EBV感染-PPT課件

1、EBEB病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷方法病毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷方法 及合理運(yùn)用及合理運(yùn)用兒童兒童EBV感染診治中存在的問題感染診治中存在的問題 EBV實(shí)驗(yàn)室診斷方法的選擇和結(jié)果解讀 存在誤區(qū) IM的抗病毒治療較為混亂 重癥EBV相關(guān)疾?。–AEBV、EBV-HLH） 等診斷和治療缺乏經(jīng)驗(yàn)EpsteinBarrEpsteinBarr virus(EBV)virus(EBV) 1964年發(fā)現(xiàn)，DNA病毒，皰疹 病毒 人群感染率高，終身潛伏感染， 具有感染感染- -潛伏潛伏- -活化活化的特性 腫瘤相關(guān)病毒，每年EBV相關(guān) 腫瘤死亡病例達(dá)15-20萬 與很多疾病相關(guān)，幾乎可引起 所有臟器和組織的相關(guān)疾病 細(xì)胞

2、免疫非常重要Khan G et al. Infectious Agents and Cancer, 2014, 9:38.EBEB病毒持續(xù)感染示意圖病毒持續(xù)感染示意圖原發(fā)感染后， EBV 在人體B淋巴細(xì)胞建 立潛伏感染，只表 達(dá)潛伏抗原，受感 染者成為終生病毒 攜帶者EBV健康攜帶者咽 部不定時(shí)排毒 在機(jī)體免疫功能下 降和某些因素觸發(fā) 下，潛伏的EBV可 以被再激活，引起 病毒復(fù)制及臨床癥 狀Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305319EBV感染的流行病學(xué) 在我國(guó)，EBV的原發(fā)感染的高峰年齡在兒童，10歲時(shí)90%以上血清陽性轉(zhuǎn)化0.200.60.4EBV血清抗體陽性轉(zhuǎn)化率

3、10.80-3m10y3m-1y1y-3y3y-6y 6y-10y年齡百分率CA-IgG NA-IgG CA-IgM中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒雜志，2008,22（1）：30-32北京兒童醫(yī)院資料傳染性單核細(xì)胞增多癥（Infectious mononucleosis，IM）慢性活動(dòng)性EB病毒感染（Chronic active EBV infection，CAEBV）EB病毒相關(guān)性嗜血細(xì)胞綜合征（EBV-associated hemophagocytic syndrome, EBVAHS)伴性淋巴增殖綜合征（X-linked lymphoproliferative syndrom）鼻咽癌（Nasopha

4、ryngeal carcinoma）Burkitts 淋巴瘤（Burkitts lymphoma）何奇金淋巴瘤（Hodgkins lymphoma）其他：腦炎，腎炎，間質(zhì)性肺炎，肝炎，多發(fā)性硬化臨床實(shí)踐診斷EBV感染時(shí)需要回答的問題 是否感染EBV? EBV感染的時(shí)相？ 是否EBV活動(dòng)性感染？ 組織或器官中EBV感染的細(xì)胞定位如何？EBVEBV感染相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)感染相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)血常規(guī)：淋巴細(xì)胞比例50%（學(xué)齡以上兒童）嗜異凝集抗體異型淋巴細(xì)胞EBV特異性抗體熒光定量PCR檢測(cè)EBV核酸EBERs原位雜交實(shí)驗(yàn)：EBV感染受累的組織學(xué)證據(jù)特異性 指標(biāo)非特異 性指標(biāo)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)一實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)一：嗜

5、異凝集抗體嗜異凝集抗體 血清嗜異凝集抗體檢測(cè)也稱“Monospot”試驗(yàn)，1932年引 入臨床實(shí)踐診斷傳染性單核細(xì)胞增多癥該為IgM抗體，在病程第12周出 現(xiàn)，持續(xù)約6個(gè)月在青少年原發(fā)性EBV感染中其陽性 率可達(dá)80-90，約10的青少年缺乏對(duì)嗜異性抗體的陽性反應(yīng)小于12歲者，EBV感染IM患者該試 驗(yàn)的陽性率為25%-50%J Appl Clin Pediatr, 2007,22(22)N Engl J Med. 2010;362:1993-2000實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)二實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)二：異型淋巴細(xì)胞異型淋巴細(xì)胞 外周血異型淋巴細(xì)胞比例10%1、在西方國(guó)家，其診斷IM的敏感性為75%，特異性為92%2、學(xué)

6、齡前兒童異型淋巴細(xì)胞比例較低。外周血異型淋巴細(xì)胞 比例 10%的病例在學(xué)齡前兒童EBV-IM中只有41.8%；對(duì)于較 大年齡兒童異型淋巴細(xì)胞的診斷意義更大N Engl J Med. 2010;362:1993-2000World J Pediatr, 2011, 7(1): 45-49實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)三實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)三: : EBVEBV特異性抗體特異性抗體 EBV-CA-IgM 檢測(cè)1、近期EBV感染的指標(biāo)，廣泛應(yīng)用于臨床2、EBV感染的血清學(xué)反應(yīng)復(fù)雜多樣，有的病例抗EBV-CA-IgM產(chǎn)生 延遲，有的持續(xù)缺失或長(zhǎng)時(shí)間存在3、12%-17%大于16歲的青少年原發(fā)EBV感染后不能檢測(cè)到CA-IgM 抗體

7、，且4歲以下幼兒CA-IgM抗體水平低，持續(xù)時(shí)間短，易見假陰性 結(jié)果Gao Li wei, et al. Chin J Evid Based Pediatr, 2011,6(6):467-470. Robertson P, J Med Virol, 2003,70(4): 617-623單份血清VCA-IgM在診斷 小年齡兒童原發(fā)性EBV感染IM的局限性Pediatrics International (2010) 52, 536540原發(fā)EBV感染的體液免疫原發(fā)性EBV感染過程中首先產(chǎn) 生針對(duì)衣殼抗原（capsid antigen，CA）IgG和IgM（抗 CA-IgG/IgM） 在急性感染

8、的晚期，抗早期抗原（early angtigen，EA）抗體出現(xiàn)在恢復(fù)期晚期，抗核抗原（nuclear antigen，NA）抗體 產(chǎn)生抗CA-IgG和抗NA-IgG可持續(xù)終身JMD, 2008, 10(4):279-292不同時(shí)間段的抗體譜不同5% 的EBV新近感染 抗CA抗（IgM）陰性在罕見的病例中抗CA 抗體(IgM)會(huì)持續(xù)陽性20-30% 的EBV新近感染 抗 EA抗體（IgG）陰性抗EBNA抗體(IgG)陰性體液免疫的特殊情況實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)四實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)四：EBVEBV病毒核酸檢測(cè)病毒核酸檢測(cè)Real-time PCR是目前最主要的監(jiān)測(cè)EBV載量的方法，可以指導(dǎo)治 療和判斷療效，如PTL

9、D/EBV-HLH/CAEBV等樣本：血樣本（包括全血、單個(gè)核細(xì)胞、或血清/血漿），非鼻 咽拭子或鼻咽吸取液，不同疾病所需的適宜樣本不同注意：Real-time PCR陽性，只能提示機(jī)體存在活動(dòng)性EBV感 染或病毒活動(dòng)性復(fù)制，不能鑒別是原發(fā)EBV感染還是既往EBV感染 再激活，如淋巴瘤患者、免疫抑制患者、HIV感染者，因此，單 純Real-time PCR陽性在IM診斷中價(jià)值有限實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)五：實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)五：EBERSEBERS原位雜交試驗(yàn)原位雜交試驗(yàn) EBV潛伏感染的細(xì)胞含有大量的EBER1/EBER2（EBERS） 轉(zhuǎn)錄子 每個(gè)EBV潛伏感染的細(xì)胞含有大約106拷貝EBERS，被認(rèn) 為EBV

10、潛伏感染的最好標(biāo)志物 原位雜交試驗(yàn)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中EBERS是診斷腫瘤是否EBV 相關(guān)的金標(biāo)準(zhǔn)陽性對(duì)照陰性對(duì)照EBV-EBERS陽性樣本陰性樣本不同EB病毒相關(guān)腫瘤中EBERS的檢出情況Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305319. 是否感染EBV? EBV感染的時(shí)相？臨床實(shí)踐需要回答的問題（一）EBV血清抗體 譜檢測(cè)HH Balfour, et al. Clinical & Translational Immunology, 2015, 4(2) , e33.EBV抗體譜檢測(cè)，可以初步判斷是否感染抗體譜檢測(cè)，可以初步判斷是否感染EBV，以及感，以及感 染的大致時(shí)間染的大致

11、時(shí)間如如EBNA-IgG陽性，提示機(jī)體至少已感染陽性，提示機(jī)體至少已感染EBV近近2-3個(gè)月個(gè)月免疫功能正?；颊呙庖吖δ苷；颊逧BVEBV血清學(xué)特點(diǎn)血清學(xué)特點(diǎn)抗抗EBV抗體抗體VCA-IgMVCA-IgGEBNA-IgG解釋解釋陰性陰性陰性無免疫反應(yīng)陽性陰性陰性急性感染或非特異反應(yīng)1陽性陽性陰性急性感染陰性陽性陽性既往感染陰性陽性陰性急性感染或既往感染1陽性陽性陽性原發(fā)感染晚期或再激活1陰性陰性陽性既往感染或非特異反應(yīng)注：1 有待進(jìn)一步確定World J Virol,2012,1(1):31-43.CAEBV患者EBV抗體檢測(cè)Chin Med J 2009; 122(3):262-266.C

12、AEBVCAEBV患者患者EBVEBV抗體譜呈現(xiàn)多種類型，多數(shù)患者抗體譜呈現(xiàn)多種類型，多數(shù)患者 EA-IgGEA-IgG陽性，提示活動(dòng)性感染陽性，提示活動(dòng)性感染EBV-HLH患者的EBV抗體檢測(cè)Chin Med J. 2010;123(11) :1426-1430.臨床實(shí)踐需要回答的問題（二）臨床實(shí)踐需要回答的問題（二） 機(jī)體是否存在EBV活動(dòng)性感染？EBV核酸檢測(cè) 何種標(biāo)本送檢？血清/血漿？全血？PBMC?不同疾病需要的送檢標(biāo)本不同J Mol Diagn. 2008,10(4):279-92.EBVEBV既往感染的健康人群，血清既往感染的健康人群，血清/ /低血漿中檢測(cè)不到低血漿中檢測(cè)不到E

13、BV- EBV- DNA DNA ；但全血；但全血/PBMC/PBMC標(biāo)本中常有拷貝的標(biāo)本中常有拷貝的EBV-DNAEBV-DNARev. Med. Virol. 2008; 18: 305319不同不同EBVEBV相關(guān)疾病中，相關(guān)疾病中，EBVEBV核酸在外周血中存在區(qū)間不同核酸在外周血中存在區(qū)間不同Expert Rev. Clin. Immunol. 2013, 9(2), 139151. IM患者外周血中EBV載量在2周內(nèi)達(dá)到峰值，至病程14天，多數(shù)IM 患者血清中已檢測(cè)不到病毒核酸，病程22天后，所有IM血清中均 檢測(cè)不到EBV核酸J Med Virol, 2003, 70(4): 6

14、17-623但外周血單個(gè)核細(xì)胞中EBV核酸陽性可持續(xù)6個(gè)月以上，需要需要1 1年年 或更長(zhǎng)時(shí)間達(dá)到或更長(zhǎng)時(shí)間達(dá)到EBVEBV健康攜帶者的全血健康攜帶者的全血EBV-DNAEBV-DNA水平（水平（1-501-50拷貝拷貝 EBV-DNA/10EBV-DNA/106 6 個(gè)個(gè)WBCWBC）J Infect Dis, 2013, 207: 80-88J Mol Diagn. 2008,10(4):279-92標(biāo)本：血清或血漿，不建議使用全血或PBMC標(biāo)本重癥病例監(jiān)測(cè)EBV載量有助于鑒別EBV-HLH絕大多數(shù)CAEBV患者PBMC中EBV-DNA水平高于102.5拷貝/g DNA， CAEBV患者血

15、漿/血清中EBV-DNA水平與病情嚴(yán)重程度和預(yù)后有關(guān)CAEBV患者血漿和PBMC中EBV核酸載量存線性關(guān)系CAEBV患者EBV-DNA檢測(cè)Blood ,2001 , 98 : 280-286EBV-HLH患者外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）和血漿/血清均含有很高的 EBV-DNA載量，監(jiān)測(cè)EBV-HLH患者血清中EBV-DNA載量有助于評(píng)估療效EBV-HLH患者EBV-DNA檢測(cè)Leukemia & Lymphoma, 2002, 43: 173-179臨床實(shí)踐需要回答的問題（三）臨床實(shí)踐需要回答的問題（三） 組織或器官中EBV感染的細(xì)胞定位如何？EBERs檢測(cè)J Hepatol. 2006, 44(5):879-85.EBERRISH 顯示，EBERs陽性的細(xì)胞為浸潤(rùn) 的淋巴細(xì)胞（如箭頭所 示），而肝細(xì)胞、膽管 上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中 未