(完整word版)熒光光度法測(cè)定樣品中糖精鈉含量

1、實(shí)驗(yàn)分子熒光光度法測(cè)定樣品中糖精鈉含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解分子的電子結(jié)構(gòu)、振動(dòng)結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)動(dòng)結(jié)構(gòu)2. 掌握熒光光譜分析法的基本原理 ,學(xué)會(huì)利用工作曲線進(jìn)行熒光定量分析的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理糖精作為人工合成甜味劑 , 其學(xué)名為鄰 - 磺酰苯甲酰亞胺 , 分子式為 C7H5 O3NS。糖精為無色到白色結(jié)晶或白色晶狀粉末 , 在水中溶解度很低 , 易溶于乙醇 , 乙醚 , 氯仿 , 碳酸鈉水溶液及氨水中。對(duì)熱不夠穩(wěn)定 , 無論是在酸性還是在堿性條件下 , 將其水溶液長時(shí)間加熱則逐漸分解而失去甜味。因糖精難溶于水 , 故常用其鈉鹽 , 即糖精鈉。糖精鈉的分子式為 C7H4 O3NSNa· 2HO,它

2、為無色結(jié)晶 , 易溶于水 , 不溶于乙醚 , 氯仿等有機(jī)溶劑。其熱穩(wěn)定性與糖精類似但較糖精要好 , 其甜度為蔗糖的 200-700 倍。糖精鈉已有 80多年的使用歷史 , 并廣泛用于食品、 醫(yī)藥、日用化工等行業(yè)中。 糖精鈉被攝入人體后 , 不分解 , 不吸收 , 將隨尿排出 , 不供給熱能 , 無營養(yǎng)價(jià)值。但是近年來國內(nèi)外一些學(xué)者對(duì)糖精鈉的致癌問題有所爭(zhēng)論 , 尤其食用性及安全性越來越引起人們的重視 , 因此我國對(duì)糖精鈉的使用量做出嚴(yán)格的規(guī)定 ( 國標(biāo)中規(guī)定糖精鈉用于飲料等食品 , 其最大使用量為 0. 15 5.0g/k g) 。由此看來 , 研究快速、高效的檢測(cè)糖精鈉的方法是十分必要的。目

3、前測(cè)定食品中糖精鈉的方法很多 , 國標(biāo)中規(guī)定的測(cè)定方法有高效液相色譜法、薄層層析法和離子選擇電極法。文獻(xiàn)報(bào)道的測(cè)定方法有 : 比色法和紫外吸收分光光度法等。前者中以高效液相色譜法最為理想 , 后者中或需高溫反應(yīng) , 或需配置大量試劑 , 其分析速度也較慢。1. 熒光產(chǎn)生原理熒光是光致發(fā)光。某種物質(zhì)的分子受到紫外光的激發(fā) , 吸收光能后使電子發(fā)生能量躍遷 , 從基態(tài)能級(jí)躍遷至激發(fā)態(tài)能級(jí) , 處于激發(fā)態(tài)的電子很不穩(wěn)定 , 經(jīng)過很短的時(shí)間后會(huì)釋放出能量 , 即發(fā)出熒光 , 重新回到分子基態(tài)。熒光的產(chǎn)生過程 :2. 糖精鈉可以用熒光光度法定量測(cè)定。 對(duì)于稀溶液，在實(shí)驗(yàn)條件相同的情況下，同一物質(zhì)的熒光強(qiáng)

4、度與其濃度成正比。本實(shí)驗(yàn)用工作曲線法分析試樣中的糖精鈉含量。具體方法是：配制一系列不同含量的標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)其熒光強(qiáng)度，然后以濃度為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制工作曲線。在與標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的條件下測(cè)未知試樣的熒光強(qiáng)度，從工作曲線上即可查出試樣中糖精鈉的濃度。三、儀器和試劑1. 儀器（ 1） WGY-10型熒光分光光度計(jì) ( 天津港東 )（ 2） 1.00cm石英比色皿（ 3） 10mL 比色管 8個(gè)（ 4）吸量管： 1.0ml 1 支 2.0ml 1 支（ 5）洗耳球，燒杯，擦鏡紙2. 試劑（ 1）儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)液 (2.0mg/mL): 精確稱取 0.1704g 經(jīng)120干燥 4h 的糖精鈉于小燒杯中

5、, 加去離子水溶解 , 定容至 100mL容量瓶中。（ 2）工作標(biāo)準(zhǔn)液 (0.2mg/mL ): 取上述儲(chǔ)備溶液 10.00ml 于一個(gè) 100ml容量瓶中，用去離子水稀釋定容至刻度搖勻。四、實(shí)驗(yàn)步驟1. 糖精鈉系列標(biāo)準(zhǔn)溶液及未知試樣溶液的配制取 6個(gè) 10 mL比色管，用吸量管分別加入 0.0 ，0.4 ， 0.8 ，1.2 ，1.6 ,2.0mL 糖精鈉工作標(biāo)準(zhǔn)溶液， 再取 2個(gè)10 mL比色管分別加入 1.0mL未知試樣溶液， 然后各用去離子水稀釋定容至刻度 , 搖勻待測(cè)。2 . 啟動(dòng) WGY-10型熒光分光光度計(jì)(1) 將WGY-10型熒光分光光度計(jì)度計(jì)氙燈置于“ ON”的位置，打開電

6、源開關(guān)。(2) 啟動(dòng)連接熒光光度計(jì)的計(jì)算機(jī)后，雙擊 WGY-10顯示圖標(biāo)。靜等儀器自檢完成，出現(xiàn)喀嚓聲音后，顯示 WGY-10主窗口后可以測(cè)定。3. 發(fā)射光譜和激發(fā)光譜的繪制在熟悉 WGY-10型熒光分光光度計(jì)的性能和操作方法的基礎(chǔ)上， 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)所用的標(biāo)準(zhǔn)溶液及未知試樣溶液的實(shí)際情況，學(xué)生自行設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)參數(shù)，測(cè)取發(fā)射光譜和激發(fā)光譜并找出最大發(fā)射波長和最大激發(fā)波長， 然后打印出光譜圖。（其結(jié)果是： 最大激發(fā)波長為 283nm, 最大發(fā)射波長為 410nm, 通帶寬 EX1.0nm, 負(fù)高壓 170, 掃描速度中檔。起始波長分別為 250- 350nm 和350- 450nm）4. 合成樣品中糖精鈉含量的測(cè)定根據(jù)繪制的發(fā)射光譜和激發(fā)光譜， 學(xué)生自行設(shè)計(jì)定量分析