氨基酸的分離鑒定-濾紙層析法ppt課件

1、氨基酸的分別鑒定氨基酸的分別鑒定濾紙層析法濾紙層析法 經(jīng)過氨基酸的分別：1.學習紙層析法的根本原理；2.掌握濾紙層析的操作方法。目目 的的一.濾紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法。以水被濾紙纖維結(jié)合作為固定相，以有機溶劑為流動相，樣品點在濾紙上進展展層，氨基酸在兩相中不斷分配，由于分配系數(shù)不同，故樣品隨流動相挪動的速率不同，從而被分開，構(gòu)成距原點間隔不等的層析點。原原 理理原理原理二二.氨基酸被分別后在紙層析圖譜上的位氨基酸被分別后在紙層析圖譜上的位置是用置是用Rf值值(比移比移)來表示的來表示的 Rf = 原點到層析中心的間隔原點到層析中心的間隔 / 原點原點到溶劑前沿的間隔到溶劑前

2、沿的間隔 (在一定的條件下某種物質(zhì)的在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)。值是常數(shù)。Rf值的大小與物質(zhì)的構(gòu)造、性質(zhì)、溶值的大小與物質(zhì)的構(gòu)造、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度劑系統(tǒng)、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等要素有關(guān)。本實驗利用紙層析法分等要素有關(guān)。本實驗利用紙層析法分別氨基酸。別氨基酸。)顯色原理顯色原理 無色物質(zhì)的紙層析圖譜可用光譜法無色物質(zhì)的紙層析圖譜可用光譜法紫外光照射或顯色法鑒定。氨基紫外光照射或顯色法鑒定。氨基酸紙層析圖譜常用的顯色劑為茚三酮酸紙層析圖譜常用的顯色劑為茚三酮或吲哚醌，本實驗采用茚三酮為顯色或吲哚醌，本實驗采用茚三酮為顯色劑。劑。器器 材材1、玻璃鐘罩、玻璃鐘罩

3、 2、毛細管、毛細管 3、噴霧器、噴霧器 4、培育皿、培育皿 5、層析濾紙、層析濾紙(新華一號新華一號)6、烘箱、烘箱 7、鉛筆直尺、鉛筆直尺8、裁紙刀、裁紙刀 9、一次性手套、一次性手套 10、分液漏斗、分液漏斗 11、吹風機、吹風機12、移液管等常規(guī)儀器、移液管等常規(guī)儀器1、物質(zhì)的量為0.008摩爾/升的賴氨酸、亮氨酸、天門冬氨酸、丙氨酸溶液及它們的混合液(各組份物質(zhì)的量均為0.008摩爾/升)。2、擴展劑 正丁醇：甲酸：水=70:17:8體積比3、顯色劑 2.5茚三酮丙酮溶液。試試 劑劑1、預(yù)備濾紙 取層析濾紙(15*17cm，距下端2 cm處用鉛筆劃一條與底邊平行的直線，在此直線上每間

4、隔相等間隔作一記號，一共做五個記號點樣用。2、點樣 用毛細管將各氨基酸樣品分別點在中間5個記號上，自然風干或冷風后再點一次樣，每點在紙上分散的直徑，最大不超越5 mm。操操 作作單向上行層析法單向上行層析法操作操作3、展層、展層 用訂書機將濾紙訂成筒狀，紙的兩邊不能用訂書機將濾紙訂成筒狀，紙的兩邊不能接觸。將濾紙豎直立于培育皿中有鉛筆線的一接觸。將濾紙豎直立于培育皿中有鉛筆線的一端朝下，用玻璃鐘罩蓋住，用層析柱與漏斗從端朝下，用玻璃鐘罩蓋住，用層析柱與漏斗從鐘罩上口處加展開劑至培育皿高度鐘罩上口處加展開劑至培育皿高度2/3處，蓋上上處，蓋上上口蓋子，待溶劑前沿上升至距頂端約口蓋子，待溶劑前沿上升至距頂端約1cm時取出時取出濾紙，用鉛筆描出溶劑前沿界限，自然枯燥或用濾紙，用鉛筆描出溶劑前沿界限，自然枯燥或用吹風機冷風吹干。吹風機冷風吹干。4、顯色、顯色 用噴霧器均勻噴上用噴霧器均勻噴上2.5茚三酮丙酮溶液，茚三酮丙酮溶液，然后置烘箱中烘烤然后置烘箱中烘烤5分鐘分鐘(65)即可顯出各層析斑即可顯出各層析斑點。點。5、計算各種氨基酸的、計算各種氨基酸的Rf值。值。1、整個實驗為什么要戴手套進展，且濾紙要妥善保管？2、為防止實驗結(jié)果出現(xiàn)“拖尾景象，實驗操作中應(yīng)留意哪些環(huán)節(jié)？3、為