氫化物發(fā)生原子吸收法測(cè)定血液頭發(fā)中痕量硒

1、氫化物發(fā)生原子吸收法測(cè)定血液頭發(fā)中痕量硒 林文業(yè) 何秉忠 黃鸝娟 趙士鈞 黃桂寬 吳繼同 張麗蘭 （廣西分析測(cè)試研究中心）（廣西冶金研究所） （廣西醫(yī)學(xué)院）在硒的生物化學(xué)作用被逐漸認(rèn)識(shí)的今天,要求提供精確的分析數(shù)據(jù).由于經(jīng)典的熒光光度法測(cè)定硒,條件比較苛刻,本文采用氫化物發(fā)生原子吸收法測(cè)定了人體、全血頭發(fā)樣品中硒的含量。在確定了儀器的最佳工作條件的基礎(chǔ)上,著重研究了測(cè)定全血,頭發(fā)樣品中硒的前處理方法及干擾試驗(yàn).本法相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于0.5%,標(biāo)準(zhǔn)加入回收率在95.7102%之間,適用于開展流行病學(xué)調(diào)查和臨床分析的研究.實(shí)驗(yàn)部分一 儀器及工作條件 日立Z-6000型原子分光光度計(jì)硒空心陰極燈(北京

2、有色金屬研究總院產(chǎn))日立HFS-2型氫化物發(fā)生裝置耐熱石英管(長(zhǎng)沙產(chǎn),規(guī)格:長(zhǎng)120mm,內(nèi)徑11mm).·cm-2· cm-2 ,測(cè)量方式直示,計(jì)算方是用峰高,校準(zhǔn)曲線或標(biāo)準(zhǔn)加入方法曲線,計(jì)算時(shí)間13s,延遲時(shí)間0.5s,進(jìn)樣量3ml,載氣流速Ar100ml·min-1 ,進(jìn)樣時(shí)間30s,反應(yīng)時(shí)間15s.二 試劑 硒(IV)標(biāo)準(zhǔn)貯備液:1000ug·ml-1·ml-1.硼氫化鉀:1.5%溶液中含有0.1%的氫氧化鈉,用時(shí)現(xiàn)配.亞沸蒸餾水三 試樣處理準(zhǔn)確取0.20ml血液試樣或0.2000g頭發(fā)試樣于20ml(12mm)刻度石英試管中,加入2m

3、l濃HNO3,放置過夜,次日在加入0.5mlHClO4,置于160ºC恒溫沙浴中加熱消化至溶液成呈淡黃色后(約4h),加入1mlH2O2,繼續(xù)加熱消化至溶液清亮(約1h)取出,測(cè)定前用HCl(30%)溶液定容.于試樣處理的同時(shí)制備試劑空白.四 校準(zhǔn)曲線的繪制1 校準(zhǔn)曲線·ml 硒的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液.2 標(biāo)準(zhǔn)加入法曲線移取10ml試樣+10mlHCl(30%):10ml樣液+10ml 2ng·ml-1硒標(biāo)準(zhǔn)溶液; 10ml樣液+10ml 10ng·ml-1硒標(biāo)準(zhǔn)溶液; 10ml樣液+10ml 14ng·ml-1硒標(biāo)準(zhǔn)溶液,制成均含HCL(30%)溶液

4、的硒標(biāo)準(zhǔn)加入法系列溶液. 結(jié)果與討論 一 式樣前處理方法的考察試樣的前處理是至關(guān)重要的.目前測(cè)定硒的前處理方法普遍采用濕法消化,常用的分解裝置有高型燒杯,三角錐瓶,高壓分解坩鍋和配有回流冷凝器的凱氏燒杯.由于前兩種裝置分解式樣時(shí),使用的酸量較大,硒易揮發(fā)損失,而且這些方法得消化液均需要轉(zhuǎn)移定容,易引起較大的誤差.本法采用刻度石英試管,HNO3+HclO4+H2O2+HCl氧化還原體系,于160ºC恒溫沙浴中消化血液頭發(fā)試樣.由于石英試管上端能起到空氣的冷凝回流作用,因而試劑不易揮發(fā),試樣消化完全.與配有冷凝管的燒瓶消化法比較,具有操作簡(jiǎn)單,試劑和式樣用量少,減少轉(zhuǎn)譯的誤差等優(yōu)點(diǎn).本法

5、與水冷凝管的凱氏燒瓶消化法比較的結(jié)果見表1. 表1 分解方法的比較統(tǒng)計(jì)參數(shù)*本法水冷凝管燒瓶法全血(ng·ml-1 )頭發(fā)(ng·g-1 )全血(ng·ml-1 )頭發(fā)(ng·g-1 )X+SD+N50505050RSD%* X: 硒的平均值 n: 測(cè)定次數(shù) SD: 標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD:相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差二 常見共存例子的干擾試驗(yàn)我們調(diào)查了存在于血液,頭發(fā)中的25種共存例子對(duì)痕量硒測(cè)定的干擾試驗(yàn),結(jié)果表明,下述離子(ug·ml-1)不干擾5ng·ml-1硒的測(cè)定:Ca(700), Na 、Fe3+(500), Mg、K(200), Cu、Zn

6、(5),Ni、Mn、Al(1), Cr6+、Co(0.2), Mo、As3+、Bi、Sr、Ti、Hg、Sn2+ (0.1),Si、Ba(0.5),Pb(0.06),Cd(0.05)以及NO3-、ClO4-、H2O2(0.5M).銻( ug·ml-1不干擾,含量0.1 ug·ml-1NO3、HClO4、H2O2時(shí)也不干擾測(cè)定.原因是鹽酸介質(zhì)保持了較佳濃度,可是試樣中的Fe、Cu和Ni等重金屬元素形成絡(luò)合物避免其干擾(1) ,這些與文獻(xiàn)(3) ,報(bào)道是一致的.另外還采用低濃度硒的校準(zhǔn)曲線,使試樣中基體元素的濃度得到相對(duì)稀釋(100倍以上),因而更有效地消除血液,頭發(fā)試樣中基體元

7、素對(duì)測(cè)定硒的干擾.三 校準(zhǔn)曲線法與標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果比較在擬定的最佳條件下, 準(zhǔn)曲線法和標(biāo)準(zhǔn)加入法(圖1),對(duì)試樣進(jìn)行了測(cè)試.實(shí)驗(yàn)表明,盡管血液,頭發(fā)試樣中含有較復(fù)雜的基體元素,但用上述兩種校準(zhǔn)曲線所求得硒的含量是一只的.從圖1可以看出,三種校準(zhǔn)曲線的斜率基本相同,回歸分析后,相對(duì)系數(shù)均在0.9998以內(nèi).這也證明, 血液,頭發(fā)中的基體元素對(duì)硒的測(cè)定均無影響.四 本法的回收率及精密度在血液,頭發(fā)試樣中分別添加硒標(biāo)準(zhǔn),按試樣處理步驟處理后進(jìn)行測(cè)定,其回收結(jié)果見表2.五個(gè)平行樣品的測(cè)定,方法的精密度在1.24.8%以內(nèi).+0.05 ug·g-1+0.04 ug·g-1 ,準(zhǔn)確度是令人滿意的.表 2 硒的回收率樣品原含Se量(ppb)加入Se量(ppb)測(cè)得Se量(ppb)回收率(%)空白-100100100血液A100200102血液B200300頭發(fā)C100200101頭發(fā)D20030095902五 應(yīng)用用本法測(cè)定人體全血(177例)頭發(fā)(327例)中硒的含量,其結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道值相近(411