丹龍抗癡膠囊提取工藝研究

1、丹龍抗癡膠囊提取工藝研究         11-05-10 16:33:00     作者：譚銀合 孫維廣 譚弘    編輯：studa20【摘要】  ：目的 研究丹龍抗癡膠囊提取工藝,以控制其質(zhì)量,充分提取有效成分,以確保在臨床上有效地發(fā)揮其治療作用,保證臨床療效。方法 以丹參酮A、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1,以及淫羊藿苷的提取量及浸膏得率為評價指標(biāo),采用單因素試驗及正交試驗對丹龍抗癡膠囊的醇提取及水提取的工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)

2、選。結(jié)果 丹參、遠(yuǎn)志、三七藥材,以75%乙醇為溶媒,回流提取2次,加醇量分別為8、6倍,提取時間分別為1.5、1.0 h；醇提后藥渣再與淫羊藿等藥材浸泡0.5 h,提取2次,加水量分別為12、10倍量,提取時間分別為2.0、1.5 h。結(jié)論 對提取工藝進(jìn)行驗證,工藝穩(wěn)定可行。 【關(guān)鍵詞】  丹龍抗癡膠囊提取工藝正交試驗丹參酮A人參皂苷Rb1人參皂苷Rg1淫羊藿苷Abstract：Objective To control the quality of Danlong Kangchi Capsules, fully extract efficiency ingredients and e

3、nsure the therapeutic effect by studying the extraction process of the capsule. Methods With the extracting quantity of tanshinoneA, ginsenoside Rb1 and Rg1, Icariin and extract ratio as indexes, the better process parameters with ethanol or water extracting were selected by simple factor test and o

4、rthogonal test to Danlong Kangchi Capsules. Results The herbs such as root of red-rooted salvia were extracted by 75% ethanol as a solvent, reflux extracting two times, adding 8 times and 6 times solvent volume respectively, extracting 1.5 and 1.0 hour respectively. Dregs after ethanol extracting an

5、d the herbs such as herba Epimedii were decocted by waters soaking 0.5 hour, extracting two times, adding 12 times and 10 times solvent volume respectively, extracting 2.0 and 1.5 hours respectively. Conclusions Extracting processes were validated to be stable and feasible.Key words：Danlong Kangchi

6、Capsules；extracting process；orthogonal design；TanshinoneA；Ginsenoside Rb1；Ginsenoside Rg1；Icariin丹龍抗癡膠囊由丹參、三七、地龍、遠(yuǎn)志、淫羊藿等中藥組成,具有活血化痰、通竅醒腦之功效,為醫(yī)院制劑。臨床用于治療血管性癡呆療效顯著,目前正在作為中藥新藥進(jìn)行研究與開發(fā)。為此,筆者采用正交試驗對其提取工藝進(jìn)行了研究,以確保該制劑在臨床上有效地發(fā)揮其治療作用,現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。1  材料    E-IJ120電子天平(沈陽龍騰電子量程儀器廠)；Waters高效液相色

7、譜儀(美國Waters公司)。丹參酮A對照品(批號110766-200318)、人參皂苷Rb1、Rg1對照品(批號110704- 200220、110703-200224)、淫羊藿苷對照品(批號110737- 200214),均由中國藥品生物制品檢定所提供。流動相所用甲醇、乙腈為色譜純；水為重蒸餾水；其它試劑均為分析純。丹龍抗癡膠囊中各味藥材購自廣州清平藥材市場,經(jīng)廣東藥學(xué)院房志堅教授鑒定,符合中華人民共和國藥典規(guī)定的正品。2  方法2.1  提取工藝的設(shè)計    丹龍抗癡膠囊由丹參、三七、地龍、遠(yuǎn)志、淫羊藿等中藥組成。根據(jù)方中藥材所含主要成分

8、的理化性質(zhì),并考慮中醫(yī)傳統(tǒng)提取方法多為群藥共煎法,為最大限度地使方中藥材所含有效成分浸出,確定該制劑藥材的提取工藝路線為：丹參、三七、遠(yuǎn)志用乙醇為溶劑,采用回流法提取,藥渣再與淫羊藿等藥材合并,用水煎法提取。2.2  分析測試方法    浸膏得量測定：精密吸取各次提取液各50 mL,置于恒量的蒸發(fā)皿中,于水浴上蒸干,105 干燥3 h,移置干燥器中冷卻30 min,迅速精密稱重,計算浸膏得量。    丹參酮A,人參皂苷Rb1、Rg1,淫羊藿苷含量測定方法見文獻(xiàn)1。2.3  丹參、遠(yuǎn)志、三七醇提工藝的研究2.3.1&

9、#160; 浸泡時間的優(yōu)選取丹參3 g、遠(yuǎn)志2 g、三七粗顆粒1 g混勻,分別于60%、75%、90%乙醇浸泡0、15、30、45、60 min后抽濾凈藥材表面可流動溶劑,并對浸泡后藥材稱重,比較浸泡后藥材重量變化,以得到最佳藥材浸泡時間(即藥材被溶媒完全潤透,重量不再增加的時間點),結(jié)果丹參、遠(yuǎn)志、三七的最佳浸泡時間為45 min。2.3.2  提取次數(shù)的優(yōu)選 按處方比例取丹參、遠(yuǎn)志、三七適量,加75%乙醇浸泡45 min,加熱回流提取3次,加醇量分別為藥材量的8、6、6倍,提取時間分別為1.5、1.0、1.0 h,分別收集各次提取液,準(zhǔn)確量取體積。從上述3份提取液中各取

10、適量測定浸膏得量、丹參酮A浸出量及人參皂苷Rb1、Rg1浸出量,結(jié)果以浸膏得量,丹參酮A浸出量,人參皂苷Rb1、Rg1浸出量為考察指標(biāo),第3次提取的量所占比例均很少,故可確定提取次數(shù)為2次。2.3.3  正交試驗優(yōu)選丹參、遠(yuǎn)志、三七提取工藝條件2.3.3.1  試驗設(shè)計 在浸泡時間、提取次數(shù)確定的基礎(chǔ)上,選擇乙醇濃度(A)、加醇量(B)、提取時間(C)為考察因素,以丹參酮A浸出量和人參皂苷Rb1、Rg1浸出量及浸膏得率為評價指標(biāo),用L9(34)正交表安排試驗方案,所選因素水平安排見表1。表1  醇提因素水平表（略）2.3.3.2  試驗方法與結(jié)

11、果取丹參(丹參酮A的含量為0.24%)18 g,三七(人參皂苷Rb1、Rg1含量為0.40%)6 g,遠(yuǎn)志12 g,按正交設(shè)計表安排試驗,分別加乙醇浸泡45 min,回流提取2次,收集提取液,合并,濃縮定容至500 mL,得各樣品溶液。取樣進(jìn)行浸膏得率,人參皂苷Rb1、Rg1浸出量,丹參酮A浸出量的測定,結(jié)果見表2,方差分析見表3表5。表2  醇提正交試驗安排及結(jié)果（略）表3  醇提浸膏得率方差分析表（略）注：F0.05(2,2)=19.00表4  丹參酮A浸出量方差分析表（略）注：F0.05(2,2)=19.00,F0.01(2,2)=99.00表5 

12、 人參皂苷Rb1、Rg1浸出量方差分析表（略）注：F0.05(2,2)=19.00,F0.01(2,2)=99.00    由上述直觀分析與方差分析結(jié)果可知：以浸膏得率為評價指標(biāo),三因素對浸膏得率均無顯著性影響,而以丹參酮A浸出量為評價指標(biāo),最佳提取工藝為A1B3C2,其中A為主要因素,其次是B、C,又以人參皂苷Rb1、Rg1浸出量為評價指標(biāo),最佳提取工藝為A2B3C2,其中A為主要因素,其次是B、C。    綜上所述,結(jié)合實際生產(chǎn)情況,醇提最佳提取工藝擬定為A2B3C2,但此方案在正交表中不存在,因此,尚需通過驗證試驗予以確認(rèn)。為此

13、,將A2B3C2方案分別與正交表中以丹參酮A為評價指標(biāo)的最佳提取方案A1B3C3和正交表中以人參皂苷Rb1、Rg1為評價指標(biāo)的最佳提取方案A3B3C2進(jìn)行比較,以確定最佳提取工藝條件。2.3.4  驗證試驗 將A2B3C2、A1B3C3、A3B3C2按各自的提取條件嚴(yán)格進(jìn)行提取操作,分別收集提取液,定容至500 mL,得樣品液,將三份樣品平行四份按上述正交試驗的操作方法,測定丹參酮A浸出量和人參皂苷Rb1、Rg1浸出量,結(jié)果見表6。表6  驗證試驗結(jié)果（略）    由表6可知,A2B3C2與A1B3C3比較,丹參酮A浸出量相差無幾,而

14、人參皂苷Rb1、Rg1浸出量卻明顯高于A1B3C3方案；A2B3C2與A3B3C2方案比較,結(jié)果則相反。這表明A2B3C2方案均優(yōu)于正交表中的A1B3C2和A3B3C2方案。因此,丹龍抗癡膠囊的最佳醇提工藝可確定為：提取時加75%乙醇,加熱回流提取2次,加醇量分別為藥材量的8、6倍,提取時間分別為1.5、1.0 h。2.4  淫羊藿、地龍等藥材的提取工藝研究2.4.1  提取次數(shù)的優(yōu)選 取淫羊藿(淫羊藿苷含量為1.07%) 20 g、地龍10 g,與處方比例的丹參、三七、遠(yuǎn)志醇提取后的藥渣合并,加水浸泡1 h,加熱回流提取3次,加水量分別為藥材的10、8、6倍的量

15、,提取時間分別為1.5、1、1 h。分別收集各次提取液,準(zhǔn)確量取體積。從上述3份提取液中各取適量測定浸膏得量、淫羊藿苷浸出量,結(jié)果在第3次提取液中,無論浸膏得率還是淫羊藿苷浸出量所占比例均已較低；因此,可確定淫羊藿、地龍等藥材以2次水提為宜。2.4.2  正交試驗優(yōu)選淫羊藿、地龍等藥材的水提工藝條件2.4.2.1  試驗設(shè)計  在確定水提次數(shù)的基礎(chǔ)上,選擇浸泡時間(A)、溶劑量(B)、提取時間(C)為考察因素,以浸膏得率、淫羊藿苷浸出量為考察指標(biāo),選用L9(34)正交表,所選因素水平見表7。表7  水提因素水平表（略）2.4.2.2  試驗方法

16、與結(jié)果 取淫羊藿(淫羊藿苷含量為1.07%)20 g、地龍10 g,與處方比例的丹參、三七、遠(yuǎn)志醇提取后的藥渣合并,按正交試驗設(shè)計表的安排,分別加水浸泡,回流提取2次,收集提取液,濃縮,定容至500 mL,得各樣品液,取樣進(jìn)行浸膏得率和淫羊藿苷浸出量的測定。結(jié)果見表8,方差分析見表9表10。表8  水提正交試驗安排及結(jié)果（略）表9  水提浸膏得率方差分析表（略）注：F0.05(2,2)=19.00表10  淫羊藿苷浸出量方差分析表（略）注：F0.05(2,2)=19.00    由上述直觀分析和方差分析結(jié)果可知：以浸膏得率為

17、評價指標(biāo),三因素對其均無顯著性影響,而以淫羊藿苷浸出量為評價指標(biāo),最佳提取工藝為A1B1C1,其中B為主要影響因素,其次是C、A。因此,丹龍抗癡膠囊的最佳水提工藝可確定為：浸泡0.5 h,提取2次,加水量分別為12、10倍,提取時間分別為2、1.5 h。     11-05-10 16:33:00     作者：譚銀合 孫維廣 譚弘    編輯：studa202.5  中試放大試驗    按照研究確定的提取工藝路線及參數(shù)進(jìn)行,丹龍抗癡膠

18、囊3批中試規(guī)模的驗證試驗,各項指標(biāo)檢驗合格,試驗結(jié)果表明,丹龍抗癡膠囊的提取工藝基本穩(wěn)定可行。3  結(jié)論    丹龍抗癡膠囊提取工藝優(yōu)選結(jié)果：丹參、三七、遠(yuǎn)志以75%乙醇為溶媒,回流提取2次,加醇量分別為8、6倍,提取時間分別為1.5、1.0 h。其藥渣再與淫羊藿等其余3味藥材合并浸泡0.5 h,提取2次,加水量分別為12、10倍量,提取時間分別為2、1.5 h。該提取工藝經(jīng)過驗證,穩(wěn)定可行。4  討論    丹龍抗癡膠囊由丹參、三七、地龍、遠(yuǎn)志、淫羊藿等中藥組成。丹參為方中君藥,主含有效成分有2類：一類為脂溶性萜

19、醌類成分,如丹參酮A；另一類為水溶性酚性酸類成分,如丹參素原兒茶醛等。現(xiàn)代臨床和藥理研究表明,丹參脂溶性成分對冠脈供血不良、冠心病、心絞痛有緩解作用,并能提高耐缺氧能力；丹參水溶性成分具有纖溶性作用和抗心肌缺血,此二類成分均是治療血管性癡呆病的物質(zhì)基礎(chǔ)。據(jù)報道,丹參采用先醇提后水提的方法提取,其脂溶性與水溶性有效成分均能較好地浸出2。三七的主要有效成分為三萜皂苷,是與人參皂苷類似的一類成分,這類成分有人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rg1、Rg2、Rg3 ,三七皂苷R1、R2、R3、R4、R6等3-4。遠(yuǎn)志的主要成分亦為三萜皂苷類,如遠(yuǎn)志皂苷A、B、C、D等5。對三萜皂苷類,一般用醇類溶劑提取6。另據(jù)報道,遠(yuǎn)志甲醇提取物中分離出的?；?、占噸酮糖苷與遠(yuǎn)志的抗癡呆活性有關(guān)3。而淫羊藿主含淫羊藿苷等黃酮苷類成分,菟絲子主含