2020年生物科技行業(yè)分子生物學(xué)

1、（生物科技行業(yè)）分子生物學(xué)20XX20XX年XXXX月多年的企業(yè)咨詢豉問經(jīng)驗(yàn).經(jīng)過實(shí)戰(zhàn)驗(yàn)證可以落地機(jī)行的卓越管理方案，值得您下載擁有1、基因的概念基因是合成壹種有功能的多肽鏈或者RNA分子所必需的壹段完整的DNA序列。（不僅包括編碼肽鏈或RNA的核甘酸順序，仍包括表達(dá)所需的調(diào)控等順序）2、現(xiàn)代基因概念的發(fā)展斷裂基因一基因的結(jié)構(gòu)是斷裂的。原核生物的基因結(jié)構(gòu)大多數(shù)是連續(xù)的，即基因編碼蛋白質(zhì)的序列是不中斷的。而真核生物基因的編碼序列是不連貫的，即在倆個(gè)編碼序列之間有壹段不編碼蛋白質(zhì)的非編碼序列。編碼序列稱為外顯子，非編碼序列稱為內(nèi)含子。重疊基因-倆個(gè)基因共有壹段重疊的核甘酸序列，這就是重疊基因。基因

2、重疊有倆種情況：壹是壹個(gè)基因的密碼子完全包含在另壹個(gè)基因內(nèi)；二是倆個(gè)基因只有壹個(gè)或幾個(gè)核甘酸的重疊。假基因-具有和功能基因相似的序列，但由于有許多突變以致失去了原有的功能，所以假基因是沒有功能的基因，常用于表示。1、通常散布于有活性的功能基因之間。2、壹般認(rèn)為假基因是由mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA,然后整合到基因組上。3、沒有生物學(xué)功能，不再受到進(jìn)化的選擇壓力，因此能夠積累很多突變。3、基因的本質(zhì)：4、基因的發(fā)展歷史：5、DNA復(fù)性:熱變性的DNA如緩緩冷卻，已分開的互補(bǔ)鏈又可能重新締合成雙螺旋，這叫復(fù)性。6、DNA的變性：當(dāng)雙螺旋DNA加熱至生理溫度之上（接近1000C）時(shí)，它就失去生理活性，這

3、時(shí)DNA雙股鏈間的氫鍵斷裂，最后雙股鏈完全分開成為無(wú)規(guī)則線團(tuán)，這個(gè)過程叫DNA的變性。7、DNA雙螺旋：B-DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型要點(diǎn)：(1)倆條反平行的多核甘酸鏈圍繞同壹中心軸盤繞成右手雙螺旋(2)脫氧核糖和磷酸在外側(cè)形成螺旋的軌跡，核甘酸間彼此通過3,5-磷酸二酯鍵相連；堿基伸向內(nèi)部，其平面和螺旋軸垂直；糖環(huán)平面和中軸平行。(3)倆條核甘酸鏈依靠彼此堿基之間形成的氫鍵相連系而結(jié)合在壹起，且總是A=T,GC(4)雙螺旋的平均直徑為2nm,每個(gè)螺旋圈上升10對(duì)核甘酸，螺距為3.4nm。(5)螺旋表面有壹條大溝和壹條小溝。8、DNA損傷的修復(fù)：指DNA受到損傷后，細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的使DNA的化學(xué)組成和核

4、甘酸序列重新恢復(fù)或使細(xì)胞對(duì)DNA損傷產(chǎn)生耐受的壹系列反應(yīng)。9、第壹個(gè)重組DNA的酶是ecori。10、DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄(相同和不同)：11、DNA分子標(biāo)記技術(shù)有哪些：分子標(biāo)記的類型：第壹類為基于DNA-DNA雜交的DNA標(biāo)記。該標(biāo)記技術(shù)是利用限制性內(nèi)切酶酶解及凝膠電泳分離不同生物體的DNA分子，然后用經(jīng)標(biāo)記的特異DNA探針和之進(jìn)行雜交，通過放射自顯影或非同位素顯色技術(shù)來(lái)揭示DNA的多態(tài)性。其中最具代表性的是發(fā)現(xiàn)最早和應(yīng)用廣泛的RFLP標(biāo)記。第二類為基于PCR的DNA標(biāo)記。 這類DNA標(biāo)記可分為隨機(jī)引物PCR標(biāo)記和特異引物PCR標(biāo)記。隨機(jī)引物PCR標(biāo)記包括RAPD標(biāo)記、ISSR標(biāo)記等，其中RAP

5、D標(biāo)記使用較為廣泛。特異引物PCR標(biāo)記包括SSR標(biāo)記、STS標(biāo)記等，其中SSR標(biāo)記已廣泛地應(yīng)用于遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位等領(lǐng)域。第三類為基于PCR和限制性酶切技術(shù)結(jié)合的DNA標(biāo)記。這類DNA標(biāo)記可分為二種類型，壹種是通過對(duì)限制性酶切片段的選擇性擴(kuò)增來(lái)顯示限制性片段長(zhǎng)度的多態(tài)性，如AFLP標(biāo)記。另壹種是通過對(duì)PCR擴(kuò)增片段的限制性酶切來(lái)揭示被擴(kuò)增區(qū)段的多態(tài)性，如CAPS標(biāo)記。第四類為基于單核甘酸多態(tài)性的DNA標(biāo)記。如：SNP標(biāo)記。它是由DNA序列中因單個(gè)堿基的變異而引起的遺傳多態(tài)性。目前SNP標(biāo)記壹般通過DNA芯片技術(shù)進(jìn)行分析。RFLP標(biāo)記： 限制性酶切片段長(zhǎng)度多樣性， 是用限制性內(nèi)切酶處理不同個(gè)

6、體基因組DNA所產(chǎn)生的大分子片段的大小的多樣性。RAPD標(biāo)記：以隨機(jī)引物通過PCR反應(yīng)非定點(diǎn)擴(kuò)增DNA片段，然后用凝膠電泳分離擴(kuò)增片段，經(jīng)染色來(lái)顯示擴(kuò)增DNA片段的多樣性。SSR標(biāo)記： 以1-6個(gè)核甘酸為基本單元， 串聯(lián)重復(fù)次數(shù)壹股為10-50,經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳后，比較擴(kuò)增段的遷移距離，就可知在不同個(gè)體間某SSR作為上的長(zhǎng)度多樣性。AELP標(biāo)記：擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多樣性，設(shè)計(jì)對(duì)某種限制性內(nèi)切酶的通用接頭及可和接頭序列的限制性酶切位點(diǎn)的序列配對(duì)的專用引物，通過PCR進(jìn)行的限制性片段擴(kuò)增，分析其長(zhǎng)度多態(tài)性。12、DNA復(fù)制具有哪些特點(diǎn)：1 .DNA復(fù)制是半保留復(fù)制，在半保留復(fù)制方式中倆條親代鏈分開，

7、分開后的每壹條鏈都可作為模板用于合成互補(bǔ)的、反平行的子鏈。2 .DNA合成需要DNA聚合酶，DNA聚合酶需要壹個(gè)游離的3羥基作為引物（能夠由RNA或DNA提供），以脫氧核甘三磷酸作為底物，催化3羥基和脫氧核甘三磷酸的5-a-磷酸基團(tuán)形成磷酸二酯鍵，釋放出焦磷酸（隨后水解為無(wú)機(jī)磷酸），使核甘酸整合到延伸的聚核甘酸鏈中。新鏈按5-3方向生長(zhǎng)。3.原核生物中存在3種聚合酶（poll、II和III）。而真核生物中存在5種聚合酶（pola、B、丫、和登在E.coli中，polin是主要的復(fù)制酶，而polI既有復(fù)制功能，又有修復(fù)功能。 所有三種原核生物的DNA聚合酶都具有3-5外切酶的活性。DNApolI

8、和III仍具有5-3外切酶活性。4.復(fù)制起始發(fā)生在復(fù)制起點(diǎn)，E.coli中存在唯壹的復(fù)制起點(diǎn)（OriC）,從壹個(gè)復(fù)制起點(diǎn)沿著相反方向雙向進(jìn)行；真核生物染色體含有許多復(fù)制起點(diǎn)。真核生物DNA的復(fù)制也是雙向進(jìn)行的，但和E.coli不同，能夠在許多復(fù)制起點(diǎn)同時(shí)雙向進(jìn)行復(fù)制。5 .DNA復(fù)制需要雙鏈解旋形成復(fù)制叉，解旋需要解旋酶，ATP驅(qū)動(dòng)的解旋酶使復(fù)制起點(diǎn)（OriC）區(qū)解旋，制造復(fù)制叉，單鏈結(jié)合蛋白和倆條模板鏈結(jié)合防止他們重新形成雙螺旋。在復(fù)制叉處，親代DNA的倆條鏈作為模板用于合成新的DNA。6.由于DNA聚合酶催化的鏈的延伸是5-3方閾及雙螺旋DNA中的倆條鏈?zhǔn)欠雌叫械摹?壹條鏈 （前導(dǎo)鏈）的合

9、成是連續(xù)的，合成方向和復(fù)制叉移動(dòng)方向壹致；另壹條鏈（后隨鏈）的合成是不連續(xù)的，合成方向和復(fù)制叉移動(dòng)方向相反。7.復(fù)制起始是借助于引發(fā)酶合成的RNA引物開始的，前導(dǎo)鏈合成需要壹個(gè)RNA引物，而后隨鏈合成需要多個(gè)RNA引物。8.復(fù)制的忠實(shí)性非常高，主要是由于DNA聚合酶具有3-5外切酶的活性。但在復(fù)制過程中由于堿基配對(duì)錯(cuò)誤、以及堿基共價(jià)修飾、堿基缺失和插入等都會(huì)產(chǎn)生突變，且造成DNA損傷。復(fù)制后的修復(fù)主要包括5種修復(fù)機(jī)制：直接修復(fù)、切除修復(fù)、錯(cuò)配修復(fù)、重組修復(fù)和SOS修復(fù)等。13、啟動(dòng)子：是指RNA聚合酶識(shí)別、特異結(jié)合和開始轉(zhuǎn)錄的壹段DNA序列啟動(dòng)子是位于結(jié)構(gòu)基因5端上游的壹段DNA序列，能夠指導(dǎo)

10、全酶同模板正確結(jié)合，活化RNA聚合酶，啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄。14、反式作用因子：能直接或間接識(shí)別和結(jié)合在順式作用元件上，調(diào)控靶基因表達(dá)的蛋白質(zhì)因子，也稱為轉(zhuǎn)錄因子。15、熔解溫度（Tm）:熔解曲線的中點(diǎn)，即壹半的DNA雙螺旋解為單鏈所對(duì)應(yīng)的溫度稱為熔解溫度。16、錯(cuò)義突變：堿基替換使編碼某種氨基酸的密碼子變成編碼另壹種氨基酸的密碼子，從而使多肽鏈的氨基酸種類和序列發(fā)生改變。17、蛋白質(zhì)組：壹種基因組所表達(dá)的全套蛋白質(zhì)；壹個(gè)細(xì)胞或壹個(gè)機(jī)體的基因所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)。18、蛋白質(zhì)翻譯后，新生態(tài)鏈的加工過程：1新生態(tài)鏈的折疊至少有倆類蛋白質(zhì)參和體內(nèi)新生態(tài)鏈的折疊，即酶和分子伴侶。2蛋白質(zhì)合成的加工和修飾某些蛋

11、白質(zhì)在其肽鏈合成結(jié)束后，仍需進(jìn)壹步加工轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂姓Ｉ砉δ艿牡鞍踪|(zhì)，有些蛋白質(zhì)仍需經(jīng)過壹定修飾才能成為成品而參和正常的生理活動(dòng)。3亞單位的聚合由多肽及其輔助成分（脂類、核酸、血紅素等）構(gòu)成的蛋白質(zhì)，在多肽鏈合成后，仍需經(jīng)過多肽鏈及肽鏈和輔助成分之間聚合過程，才能成為有活性的蛋白。19、鋅指結(jié)構(gòu)（301）:指的是在很多蛋白中存在的壹類具有指狀結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)域，這些具有鋅指結(jié)構(gòu)的蛋白大多都是和基因表達(dá)調(diào)控有關(guān)的功能蛋白。鋅指結(jié)構(gòu)都是壹個(gè)a螺旋和壹個(gè)反向平行B片層的基部以鋅原子為中心，通過和壹對(duì)半胱氨酸和壹對(duì)組氨酸之間形成配位鍵相連接，鋅指環(huán)上突出的賴氨酸、精氨酸參和DNA的結(jié)合。20、遺傳密碼子的特

12、性：1.連續(xù)性：編碼蛋白質(zhì)氨基酸序列的各個(gè)三聯(lián)體密碼連續(xù)閱讀，密碼間既無(wú)間斷也無(wú)交叉。2.簡(jiǎn)且性：遺傳密碼中，除色氨酸和甲硫氨酸僅有壹個(gè)密碼子外，其余氨基酸有2、3、4個(gè)或多至6個(gè)三聯(lián)體為其編碼。3.通用性：蛋白質(zhì)生物合成的整套密碼，從原核生物到人類都通用。?已發(fā)現(xiàn)少數(shù)例外，如動(dòng)物細(xì)胞的線粒體、植物細(xì)胞的葉綠體。?密碼的通用性進(jìn)壹步證明各種生物進(jìn)化自同壹祖先。4.擺動(dòng)性(wobble)轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸的tRNA的反密碼需要通過堿基互補(bǔ)和mRNA上的遺傳密碼反向配對(duì)結(jié)合， 但反密碼和密碼間不嚴(yán)格遵守常見的堿基配對(duì)規(guī)律，稱為擺動(dòng)配對(duì)。21、OD值和吸光度的換算：22、SD序列：mRNA上的AGGAGGU

13、區(qū)域作為翻譯起始信號(hào)，被稱為Shine-Dalgarno順序或SD序歹!J。核酸的化學(xué)組成：堿基、核甘、核甘酸23、mRNA的可變剪接：許多真核生物基因的mRNA前體能夠經(jīng)過不同的剪接方式產(chǎn)生多種mRNA分子，從而編碼出多種不同功能的異形體蛋白質(zhì)，這種特殊的mRNA前體剪接方式稱為可變剪接或選擇性剪接。RNA的可變剪接：可變剪接是指同壹基因轉(zhuǎn)錄形成的RNA前體可經(jīng)過壹種之上剪接方式產(chǎn)生多種不同的mRNA的過程。RNAi:*24、RNA干涉：指雙鏈小RNA高效、特異降解細(xì)胞內(nèi)同源mRNA從而阻斷靶基因表達(dá)，使相應(yīng)的基因沉默。25、RNA的成熟：不論原核或真核生物的rRNA和tRNA都是以初級(jí)轉(zhuǎn)錄

14、本形式被合成的，然后再加工成為成熟的RNA分子。26、RNA編輯：指修飾或秦輕微改變mRNA的核甘酸順序，使他們和對(duì)應(yīng)的模板DNA的順序有所不同的過程。27、tRNA分子結(jié)構(gòu)特征：tRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)由于局部雙螺旋的形成而呈現(xiàn)“三葉草”形，故稱為“三葉草”結(jié)構(gòu)。tRNA的“三葉草”形結(jié)構(gòu)包括：氨基酸臂、DHU臂、反密碼臂、可變臂和T巾C臂五部分“L”形三級(jí)結(jié)構(gòu)：T于Cloop&DHU100P位于“L”倆臂的交界處，利于“L結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定；L”結(jié)構(gòu)中堿基堆積力大，使其拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)趨于穩(wěn)定。連接多聚核甘酸的鍵：磷酸二酯鍵核甘酸組成：核甘的磷酸酯，分為脫氧核糖核甘酸和核糖核甘酸。29、真核生物mRNA

15、的轉(zhuǎn)錄后加工的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：5端形成特殊的帽子結(jié)構(gòu)，有三類：帽子0:m7GpppX單細(xì)胞生物（如酵母）；帽子1:m7GpppXm多細(xì)胞生物，主要形式；帽子2:m7GpppXmpYm占10-15%。帽子的功能是為核糖體識(shí)別mRNA提供信號(hào)增加mRNA的穩(wěn)定性，保護(hù)5,端。由壹種360KD特異性酶切除3,末端壹段后，經(jīng)RNA末端腺甘酸轉(zhuǎn)移酶催化加上polyA尾巴（約200個(gè)A）。PolyA的功能：可能在于增加mRNA的穩(wěn)定性。通過剪接除去由內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄的序列。鏈內(nèi)部核甘酸甲基化。主要是m6A,可能對(duì)mRNA前體的加工起識(shí)別作用。30、原核基因表達(dá)調(diào)控：原核基因調(diào)控機(jī)制的類型和特點(diǎn)調(diào)控的主要環(huán)節(jié)在轉(zhuǎn)錄起始

16、正調(diào)控負(fù)調(diào)控轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)普遍采用操縱子模式，原核生物功能相關(guān)的基因往往串聯(lián)地排列在壹起，在壹個(gè)共同的調(diào)控區(qū)的調(diào)節(jié)下，壹起轉(zhuǎn)錄生成壹個(gè)多順反子，最終表達(dá)產(chǎn)物是壹些功能相關(guān)的酶或蛋白質(zhì)，它們壹起參和某種底物的代謝或某種產(chǎn)物的合成。31、基因表達(dá)調(diào)控（乳糖操縱子、色氨酸操縱子）：基因表達(dá)是指細(xì)胞在生命過程中，把儲(chǔ)存在DNA順序中遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和翻譯，轉(zhuǎn)變成具有生物活性的蛋白質(zhì)分子的過程基因表達(dá)調(diào)控是生物體內(nèi)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)控制機(jī)制，是細(xì)胞中基因表達(dá)在時(shí)問、空間上處于有序狀態(tài)，且對(duì)環(huán)境條件的變化做出適當(dāng)反應(yīng)的復(fù)雜過程。32、乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)，及怎樣操縱：一）乳糖操縱子（lacoperon）的結(jié)構(gòu)三個(gè)結(jié)構(gòu)基

17、因Z基因：編碼&半乳糖甘酶（B-galactosidase）,分解乳糖成為半乳糖和葡萄糖。Y基因：編碼透過酶，使外界乳糖等透過大腸桿菌細(xì)胞壁進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。A基因：編碼乙?；D(zhuǎn)移酶，能將乙酰CoA上的乙?；D(zhuǎn)移到半乳糖上，形成乙酰半乳糖。三個(gè)調(diào)節(jié)序列：在結(jié)構(gòu)基因的上游仍有壹個(gè)啟動(dòng)子 （P）和壹個(gè)操縱基因 （O） ,在啟動(dòng)子上游仍有壹個(gè)分解（代謝）物激活蛋白（CAP）結(jié)合位點(diǎn)，以及壹個(gè)調(diào)節(jié)基因（I）,調(diào)節(jié)基因編碼阻遏蛋白（二）阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控（三）CAP的正調(diào)控當(dāng)阻遏蛋白封閉轉(zhuǎn)錄時(shí)，CAP對(duì)該系統(tǒng)不能發(fā)揮作用如無(wú)CAP存在，即使沒有阻遏蛋白和操縱序列結(jié)合，操縱子仍無(wú)轉(zhuǎn)錄活性。cAMPCAP復(fù)

18、合物和啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合是轉(zhuǎn)錄起始所必需的。單純?nèi)樘谴嬖跁r(shí)，細(xì)菌利用乳糖作碳源；若有葡萄糖或葡萄糖/乳糖共同存在時(shí)，細(xì)菌首先利用葡萄糖。乳糖操縱子的雙調(diào)控系統(tǒng)（1）受乳糖和阻遏蛋白監(jiān)控的、可誘導(dǎo)的負(fù)調(diào)控系統(tǒng)；（2）受cAMP和CAP調(diào)節(jié)的、可誘導(dǎo)的正調(diào)控系統(tǒng)。葡萄糖通過調(diào)節(jié)cAMP的合成間接監(jiān)控這壹過程。以此，為保證大腸桿菌靈活、經(jīng)濟(jì)、有效地適應(yīng)外界環(huán)境，只有在必需的時(shí)候（只有乳糖，沒有葡萄糖）才啟動(dòng)乳糖操縱子的表達(dá)。33、色氨酸調(diào)控：34、葡萄糖效應(yīng)（為什么會(huì)產(chǎn)生這個(gè)效應(yīng)）：葡萄糖存在的情況下，即使在細(xì)菌培養(yǎng)基中加入乳糖、半乳糖、阿拉伯糖或麥芽糖的等誘導(dǎo)物，和其相對(duì)應(yīng)的操縱子也不會(huì)啟動(dòng)，不會(huì)產(chǎn)生

19、出代謝這些糖的酶來(lái)，這種現(xiàn)象稱為葡萄糖效應(yīng)。為什么會(huì)產(chǎn)生這種效應(yīng)？因?yàn)樘砑悠咸烟呛?，?xì)菌所需要的能量可從葡萄糖得到滿足，葡萄糖是最方便的能源，細(xì)菌無(wú)需開啟壹些不常用的基因去利用這些稀有的糖類。葡萄糖的存在會(huì)抑制細(xì)菌的腺甘酸環(huán)化酶活性，減少環(huán)腺甘酸的合成，和它相結(jié)合的蛋白質(zhì)-環(huán)腺甘酸受體蛋白因找不到配體不能形成復(fù)合物。降解物抑制作用是通過提高轉(zhuǎn)錄強(qiáng)度來(lái)調(diào)節(jié)基因表達(dá)的，是壹種積極地調(diào)節(jié)方式。35、PCR技術(shù)及其基本原理，包括哪些反應(yīng)過程：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR技術(shù)是壹種體外模擬自然DNA復(fù)制過程的核酸擴(kuò)增技術(shù)，亦稱為無(wú)細(xì)胞分子克隆技術(shù)。它是以待擴(kuò)增的倆條DNA鏈為模板，在壹對(duì)人工合成的寡核甘酸引物的介導(dǎo)下，通過耐高溫DNA聚合酶的酶促作用，快速特異地?cái)U(kuò)增出特定的DNA片斷。簡(jiǎn)單地講，PCR