五味子質(zhì)量?jī)?yōu)劣對(duì)五味子甲素、乙素含量影響的研究 論文正文

1、畢 業(yè) 論 文（設(shè)計(jì)）題 目 五味子質(zhì)量?jī)?yōu)劣 對(duì)五味子甲素、乙素含量影響的研究 指導(dǎo)老師 專業(yè)班級(jí) 生物技術(shù)及應(yīng)用0701 姓 名 學(xué) 號(hào) 2010年5月30 日摘要人工經(jīng)驗(yàn)鑒別五味子質(zhì)量?jī)?yōu)劣與現(xiàn)代分析手段檢測(cè)所得結(jié)論間的相互關(guān)系。本文用高效液相的分析方法，甲醇超聲處理五味子樣品，甲醇乙腈水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm，30個(gè)不同批次的五味子藥材作為研究對(duì)象，對(duì)五味子中的有效成分甲素、乙素進(jìn)行鑒定分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同批次的五味子中五味子甲素含量變化較大，并與人工經(jīng)驗(yàn)判別有一定相關(guān)性，一等樣品的五味子甲素含量在1.6mg/g以上，二等樣品均低于0.5mg/g，中間較難判斷等級(jí)的樣品差別較大， 高

2、的甲素含量為4.15mg/g，低的甲素含量為0.18mg/g，而乙素含量基本比較穩(wěn)定，在1.6mg/g-2.0mg/g之間。因此經(jīng)驗(yàn)判別對(duì)藥材優(yōu)劣的判斷是一種可靠的方法，企業(yè)可以利用這種快速和直觀的方法對(duì)藥材進(jìn)行初步而有效的篩選，提高企業(yè)生產(chǎn)效率，節(jié)省開支。關(guān)鍵詞：五味子；質(zhì)量?jī)?yōu)劣；五味子甲素；五味子乙素目 錄引言. 11材料與方法.11.1實(shí)驗(yàn)材料.11.2實(shí)驗(yàn)試劑.21.3實(shí)驗(yàn)儀器. 21.4實(shí)驗(yàn)方法.31.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備. 31.6供試品檢測(cè)結(jié)果.31.7線性關(guān)系.42結(jié)果與分析.53討論 .6參考文獻(xiàn) .7引言五味子甲素和乙素是五味子中的一類主要有效成分，具有抗氧化、抗腫瘤、護(hù)肝降酶

3、、抑制腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性的產(chǎn)生、對(duì)抗心肌灌注性損傷等多種生物學(xué)活性。是諸多五味子藥材及其制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)中的一個(gè)通常采用的質(zhì)量指標(biāo)，多種含有五味子的中成藥用其作為指標(biāo)性成分進(jìn)行質(zhì)量控制。本文研究五味子質(zhì)量?jī)?yōu)劣對(duì)五味子甲素、乙素含量的影響。五味子甲素和乙素最常見的分析方法有薄層色譜掃描法1,2,反相高效液相色譜法3-5，高速逆流色譜法6等。五味子乙素在254nm處有最大的吸收峰，因此常采用254nm處的吸收波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。HPLC法是目前最常用的分析方法。據(jù)報(bào)道，最佳的兩種樣品的預(yù)處理方法是甲醇或乙醇回流法和甲醇或乙醇超聲法。流動(dòng)相體系采用甲醇水（酸水或鹽溶液體系）7，乙腈水體系8，乙腈水甲醇體系9等

4、。本研究采用甲醇超聲處理五味子樣品，甲醇乙腈水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)選224nm。1 材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)材料為采購(gòu)時(shí)間、采購(gòu)地點(diǎn)以及質(zhì)量等級(jí)不同的北五味子。共選取五味子30批，產(chǎn)地主要為黑龍江、吉林、遼寧等東北三省。采購(gòu)時(shí)間為2008年6月-2009年3月之間。被分析的五味子對(duì)象具體編號(hào)情況如表1.1。邀請(qǐng)企業(yè)與浙江省藥檢所有經(jīng)驗(yàn)的藥物鑒別人員按照北五味的外觀進(jìn)行分等，鑒別時(shí)采用雙盲法，綜合幾位判定人員的意見進(jìn)行結(jié)果判定。具體的參照標(biāo)準(zhǔn)為：一等五味子呈不規(guī)則球形或橢圓形，表面紫紅色或紅褐色, 皺縮, 肉厚, 質(zhì)柔潤(rùn)，內(nèi)有腎形種子12粒果肉味酸, 種子有香氣,味辛微苦干癟臉不超過(guò)2%；二

5、等五味子表面黑紅, 暗紅或淡紅色, 皺縮, 肉較薄, 干癟粒不超過(guò)20%，其它同一等。以油性大、紫紅色、肉厚、氣味濃者為質(zhì)量最佳。表1.1北五味子的具體情況及編號(hào)編號(hào)采購(gòu)地采購(gòu)時(shí)間編號(hào)采購(gòu)地采購(gòu)時(shí)間1黑龍江2008年6月16吉林2009年3月2黑龍江2008年6月17吉林2009年3月3遼寧2008年6月18吉林2009年3月4吉林2008年6月19黑龍江2009年3月5吉林2008年6月20黑龍江2009年3月6北潮2008年6月21遼寧2009年3月7磐安2009年1月22黑龍江2009年3月8磐安2009年1月23遼寧2009年3月9磐安2009年1月24遼寧2009年3月10磐安200

6、9年3月25蒼南2009年3月11磐安2009年3月26蒼南2009年3月12磐安2009年3月27長(zhǎng)白山2009年3月13磐安2009年3月28長(zhǎng)白山2009年3月14磐安2009年3月29長(zhǎng)白山2009年3月15吉林2009年3月30長(zhǎng)白山2009年3月1.2實(shí)驗(yàn)試劑乙睛(色譜純，德國(guó)Merck公司)甲醇(色譜純，德國(guó)Merck公司)哇哈哈礦泉水甲醇(分析純，衙州巨化試劑)微孔濾膜(油膜，0.4m)五味子甲素對(duì)照品（0764-200807，供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）五味子乙素對(duì)照品(117065-200707，供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供)1.3實(shí)驗(yàn)儀器電子分析

7、天平(梅特勒·托利多AL-204分析天平，稱量范圍0.01g-200g)戴安高效液相色譜儀；Diamonsil C18柱(250x4.6mm, 5um; Dikma)超聲波清洗器(KQ-100型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器廠)架盤藥物天平:（馬頭牌BP-II型，稱量范圍0.5g一500g，上海醫(yī)用激光儀器廠）150mL磨口具塞錐形瓶;10mL的容量瓶1.4實(shí)驗(yàn)方法精確稱取0.5g五味子樣品粗粉(過(guò)2號(hào)篩)加入25mL甲醇后稱重，超聲30min后加甲醇補(bǔ)重，靜置30min后取上清液用0.4m的微孔濾膜油膜過(guò)濾，取第三次的濾液作為供試液待測(cè)。檢測(cè)與分析：色譜柱為Diamonsil C18

8、柱（250×4.6mm，5m），流動(dòng)相為甲醇-水-乙腈(70:23:7)，流速為1.0mL·min-1，柱溫為25，檢測(cè)波長(zhǎng)為224 nm，進(jìn)樣量10L，保留時(shí)間為30min。1.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備五味子甲素乙素標(biāo)準(zhǔn)液制備：精密稱取6.8mg五味子甲素、8.2mg五味子乙素加入到10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，超聲溶解后于4條件下保存。分別將儲(chǔ)備液稀釋為3.4，6.8，10.2，13.6，17.0 mg·100mL-1的甲素標(biāo)準(zhǔn)溶液和4.1，8.2，12.3，16.4，20.5mg·100mL-1的乙素標(biāo)準(zhǔn)溶液。將標(biāo)準(zhǔn)溶液用0.4m的微孔濾膜油膜過(guò)濾后

9、進(jìn)樣量ll按上述分析條件進(jìn)行HPLC分析。以五味子甲素和乙素的濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得濃度與峰面積關(guān)系的工作曲線圖1.1。五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)品五味子甲素標(biāo)準(zhǔn)品圖1.1 五味子甲素與五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖1.6供試品檢測(cè)結(jié)果高效液相的分析方法，用甲醇超聲處理五味子樣品，甲醇乙腈水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm，30個(gè)不同批次的五味子藥材作為研究對(duì)象，對(duì)五味子中的有效成分甲素、乙素進(jìn)行鑒定分析，其中一個(gè)供試品圖譜，如圖1.2。五味子乙素供試品五味子甲素供試品圖1.2 供試品色譜圖1.7線性關(guān)系以五味子甲素和乙素的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得出五味子甲素和乙素峰面積與濃度的線性關(guān)系

10、見圖1.3、圖1.4。五味子甲素標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性方程Y=8.0441X-0.35，R2=0.9999，結(jié)果表明五味子甲素含量在0.034到 0.170mg·ml-1范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系，見圖1.3；五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性方程Y=3.3244X+0.03，R2=0.9994，結(jié)果表明五味子乙素含量在0.041到 0.205mg·ml-1范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系，見圖1.4。圖1.3 五味子甲素的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖1.4 五味子乙素的標(biāo)準(zhǔn)曲線2 結(jié)果與分析表2.1 經(jīng)驗(yàn)鑒別樣品的等級(jí)與樣品中五味子甲素與乙素含量的關(guān)系表等級(jí)編號(hào)五味子甲素含量（mg/g）五味子乙素含量（m

11、g/g）二等20.231.75二等30.391.68二等40.431.56二等60.281.88二等90.461.75二等120.351.86二等160.261.92二等200.341.69二等220.261.78二等270.321.86一等71.951.79一等111.681.82一等151.831.93一等172.251.78一等182.781.86一等191.921.95一等243.561.96一等252.631.88一等292.121.94一等301.761.72中間10.181.64中間51.941.78中間82.181.85中間101.881.84中間131.641.76中間141

12、.981.86中間212.641.94中間233.381.83中間263.141.96中間284.151.86根據(jù)1.4的實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)30種北五味子樣品進(jìn)行了五味子甲素和乙素含量的檢測(cè)，結(jié)果見表2.1。總體上來(lái)說(shuō)，不同批次的五味子中五味子甲素含量變化較大，并與人工經(jīng)驗(yàn)判別有一定相關(guān)性，而乙素含量基本比較穩(wěn)定，在1.6mg/g-2.0mg/g之間，含量與人工經(jīng)驗(yàn)判別的相關(guān)性不是很大。根據(jù)人工經(jīng)驗(yàn)判別的30個(gè)樣品中，歸結(jié)為一等的10個(gè)樣品的五味子甲素含量均在1.6mg/g以上；而歸結(jié)為二等的10個(gè)樣品的五味子甲素含量均低于0.5mg/g。而中間較難判斷等級(jí)的樣品的五味子甲素含量差別較大， 高的28

13、號(hào)樣品五味子甲素含量為4.15mg/g，低的1號(hào)樣品五味子甲素含量為0.18mg/g。3 結(jié)論在分級(jí)明顯的五味子樣品中，人工經(jīng)驗(yàn)鑒別的分級(jí)與五味子甲素含量呈現(xiàn)出一定的相關(guān)性，由于受人工經(jīng)驗(yàn)判別的局限，對(duì)于有些藥材的細(xì)分并不能真實(shí)反應(yīng)藥材的真實(shí)質(zhì)量，因此五味子甲素含量的分級(jí)比人工經(jīng)驗(yàn)鑒別的結(jié)果更加具有說(shuō)服性。而五味子乙素由于含量變化不大不能反應(yīng)出樣品質(zhì)量的等級(jí)區(qū)別。因此，五味子甲素含量可以作為五味子藥材質(zhì)量?jī)?yōu)劣評(píng)價(jià)的指標(biāo)之一。根據(jù)已經(jīng)測(cè)定的三十批五味子樣品，建議將五味子甲素含量列入五味子的質(zhì)量?jī)?yōu)劣評(píng)價(jià)指標(biāo)體系中來(lái)。按照上文方法測(cè)定的結(jié)果，優(yōu)等品的五味子甲素含量不得低于1.6mg/g，而五味子甲素

14、含量低于0.5mg/g的五味子應(yīng)該劃入劣等品等級(jí)中。五味子甲素含量介于兩者之間的需結(jié)合其他指標(biāo)進(jìn)行質(zhì)量分級(jí)。參考文獻(xiàn)1 趙恒, 徐景仁. 北五味子及其制劑三苓丹膠囊中五味子乙素的薄層光密度法測(cè)定J. 藥物分析雜志. 1995, 15 (1): 33-35. 2 王勝春, 賀雪梅, 樊亞萱. 薄層掃描法測(cè)定五靈膠囊中五味子乙素的含量J. 第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 1998, (4): 478-479.3 黃萍, 王體強(qiáng). HPLC法測(cè)定護(hù)肝顆粒劑中五味子乙素含量的探討J. 重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2002, 27 (2): 167-170.4 Meijuan Xu, Guangji Wang, Haita

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