臨床輸血檢測(cè)操作規(guī)程

1、文件類型：作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號(hào)：JCXRMYY -JY-015-2009文件名稱：臨床輸血檢測(cè)操作規(guī)程 第01版第0次修改 第1頁共12頁 ABO 血型鑒定 1、測(cè)定原理 根據(jù)紅細(xì)胞上有或無 A 抗原或和 B 抗原，將血型分為 A 型、B 型、AB 型及O 型4種?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。所謂正定型，是用已知抗A 和抗B 分型血清來測(cè)定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的 A 抗原或和B抗原；所謂反定型，是用已知A細(xì)胞和B細(xì)胞來測(cè)定血清中有無相應(yīng)的抗A或和抗B。 2、標(biāo)本種類及收集要求 2.1 受檢者血清； 2.2 枸緣酸鈉抗凝血或未稍取血，受檢者血液制成5 紅細(xì)胞鹽水懸液使用，

2、制備方法見本節(jié)附注。 2.3 標(biāo)本出現(xiàn)中度溶血者，為不合格標(biāo)本，不能用于檢測(cè)。 3、儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、培養(yǎng)基、以及其他所需物品 抗A、抗B血型定型試劑（單克隆抗體）：河北醫(yī)科大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程中心，產(chǎn)品注冊(cè)號(hào)：國藥準(zhǔn)字S10950017，包裝:抗A、抗B各1支/盒，塑料瓶，規(guī)格：10ml/支，儲(chǔ)存要求：28避光保存，主要成分：分泌抗人 A 型和抗人 B 型血型原單抗的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液并補(bǔ)加一定量小鼠腹水抗體。0.9/%的生理鹽水：江西科倫醫(yī)藥有限公司。離心機(jī)，顯微鏡。 4、操作步驟 4.1、試管法 取潔凈小試管(內(nèi)徑10mm×60mm)3支，分別標(biāo)明抗A、抗B和抗A十 B

3、，用滴管分別加抗A、抗B 和抗A 十 B 分型血清各 l 滴（約 50 ul）于試管底部，再以滴管分別加入受檢者5紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混和。 另取潔凈小試管(內(nèi)徑 10mm×60mm)3 支，分別標(biāo)明 A、B 和 O 細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清 l 滴于試管底部，再分別以滴管加入 A、B和O型5 33試劑紅細(xì)胞懸 液l滴，混和。 立即以1000rmin離心 3 min。 將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以內(nèi)眼觀察有無凝集(或溶血)現(xiàn)象。如內(nèi)眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。 觀察結(jié)果時(shí)既要看有無凝集，更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于A、B亞型、類B或cisAB

4、的發(fā)現(xiàn)。 -編制人/修改人：校核人： 審核人： 批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)日期： 年 月 日 實(shí)施日期： 年 月 日文件類型：作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號(hào)：JCXRMYY -JY-015-2009文件名稱：臨床輸血檢測(cè)操作規(guī)程 第01版第0次修改 第2頁共12頁 凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn) 4+ 紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。 3+ 紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。 2+ 紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細(xì)胞。 1+ 肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞。 ± 鏡下可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。 MF 混合凝集外觀(mixed field)是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而極大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分

5、散分布。 - 表示陰性，鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。 4.2 玻片法 取清潔玻片 1 張(或白瓷板 1 塊)，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明抗-A、抗-B和抗-A十B，分別用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于標(biāo)明的方格內(nèi)，再各加受檢者2紅細(xì)胞懸液1滴，混和。 另取潔凈玻片一張(或白瓷板1塊)，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明A細(xì)胞、B細(xì)胞和 O 細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清 1 滴，再分別用滴管滴加 A、B和O型試劑紅細(xì)胞懸液1滴。 將玻片(或白瓷板)不斷輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使血清與細(xì)胞充分混勻，連續(xù)約 15 min，先以肉眼觀察有無凝集(或溶血)反應(yīng)；再在低倍鏡下觀察結(jié)果。 5、結(jié)果判定 ABO 血型正反定

6、型結(jié)果 分型血清+受檢者紅細(xì)胞 受檢者血型 受檢者血清+試劑紅細(xì)胞 抗-A 抗-B 抗-A 十 B A 細(xì)胞 B 細(xì)胞 O 細(xì)胞 + - + A - + - - + + B + - - - - - O + + - + + + AB - - - 注：+為凝集；-為不凝集。 -編制人/修改人：校核人： 審核人： 批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)日期： 年 月 日 實(shí)施日期： 年 月 日文件類型：作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號(hào)：JCXRMYY -JY-015-2009文件名稱：臨床輸血檢測(cè)操作規(guī)程 第01版第0次修改 第3頁共12頁 6、注意事項(xiàng)： 346.1 分型血清必須為批批檢試劑，且在有效期內(nèi)使用；質(zhì)量性能符合要求。試劑開

7、封后必須貼上開封日期、開封人標(biāo)簽，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。試劑開封后有效期為一周。 6.2 試劑紅細(xì)胞以 3 個(gè)健康者同型新鮮紅細(xì)胞混和，用生理鹽水洗滌 1 次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原。或使用合格的商品診斷紅細(xì)胞。試劑紅細(xì)胞有效期：自制的為 15 天，商品的為試劑有效期。試劑開封后必須貼上開封日期、開封人標(biāo)簽，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。試劑開封后有效期為一周。 6.3 生理鹽水啟用后，有效期為二周。 6.4 所有試劑在開封或使用時(shí)，必須檢查是否有變質(zhì)；凡可疑者，必須更換新的試劑進(jìn)行檢測(cè)工作。 6.5 試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。 6.6 操作方法

8、應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。 6.7 按理 IgM 抗-A 和抗-B 與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以 4為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫(2024)內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，37可使反應(yīng)減弱。 6.8 離心時(shí)間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結(jié)果。 6.9 觀察時(shí)應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。 6.10 判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對(duì)、記錄，避免筆誤。 6.11 對(duì)于可能存在不完全抗原的時(shí)候，應(yīng)在各反應(yīng)方加入凝聚胺試劑，以檢驗(yàn)不完全抗原的存在。 6.12 對(duì)于可疑結(jié)果，必須更換所用的試劑，重新檢測(cè)。 6.13 5%

9、紅細(xì)胞懸液的配制：用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次。 根據(jù)下表進(jìn)行紅細(xì)胞懸液的配制 懸液濃度（%） 壓積紅細(xì)胞（滴） 鹽水（滴） 2 1 2ml(40) 5 1 0.8ml(16)-編制人/修改人：校核人： 審核人： 批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)日期： 年 月 日 實(shí)施日期： 年 月 日文件類型：作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號(hào)：JCXRMYY -JY-015-2009文件名稱：臨床輸血檢測(cè)操作規(guī)程 第01版第0次修改 第4頁共12頁 7、操作性能概要 7.1正反定型結(jié)果不一致的原因： 原因： 有技術(shù)性問題或紅細(xì)胞和血清本身的問題，常見者有以下幾種： .1 分型血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗A血清效價(jià)不高，可將A亞型誤定為O型，

10、AB型誤定為B型。 357.1.1.2 紅細(xì)胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，誤判為陰性反應(yīng)。 .3 受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過少(如亞型)或抗原性減弱(見于白血病或惡性腫瘤：以及類B或cisAB等。 .4 受檢者血清中蛋白紊亂(高球蛋白血癥)，或?qū)嶒?yàn)時(shí)溫度過高，常引起紅細(xì)胞呈緡錢狀排列。 .5 受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗-A 及或抗B 抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。 .6 各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集。部分溶血時(shí)，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體. .7 由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。 .8 血清中有意外抗體，如自身抗I，常引起干擾。 .9

11、 老年人血清中抗體水平大幅度下降正反定型結(jié)果不一致的解決辦法如發(fā)現(xiàn)ABO正反定型結(jié)果不一致，先要重復(fù)作試驗(yàn)1次。嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察和解釋試驗(yàn)結(jié)果，就可解決明顯的問題，對(duì)一些疑難問題月必須進(jìn)一步研究。 檢查步驟： .1 另從受檢者采取 l 份新鮮血液標(biāo)本這樣可以糾正因污染或搞錯(cuò)樣本造成的不符合。 .2 將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成5生理鹽水細(xì)胞懸液，用抗A、抗B、抗Al，抗A十B及抗H做試驗(yàn)可以得到其它有用的信息。 .3 對(duì)受檢紅細(xì)胞作直接抗球蛋白試驗(yàn)，如結(jié)果呈陽性，表示紅細(xì)胞已被抗體致敏。 .4 用 A1、A2、B、O 紅細(xì)胞及自身紅細(xì)胞檢查受檢血清。如果懷疑是抗I，用

12、O型(或ABO相合的)臍血紅細(xì)胞檢查。 -編制人/修改人：校核人： 審核人： 批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)日期： 年 月 日 實(shí)施日期： 年 月 日文件類型：作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號(hào)：JCXRMYY -JY-015-2009文件名稱：臨床輸血檢測(cè)操作規(guī)程 第01版第0次修改 第5頁共12頁 .5 如果試驗(yàn)結(jié)果未見凝集，應(yīng)將細(xì)胞及血清試驗(yàn)至少在室溫和4放置30min，用顯微鏡檢查核實(shí)。 .6 如疑為 A 抗原或 B 抗原減弱，則可將受檢紅細(xì)胞與抗A 或抗B 血清作吸收及放散試驗(yàn)以及受檢者唾液作 A、B、H 血型物質(zhì)測(cè)定。后者只對(duì) 80HAB分泌型的人有用。 .7 如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞呈絹錢狀排列，加等滲鹽水l滴，混和，

13、往往可使絹錢現(xiàn)象消失。應(yīng)注意不應(yīng)先加鹽水 l 滴于受檢者血清中而后和紅細(xì)胞作試驗(yàn)，以免使血清中抗體被稀釋。 .8 如受檢者為A型血而疑為有類B抗原時(shí)，可用下列方法進(jìn)行鑒別： .8.1 觀察細(xì)胞與抗A及抗B的凝集強(qiáng)度，與抗A的反應(yīng)要比與抗 36B的反應(yīng)強(qiáng)。這種區(qū)別用玻片法作試驗(yàn)更為明顯。 .8.2 用受檢者紅細(xì)胞與自身血清作試驗(yàn)，血清中的抗B不凝集自身紅細(xì)胞上的類B抗原。 .8.3 檢查唾液中是否有A、B物質(zhì)，如果是分泌型，可檢出A物質(zhì)而無B物質(zhì)。 .8.4 核對(duì)患者的診斷，類B抗原的形成與結(jié)腸癌、直腸癌、革蘭陰性桿菌感染有關(guān)。 .9 如發(fā)現(xiàn)多凝集現(xiàn)象，應(yīng)考慮由遺傳產(chǎn)生的Cad抗原活性；被細(xì)菌酶

14、激活的T或TK受體；或產(chǎn)生機(jī)制不太明了的Tn受體所引起。多凝集紅細(xì)胞具有以下特點(diǎn)： .9.1 能被人和許多家兔的血清凝集。 .9.2 能與大多數(shù)成年人的血清凝集，不管有無相應(yīng)的同種抗體。 .9.3 不被臍帶血清凝集。 .9.4 通常不與自身的血清凝集。 8、臨床意義 用于檢驗(yàn)人的ABO血型歸屬。 9、參考文獻(xiàn) 全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第3版） -編制人/修改人：校核人： 審核人： 批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)日期： 年 月 日 實(shí)施日期： 年 月 日文件類型：作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號(hào)：JCXRMYY -JY-015-2009文件名稱：臨床輸血檢測(cè)操作規(guī)程 第01版第0次修改 第6頁共12頁 Rh（D）血型鑒定 1、

15、實(shí)驗(yàn)原理 紅細(xì)胞與抗D抗體發(fā)生凝集反應(yīng)表明該細(xì)胞有D抗原，反之，無凝集現(xiàn)象表明試驗(yàn)的紅細(xì)胞缺少正常強(qiáng)度的D抗原。 2、標(biāo)本收集和制備 無菌操作收集血液標(biāo)本,收集后盡可能立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如果不能立即實(shí)驗(yàn),應(yīng)將樣品貯存于 2-8C。收集在 ACD、CPD、CPD2A 液中的血液標(biāo)本,不超過 21天仍可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但是加EDTA、肝素和凝集的血液標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)應(yīng)在2天內(nèi)進(jìn)行。 3、儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、培養(yǎng)基、以及其他所需物品： Rh(IgM)血型定型試劑（單克隆抗體）：上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，產(chǎn)品注冊(cè)號(hào)：國藥準(zhǔn)字 S20060018,包裝、規(guī)格：每盒內(nèi)裝有 1 支試劑，10ml/支，儲(chǔ)存要求：

16、存放28，有效期內(nèi)使用。 4、操作步驟 4.1 玻片法： 干凈玻片上加1滴抗D。 再加入1滴40%-50%的被檢紅細(xì)胞懸液。該紅細(xì)胞懸液可以是鹽水懸液， 37也可以是懸浮于自身血漿或血清中的紅細(xì)胞。 在圓形的玻片區(qū)域中混勻，前后緩慢搖晃玻片。2分鐘左右肉眼判讀結(jié)果。不要將試劑的干燥與凝集相混淆。 如果是陰性，需要試管法重做一遍實(shí)驗(yàn)。 4.2 鹽水試管法 加一滴抗D試劑于預(yù)先標(biāo)記好的試管中 再加1滴約3%5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液于試管中?；靹?。 離心，速度和時(shí)間可選擇以下二種之一： 轉(zhuǎn)速1000rpm，時(shí)間一分鐘1分鐘或3400rpm，時(shí)間15秒。 檢查是否溶血（溶血可能是陽性結(jié)果，或者是細(xì)菌污染

17、），然后輕輕搖晃，是細(xì)胞再懸浮起來。 觀察凝集狀況，并立即記錄結(jié)果。必要時(shí)可借助顯微鏡。 若是陰性結(jié)果，需在37孵育15分鐘-30分鐘，然后再離心觀察結(jié)果。結(jié)果若呈陰性需進(jìn)一步確認(rèn)是否是弱D。 -編制人/修改人：校核人： 審核人： 批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)日期： 年 月 日 實(shí)施日期： 年 月 日文件類型：作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號(hào)：JCXRMYY -JY-015-2009文件名稱：臨床輸血檢測(cè)操作規(guī)程 第01版第0次修改 第7頁共12頁 4.3 微量板法（U型板） 加一滴抗D試劑于U型底的微孔中。 再在微孔中一滴約 3-5%的被檢紅細(xì)胞懸液，細(xì)胞懸液需事先制備于生理鹽水中。 用機(jī)械的方法將U型板混勻。 用板式

18、離心機(jī)離心：2000rpm,時(shí)間 30 秒。不同的離心機(jī)，不同的微量板所需要的離心條件有所區(qū)別，正確實(shí)驗(yàn)的結(jié)果需要適當(dāng)?shù)碾x心，使反應(yīng)板產(chǎn)生清晰的細(xì)胞扣及透亮的上清液。 檢測(cè)溶血情況（溶血可能是陽性結(jié)果，或者是細(xì)菌污染）。 結(jié)果判斷：用機(jī)械震蕩U型板，再懸浮細(xì)胞，根據(jù)懸浮情況來判斷凝集。陽性反應(yīng)，出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，而陰性反應(yīng)在微孔中會(huì)出現(xiàn)均勻細(xì)胞懸液。 可用肉眼和自動(dòng)化判讀結(jié)果。 如果呈陰性，需要試管法重做一遍實(shí)驗(yàn)。 5、參考值范圍 陽性反應(yīng)：出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，為RhD陽性。 陰性反應(yīng)：紅細(xì)胞不出現(xiàn)凝集，為RhD陰性。 6、產(chǎn)品性能指標(biāo) 抗D（IgM）效價(jià)大于等于1：64（ccDeeO型） 7、 方

19、法的局限性 VI本實(shí)驗(yàn)不能凝集CategoryD 細(xì)胞，對(duì)于陰性和弱陽性結(jié)果，按有關(guān)安全輸血規(guī)范進(jìn)行確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，必要時(shí)送血型參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。 8、注意事項(xiàng) 388.1 試劑含有0.1%W/V疊氮鈉，如果攝入會(huì)中毒。 8.2 試劑如出現(xiàn)混濁則不能使用，若開瓶使用時(shí)間較長后，最好用已知RhD陰性、RhD 陽性紅細(xì)胞檢查結(jié)果是否符合，以防制品污染、變質(zhì)失效，而造成錯(cuò)誤。及時(shí)貼上開封時(shí)間標(biāo)簽，在效期內(nèi)使用。 8.3 由于人紅細(xì)胞的D抗原往往表現(xiàn)較弱，故必要時(shí)進(jìn)行顯微鏡鏡檢，以免錯(cuò)判結(jié)果，特別是陰性結(jié)果時(shí)。 8.4 Rh血型鑒定應(yīng)嚴(yán)格控制溫度與時(shí)間，因Rh抗原、抗體集反應(yīng)凝塊比較脆弱，觀察反應(yīng)結(jié)果時(shí)，

20、應(yīng)輕輕側(cè)動(dòng)試管，不可用力振搖。 8.5 對(duì)于結(jié)果可疑的，必須洗滌紅細(xì)胞后重新檢驗(yàn)。-編制人/修改人：校核人： 審核人： 批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)日期： 年 月 日 實(shí)施日期： 年 月 日文件類型：作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號(hào)：JCXRMYY -JY-015-2009文件名稱：臨床輸血檢測(cè)操作規(guī)程 第01版第0次修改 第8頁共12頁 9、 操作性能概要 9.1 假陽性反應(yīng)原因分析： 試劑中存在具有其他特異性的抗體（指不完全抗 D 抗體），因此，對(duì)疑難抗原定型時(shí)，建議用不同來源的抗血清同時(shí)做兩份實(shí)驗(yàn)。因?yàn)槭褂脙煞萏禺愋韵嗤目寡宓玫讲灰恢碌慕Y(jié)果時(shí)，就會(huì)使檢驗(yàn)人員意識(shí)到有進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的必要。 多凝集紅細(xì)胞與任何人血清會(huì)

21、發(fā)生凝集。 當(dāng)用未經(jīng)洗滌的細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)時(shí)，試樣中的自身凝集和異常蛋白質(zhì)可能引起假陽性結(jié)果。 9.14 試劑瓶可能被細(xì)菌、外來物質(zhì)或其他抗血清所污染。 9.2 假陰性反應(yīng)原因分析： 搞錯(cuò)抗血清 每次試驗(yàn)時(shí)應(yīng)細(xì)心核對(duì)抗血清瓶子上的標(biāo)簽。 試管中漏假抗血清 在加入細(xì)胞懸液之前，必須檢查試管中有無抗血清。 某種特定的抗血清不能和其他相應(yīng)抗原的變異型起反應(yīng)。 如某種抗血清含有主要對(duì)抗 Rh 復(fù)合抗原的抗體，則可能與獨(dú)立的基因產(chǎn)物的個(gè)別抗原不發(fā)生反應(yīng)。這在抗C血清最為常見，因?yàn)楹芏嗫笴血清含有反應(yīng)性更強(qiáng)的抗Ce成分。 未遵照抗血清使用說明書做試驗(yàn)，如抗血清和細(xì)胞的比例以及溫育的溫度和時(shí)間不正確。 抗血清保存

22、不妥，試劑中的免疫球蛋白變質(zhì)。 10、參考文獻(xiàn)： 全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第3版） -編制人/修改人：校核人： 審核人： 批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)日期： 年 月 日 實(shí)施日期： 年 月 日文件類型：作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號(hào)：JCXRMYY -JY-015-2009文件名稱：臨床輸血檢測(cè)操作規(guī)程 第01版第0次修改 第9頁共12頁 抗體篩選和鑒定試驗(yàn) 1、 原理 紅細(xì)胞血型抗體分子的物理特性與血清學(xué)的反應(yīng)性之間有著直接的關(guān)系。可 39分為IgM和IgG球蛋白抗體 IgM 為天然抗體，在鹽水介質(zhì)中能直接相應(yīng)的紅細(xì)胞，使之發(fā)生肉眼可見的凝集反應(yīng)。 IgG為免疫抗體，常經(jīng)妊娠或輸血等免疫產(chǎn)生。在鹽水介質(zhì)中不能凝集而只能

23、致敏抗原的紅細(xì)胞，且必須通過特定的方法使致敏紅細(xì)胞發(fā)生凝集。如牛血清白蛋白、酶、抗球蛋白、凝聚胺、凝膠（或玻璃）等方法。 2、 方法 待檢血清需要使用多種方法進(jìn)行鑒定。一般使用鹽水法、酶方法、抗球蛋白法、凝聚胺法或凝膠法檢測(cè)抗體。在檢測(cè)到弱抗體時(shí)，可以利用適當(dāng)增加血清的細(xì)胞比例、適當(dāng)增加孵育時(shí)間、加入低離子強(qiáng)度溶液增效劑或 PEG 聚氧乙烯乙二醇等方法增加反應(yīng)的敏感性。不同的抗體在不同的方法和條件下可以有不同的表現(xiàn)。這些特性為判定抗體特異性提供了參考信息。 3、 試劑 3.1、 紅細(xì)胞：選取三個(gè)以上的O型紅細(xì)胞組成一組篩選細(xì)胞（已知抗原）。 3.2、譜細(xì)胞：選取八個(gè)以上的O型紅細(xì)胞組成一組譜細(xì)

24、胞（已知抗原）。 4、 操作 4.1、 不規(guī)則抗體的篩選：用篩選細(xì)胞（1、2、3號(hào)），同患者血清在三種介質(zhì)中（鹽水、凝聚胺、看球蛋白）反應(yīng)，需做自身細(xì)胞對(duì)照。 4.2、 不規(guī)則抗體的鑒定：對(duì)篩選陽性的患者應(yīng)檢查其抗體的特異性。用一組譜細(xì)胞（1-11）同患者血清在三種介質(zhì)中（鹽水、凝聚胺、抗球蛋白），進(jìn)行抗體的篩選，需做自身細(xì)胞對(duì)照。 5、 結(jié)果判斷 陽性反應(yīng)：出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集。表示紅細(xì)胞上有相應(yīng)抗體存在。 陰性反應(yīng)：出現(xiàn)紅細(xì)胞不凝集。表示紅細(xì)胞上沒有相應(yīng)抗體存在。 結(jié)合譜細(xì)胞反應(yīng)格局，確定抗體特異性。-編制人/修改人：校核人： 審核人： 批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)日期： 年 月 日 實(shí)施日期： 年 月 日文件

25、類型：作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號(hào)：JCXRMYY -JY-015-2009文件名稱：臨床輸血檢測(cè)操作規(guī)程 第01版第0次修改 第10頁共12頁 6、 臨床意義 6.1、 定血型； 6.2、 測(cè)效價(jià) 6.3、 可能幾率：正確的抗體鑒定，必須有充分的譜細(xì)胞支持。 7、 標(biāo)本要求 7.1、按照一般的血液樣本采集步驟采集血液標(biāo)本。該標(biāo)本可于4或0以下冷凍保存三周或數(shù)年。一般不需特殊處理。 7.2、 應(yīng)用EDTA抗凝標(biāo)本，可反應(yīng)體內(nèi)紅細(xì)胞被補(bǔ)體致敏的真實(shí)情況?？鼓龢?biāo)本也用于直接抗球蛋白試驗(yàn)，并可提供洗脫技術(shù)所需的紅細(xì)胞來源。 7.3、 需要一管新鮮收集的凝固的血液標(biāo)本用作血清研究。若懷疑冷抗體引起的直接抗球蛋

26、白試驗(yàn)陽性，其血液標(biāo)本凝固應(yīng)保持在 37，直到血清 40被分離出來為之。 8、 注意事項(xiàng) 8.1、 僅用于體外診斷 8.2、 試劑貯藏溫度2-8； 8.3、 試劑有效期兩個(gè)月。 -編制人/修改人：校核人： 審核人： 批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)日期： 年 月 日 實(shí)施日期： 年 月 日文件類型：作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號(hào)：JCXRMYY -JY-015-2009文件名稱：臨床輸血檢測(cè)操作規(guī)程 第01版第0次修改 第11頁共12頁 改良低離子聚凝胺法促進(jìn)劑實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程 1、目的：減少交叉配血試驗(yàn)的假陽性。 2、適用范圍：交叉配血、血型鑒定、抗體篩檢血型血清學(xué)試驗(yàn)。 3、試劑來源：中山市生科試劑儀器有限公司 4、采集與

27、處理： 4.1 脈采血3-4ml，并觀察是否溶血、乳糜血，如有此現(xiàn)象應(yīng)再留標(biāo)本并做記錄。 4.2 檢查留樣試管、標(biāo)簽、標(biāo)號(hào)、姓名、血型是否齊全，如有遺漏應(yīng)拒收。 04.3 將血標(biāo)本試管放37C水浴中10分鐘，離心。 5、標(biāo)準(zhǔn)操作： 5.1 主（次）管加入受（供）血者血清 2 滴，加供（受）血者 4%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴。 5.2 各管加 LIM0.8ml，混勻，靜置 1 分鐘，各管加 Promoter1 滴，混勻，3000轉(zhuǎn)/分離心 15 秒，倒出上清液（殘留約 0.1ml），扣搖，肉眼可見明顯的凝集狀（如無凝集須重做），加假凝集清除液 1 滴與管底，輕搖，凝集 1 分鐘內(nèi)消失呈均勻混懸液，為陰性，凝集1分鐘內(nèi)不能被消除，即為陽性。 5、 結(jié)論： 陽性表示受（供）血者血清中含供（受）者紅細(xì)胞血型 Ag 相應(yīng)的 Ab（IgG、IgM），供受血者不相容，陰性表示供受血者相容-編制人/修改人：校核人： 審核人： 批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)日期：