雅培生化大型生化儀上崗培訓(xùn)

1、6 Sigma 在臨床生化檢測的應(yīng)用: Architect c16000 Kasal C, et al. Evaluation of general chemistry assays on the Abbott Architect c16000 clinical chemistry system. Clin Chem 2007;53(S);A175. Alb BCG 15.5 sAlbuminBCG = 15.5 s sAlbumin BCP = 24.3 s sTotal Bilirubin = 11.9 s sCalcium = 10.1 s sCholesterol = 9.1 s sC

2、reatinine = 5.8 s sGlucose = 5.9 s sTotal Protein = 14.8 s sTriglycerides = 14.2 s sLambert-Beers Law 當(dāng)一束平行的單色光通過一定均勻的某吸當(dāng)一束平行的單色光通過一定均勻的某吸收溶液時，該溶液對光的吸收程度收溶液時，該溶液對光的吸收程度 與吸光與吸光物質(zhì)的濃度物質(zhì)的濃度c和光通過的液層厚度和光通過的液層厚度b的乘積的乘積成正比。這種關(guān)系稱為朗伯成正比。這種關(guān)系稱為朗伯-比爾定律，其比爾定律，其數(shù)學(xué)表達式為數(shù)學(xué)表達式為 。 A = Kbc c=A *1/kb F=Kb A稱為吸光度，稱為吸光度，I

3、0和和I分別為入射光和透分別為入射光和透射光的強度，射光的強度，b為光通過的液層厚度，為光通過的液層厚度，c為為吸光物質(zhì)的濃度，吸光物質(zhì)的濃度，K為比例常數(shù)。為比例常數(shù)。b的單位的單位為為cm, 假設(shè)假設(shè)c的單位以的單位以mol/L表示，那么用表示，那么用表示表示K，稱為摩爾吸光系數(shù)，單位為稱為摩爾吸光系數(shù)，單位為L/(molcm)；假設(shè)；假設(shè)c的單位以的單位以g/L表示，那表示，那么用么用a表示表示K， a稱為吸光系數(shù)，單位為稱為吸光系數(shù)，單位為L/(gcm)。由于吸光度與吸光物質(zhì)濃度的。由于吸光度與吸光物質(zhì)濃度的關(guān)系最為重要，有時又被簡稱比爾定律。關(guān)系最為重要，有時又被簡稱比爾定律。光學(xué)檢

4、測原理 光路系統(tǒng)為直接光檢測，后分光，采用凹面衍射光柵，有16個檢測波長。光路系統(tǒng)主要組成有：鹵鎢燈，隔熱玻璃，凸鏡，Shutter，狹縫，反光鏡，光柵，線性硅二極管矩陣，前置放大板，數(shù)據(jù)處理板和CPU板等。光路組件將光聚焦后射入反響杯，當(dāng)反響杯中的物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反響時，其吸光度會發(fā)生變化。光經(jīng)狹縫到光柵后被分成不同的波長，線性硅二極管矩陣根據(jù)不同波長進行檢測。用單波長或雙波長測定每個讀數(shù)點，一般分析工程都使用雙波長檢測。 關(guān)于反響時間 反響時間包括反響杯轉(zhuǎn)盤的轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)動的時間和轉(zhuǎn)盤周圍組件的位置 每次轉(zhuǎn)動都發(fā)生在特定的時間和到達特定的位置 反響轉(zhuǎn)盤按逆時針方向每秒旋轉(zhuǎn)近1/4圈41個反響杯的位

5、置使反響杯到達特定位置 每一次旋轉(zhuǎn)，有41個反響杯會經(jīng)過光路系統(tǒng)，每個反響杯中的吸光度值都會被檢測到 關(guān)于反響的幾個點1.起始位置，樣品探針將樣品吸入反響杯 2. R1位置，試劑探針1將1試劑或樣品稀釋液參加反響杯 3.無動作 4.混勻位置1，樣品和1試劑或樣品稀釋液被混勻 45.反響杯經(jīng)過光路系統(tǒng)被讀取吸光度值5.以上總共轉(zhuǎn)了4個1/4圈共164個反響杯位置，此位置為起始1號位置的后一個反響杯的位置總共有165個反響杯。如果樣品需稀釋，在此位置樣品探針將稀釋樣品吸入放入1號位置的反響杯。 31.如此樣品進行ICT檢測，在此位置被ICT系統(tǒng)的探針從反響杯吸入稀釋樣品進行檢測 67.R2位置，試

6、劑探針2將2試劑參加反響杯此前時間為5.1分鐘 68.混勻位置2，樣品/試劑1和試劑2被混勻 6135.為持續(xù)旋轉(zhuǎn)孵育時間，當(dāng)反響杯每經(jīng)過一次光路系統(tǒng)將被讀取吸光度值，總共最多33次讀數(shù) 136164.反響杯清洗系統(tǒng)對反響杯進行8步清洗步驟 165.此位置為到重新使用的1號位置前的最后一個循環(huán)位置至此全部反響時間為9.6分鐘 REACTION TIME TABLEsample reagent 1 mix sample & R1Cuvette position:1246768132136reagent 2mixsample + R1 +R2last optic readwash star

7、tfirst4.594.954.54.8Sample + R1 (blank reading)Reaction (sample + R1+ R2) wash start18read point 1read point 17read point 18read point 33blank read optionreact. readtime / flex rate read optionstartR1firstTotal reaction time = 9.9 min. (same for each assay)- 10 -讀數(shù)點示意圖儀 器 詳 述 分配組件加液量分配組件加液量 光路光路 反響時

8、間反響時間常見報警常見報警- 6 -雅培診斷各分配組件加液量詳述各分配組件加液量詳述范圍范圍步進步進Sample Volume 樣本體積樣本體積:DS Vol = Diluted sample Volume:稀釋樣本稀釋樣本Reagent 1 Volume R1 試劑量試劑量:Reagent 2 Volume R2 試劑量試劑量 :Smartwash Volume 智能沖洗洗液量智能沖洗洗液量Water/Diluent Vol for Conc. Reagent:濃縮試劑使用水或稀釋液的量Total Volume in Cuvette:反響杯最小量及最大量反響杯最小量及最大量* Not inc

9、luding over aspiration volume* Water- and reagent volume entered determine the dilution ratio- 7 -Volume Tolerance:Volume range Min/Max Range Precision20 to 50 L nominal +/- 5% /= 2 %51 to 345 L nominal +/- 2.5% /= 0.5%2 to 35 L0.1 L steps2 to 15 L0.1 L steps20 to 345 L1.0 L steps20 to 345 l1 L step

10、s10 to 345 L1.0 steps*0 to 345 L1.0 L steps*Min. 160 lMax. 360 l光路詳述光路詳述波長波長SpecificationsOptions光徑光徑測量體積測量體積:讀數(shù)點讀數(shù)點:吸光度范圍吸光度范圍吸光度線性吸光度線性- 8 -16340 380 404 412 444 476 500 524 548 572 604 628 660 700 748 - 8045 mmMono-/Bichromatic(單或雙單或雙)Min. 160 LMax. 360 LMono Reag.: 1 33 pointsBi Reag.: 1 16 (Bla

11、nk) 17 33 (Reaction)1 33 (每每 18 秒秒)- 0.1 to 3.0 AbsWithin +/- 2 % at 2 Abs工程反響類型工程反響類型 - 11 - 終點法終點法: End up End down 速率法速率法 (Kinetik): Rate up Rate - down- 11 - 終點法終點法:反響到達平衡反響到達平衡單雙試劑都可以使用單雙試劑都可以使用 雙試劑推薦使用雙試劑推薦使用Self blank 反響類型反響類型 終點法終點法1反響類型終點法2 TimeSample Dispense + R1R2 addition =Reaction Star

12、t- 9 - 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 AbsorbanceTotal Abs Self blank Abs = 未知樣本濃度未知樣本濃度= D D Abs x cal Factor D D AbsTotal AbsD D AbsSelf blank Abs self blank 可讀點范圍A1A2Absorbance反響類型反響類型終點法終點法2 - 13 -R2 addition = Reaction StartSample Dispen

13、se + R1反響類型反響類型 速率法速率法 1- 11 - 酶類酶類 - 使用因子使用因子 物質(zhì)物質(zhì) - 定標(biāo)曲線定標(biāo)曲線 - 未到達平衡時段未到達平衡時段速率法速率法 :AbsorbanceTime反響類型反響類型 速率法速率法 2 For Enzymes 因子用于計算因子用于計算- 12 -Sample Dispense + R1R2 addition = Reaction StartA1 A2A3A4A5A6A7A8.未知待測物濃度未知待測物濃度 = D D Abs 變化變化 / min x Enzyme Factor or D D Abs 變化變化/ sec x Factor D D

14、 Abs change / min = U/LD D Abs change /sec = kat/L Flex Time Reading 酶的線性擴展 樣本稀釋樣本稀釋- 91 -雅培診斷速率法速率法 - FLEX TIME READING 彈性速彈性速率率AbsorbancePhotometric PointsSR1R2Flex Read TimeMain Read Time正常樣本正常樣本高濃度或高活性樣本高濃度或高活性樣本Abs RangeSubstrate Depletion- 92 -樣本稀釋加樣本加樣本( 2.0 to 35.0 L)用來稀釋的用來稀釋的反響杯反響杯用量反響的用量反

15、響的反響杯反響杯參加稀釋液參加稀釋液(10 to 345 L4.5 s x 1 cycle混勻混勻100 L或或 更多更多參加稀釋后的樣本參加稀釋后的樣本( 2.0 to 15.0 L)4.5 s x 1 cycle4.5 s x 2 cycles- 94 - 42 -樣本稀釋CC Application Training- 42 -空 白 選 擇 Self - Blank Reagent Blank 試劑空白試劑空白 (R1 + R2 + Water as Sample)(R 1 and Sample)- 43 -終點法終點法 /速率法速率法 試劑空白試劑空白Sample Dispensef

16、irst Reagent DispenseFirst Mix定標(biāo)過程使用定標(biāo)過程使用 R1 + R2 + (Sample) = 水, 生理鹽水或定標(biāo)液 APhotometric PointsAbsorbance 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 Second Reagent DispenseSecond MixBLK Abs Range- 44 -錯誤代碼錯誤代碼報警解釋報警解釋Blank Absorbance RangeBLK一個或多個空白定標(biāo)的吸

17、光度超出一個或多個空白定標(biāo)的吸光度超出BLK 限定的范圍限定的范圍終點法終點法 - SELF BLANKAbsorbancePhotometric PointSample Dispense first Reagent DispenseFirst MixSecond Reagent DispenseSecond Mix151016Self-BlankMain Read Time OptionD DAbs1720253033- 46 -CC Application TrainingFlaggings定標(biāo)定標(biāo)- 50 -定 標(biāo) 的 報 警 設(shè) 置7個檢測功能個檢測功能:試劑空白吸光度檢測 定標(biāo)重復(fù)次

18、數(shù)間的離散度檢測定標(biāo)重復(fù)次數(shù)間的離散度檢測 斜率檢測斜率檢測 Factor Comparison Check * SD 檢測檢測 Monotonic Check * Approximation Convergence Error *- 51 -終點法終點法 /速率法速率法 試劑空白試劑空白Sample Dispensefirst Reagent DispenseFirst Mix定標(biāo)過程使用定標(biāo)過程使用 R1 + R2 + (Sample) = Water, Saline or Calibrator APhotometric PointsAbsorbance 1 2 3 4 5 6 7 8 9

19、 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 Second Reagent DispenseSecond MixBLK Abs Range- 44 -錯誤代碼錯誤代碼報警解釋報警解釋Blank Absorbance RangeBLK一個或多個空白定標(biāo)的吸光度超出一個或多個空白定標(biāo)的吸光度超出BLK 限定的范圍限定的范圍定標(biāo)定標(biāo)離散度檢測離散度檢測AbsorbanceConcentrationC1C2calibrator deviation- 54 -代碼代碼解釋解釋Calibrator abso

20、rbance rangeDEV定標(biāo)幾次重復(fù)超出限定定標(biāo)幾次重復(fù)超出限定定標(biāo)定標(biāo) 斜率檢測斜率檢測AbsorbanceConcentrationBlankCalibrator 1min. & max. allowed Spani.e. between Blank and Cal 1xx- 56 -錯錯誤誤代代碼碼解釋解釋Slope CheckSPN空白與指定定標(biāo)點空白與指定定標(biāo)點濃度間斜率超出范濃度間斜率超出范圍圍定標(biāo)方法定標(biāo)方法定標(biāo)推薦定標(biāo)推薦: 在手冊上沒有官方的明確限定到定標(biāo)周期或換批號時，建議全線定標(biāo)換盒進行空白定標(biāo)選項: Blank 1-Point 2-Point Full-

21、31 -定標(biāo)設(shè)置定標(biāo)設(shè)置 體積體積 2PrintImportUpdateDeleteOKCancelDeletePrintUpdate Lot ChangeCtg. ChangeOver Interval2-Point1-PointBLK - Export C3C4C5C6C7C8 SampleBLK:C1C2S. VolDS.VolD.VolW.VolWater0 WCocain2 150Cocain3 30010.0Blank abs RangeCal DeviationBaseCALIBRATIONQCSmart WashRerun rulesOutline Calib. ModeBla

22、nk / Calib. ReplicationExtrapolation%SpanBLK. Span abs RangeInterval (H)/33LinearCocain4-10.00.00.00.00.0Assay Configuration - Cocain10.010.010.010.0Cocain55001000- 34 -PrintImportUpdateDeleteOKCancelDeletePrintUpdate Lot ChangeCtg. ChangeOver Interval2-Point1-PointBLK - Export C3C4C5C6C7C8 SampleBL

23、K:C1C2S. VolDS.VolD.VolW.VolWater0 WX9080.77 X9080.7710.02.010.0Blank abs RangeCal DeviationAssayConfiguration-OROSO BaseCALIBRATIONQCSmart WashRerun rulesOutline Calib. ModeBlank / Calib. ReplicationExtrapolation%SpanBLK. Span abs RangeInterval (H)/330SplineX908-10.00.00.00.00.0X908X9080.77 0.77 0.

24、77 20.035.035.010.025010.018510.010.010.010.015515090定標(biāo)設(shè)置定標(biāo)設(shè)置 自動稀釋自動稀釋 2- 37 -CC Application Training- 42 -Flaggings分析結(jié)果確認分析結(jié)果確認 ASSAY RESULT FLAGGING- 65 -REACTION VALIDITY CHECKS速率法速率法非線性非線性 & 終點法終點法 -AbsMaxVar 檢測最終吸光度的變異性- Absorbance Limit 檢測在讀數(shù)窗內(nèi)吸光度變化的線性-Colour Correction -顏色矯正-Reaction Chec

25、k-檢測免疫反應(yīng)的前代效應(yīng)（抗原過剩）終點法終點法 - 66 -終點法穩(wěn)定性的檢測終點法穩(wěn)定性的檢測S R1R2Blank Read optionpoint1 up to 17AbsorbancePhotometric PointsMain Read TimeEnd Stability = AbsMxVarMain Read Time option point 18 upt to 33- 67 -代碼代碼解釋解釋Main Read TimeABSAbs 超出超出 (0.1 3.0)AbsMaxVarRF讀數(shù)波動讀數(shù)波動速率速率/終點吸光度限定終點吸光度限定AbsorbanceAbs Upper

26、 limitAbs Lower limitS R1R2Photometric PointsMain ReadTimeNormal SampleHigh Concentration/highactivity Sample- 69 -ErrorInterpretationAbs LimitA#0Main/Flex Read time-none of the read points within defined abs limitsA#1Only 1 point within defined abs limitsA#2Only two points within defined abs limits

27、ABSAbs OOR (0.1 3.0)速率法速率法 -檢測在讀數(shù)窗內(nèi)吸光度變化的線性檢測在讀數(shù)窗內(nèi)吸光度變化的線性AbsorbancePhotometric PointsDADAfDADAbDADAReading TimeCalculation:D DAf - D DAbD DAx 100 % = rate of linearity %- 71 -代碼代碼解釋解釋LinearityRL %Main/Flex Read 讀數(shù)讀數(shù)窗口內(nèi)的點超出了以窗口內(nèi)的點超出了以下限定：前三點與后下限定：前三點與后三點的速率之比的范三點的速率之比的范圍圍終點終點/速率速率 -顏色矯正顏色矯正Calculati

28、on: (Abs Reagent 1 & Sample Blank) - (Abs Reagent Blank)Sample DispenseSecond Reagent DispenseAbs WindowAfter CorrectionBefore CorrectionFirst ReagentDispenseAbsorbance of Sample ColourReagent Blank AbsAbs. ofSample ColourAbsorbancephotometric pointsAbs Limit- 73 -終點終點/速率速率 -顏色矯正顏色矯正終點終點/速率速率 -顏

29、色矯正顏色矯正顏色矯正顏色矯正 例子例子Lower abs limitHigher abs limitRBlkR2R1+SMain Read Timeadj. Lower abs limit adj. higher abs limitR1+S - RBlkAbsorbancephotometric pointsR1+S- 74 -非線性非線性 前帶反響前帶反響- 79 -Photometric PointsRead TimeABError CodeInterpretationReaction CheckRCD超出前帶反應(yīng)限定超出前帶反應(yīng)限定ProzoneNormal電解質(zhì)系統(tǒng)的檢測原理 電解質(zhì)

30、檢測是測定樣品中的電位。使用集成晶片技術(shù)ICT來檢測鈉，鉀和氯。ICT技術(shù)是將固項的離子選擇電極組合在一個單一的晶片上，從而減少了在進行電極檢測中所需要的保養(yǎng)程序。ICT系統(tǒng)包括一個ICT的吸樣針和一個ICT的模塊。ICT吸樣針從反響杯中吸入稀釋樣品并送入ICT模塊進行檢測分析前先吸入經(jīng)加熱的參比液，以提供一個參比濃度用于最后結(jié)果的計算 儀器詳述酶的線性擴展的設(shè)置和稀釋的設(shè)置空白定標(biāo)可靠性檢測 常見報警代碼雅培診斷測 試 流 程 圖測 試 流 程 圖Thermostated ICT ModuleReaction CuvettesISE PreamplifierOutline of the IS

31、E UnitThermostated Reference SolutionReaction Bath OverflowISE SolutionPumpsISE Mid-level Reference Solution 參考液杯參考液杯反應(yīng)杯反應(yīng)杯參考液杯參考液杯Result樣本杯樣本杯反應(yīng)杯反應(yīng)杯試劑盒試劑盒反應(yīng)杯反應(yīng)杯攪拌攪拌1234567ISE Integrated Chip Technology (ICT ISE Integrated Chip Technology (ICT TMTM) ) 測 試 步 驟測 試 步 驟定 標(biāo)定 標(biāo)每 8小時儀器自動進行定標(biāo) 兩種定標(biāo)液 血 清 尿 液2

32、 個定標(biāo)液：高、低標(biāo) (CL = 低濃度, CH = 高濃度)1 參考液 (CM = 中等濃度)電動勢 (EMF) 響應(yīng)曲線(E) EMFE = E + S log Ci (Nernst Equation)CLCMlog CiCHDE HDE LSLSHDE LTimeEMFCLCMDE HCMCHCMDE L ISE Integrated Chip Technology (ICT ISE Integrated Chip Technology (ICT TMTM) )ASSAY RESULT ERROR CODES 1- 96 -Error CodeDescriptionABSAbsorban

33、ce out of range (-0.1 3.0) 超出吸光超出吸光度的范圍度的范圍CALA calibration error occured 定標(biāo)出現(xiàn)定標(biāo)出現(xiàn)錯誤錯誤INVInvalid result occurs when the sytem is unable to calculate the results and cannot identify the specific cause 無效結(jié)果系統(tǒng)無法計算，且無法確認原因無效結(jié)果系統(tǒng)無法計算，且無法確認原因NDCNo data for calculation an error occured for one of the assay

34、s used to perform a calculationPRMAn assay parameter is defined incorrectly 項目參項目參數(shù)設(shè)置錯誤數(shù)設(shè)置錯誤SRShort reagent 試劑不足試劑不足SSShort sample 樣本不足樣本不足SWRSmart Wash Reagent probe wash insufficient volume aspirated of the solution used for washing the reagent probes 試劑探針試劑探針Smart Wash 溶液用量不夠溶液用量不夠 SWSSmart Wash

35、Sample probe wash insufficient volume aspirated of the solution used for washing the sample probe 樣本探針樣本探針Smart Wash 溶液用量不夠溶液用量不夠 RESULT ERROR CODES 2All Settings are in: ASSAY CONFIGURATION SCREEN- 97 -Error CodeDescriptionInstrument Field SettingA#0A#1A#2None of the photometric reads during the Ma

36、in or Flex Read Time had a measured absorbance within the defined absorbance limit.Only 1 read was within the above mentioned absorbance limitOnly 2 reads were within the above mentioned absorbance limit 讀數(shù)點讀數(shù)點不在吸光度范圍不在吸光度范圍Base pageAbsorbance LimitFLXThe result was calculated using the read data in

37、 the Flex Read Time No indication for an error, just an alert message 使用使用Flex計算結(jié)果計算結(jié)果 Base pageFlex Read TimeRL %For Rate assays the abs linearity was outside the defined Linearity % range 吸光度線性出了吸光度線性出了Linearity % 范圍的限定范圍的限定Base page% LinearityEXPDefined Calibration Interval has been exeeded 定標(biāo)間隔過期定標(biāo)間隔過期Calibration pageIntervalRFRead Fluctuation for endpoint assays, the abs reads for the Main Read Time fluctuated more than the defined MaxAbsVar_ 讀數(shù)波動終點法，吸光度主讀數(shù)波動超過讀數(shù)波動終點法，吸光度主讀數(shù)波動超過MaxAb