2元/bp 在60bp與120bp之間 6.8元/bp提供DNA合成服務(wù)的公司： 上海生工生物工程有限公司 上海英俊生物科技有限公司 上海華諾生物科技有限公司 北京奧科生物技術(shù)有限責(zé)任公司 等特點(diǎn)：1、 合成的產(chǎn)物是單鏈DNA2、 5、3末端均為羥基3、應(yīng)用場合： 真核生物基因在原核中表達(dá)； 難以得到模板的情況；獲得雙鏈的方法：（1）、3末端部分反向互補(bǔ)，混

2、合后在DNA聚合酶作用下互為模板形成雙鏈（2）分段合成法OH，先用激酶處理，使磷酸化連接酶OH，先用激酶處理，使磷酸化（3）、分段合成，結(jié)合PCR技術(shù)PCR方法三、PCR技術(shù)（1）、直接從原核微生物細(xì)胞或質(zhì)粒中擴(kuò)增目的片段（2）、引入突變a、引物5端引入b、定點(diǎn)突變，SOE技術(shù)c、易錯PCR方法四、RT-PCR技術(shù) 針對真核生物基因不連續(xù)的特點(diǎn)，利用mRNA為核苷酸信息資源，用逆轉(zhuǎn)錄-PCR法獲得目的基因AAAAAA 35T T TT T TComplimentary DNART：Reverse TranscriptaseSummary:1、細(xì)胞中提取；2、化學(xué)合成；3、PCR技術(shù)；4、RT-PCR前言n粘性末端、平整末端200多種限制性內(nèi)切酶，

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