專題三植物的組織培養(yǎng)技術(shù)-知識點(diǎn)總結(jié)

1、專題三 植物的組織培養(yǎng)技術(shù) 脫分化和再分化。菊花的組織培養(yǎng) (2)營養(yǎng)：常用的培養(yǎng)基是 MS 固體培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是 N、P、S、K、1. 細(xì)胞分化指在生物個體發(fā)育過程中，相同細(xì)胞的后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能 Ca、Mg，微量元素是 Fe、Mn、B、Zn、C u、Mo、I、Co，它們提供了植物細(xì)胞上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過程。 細(xì)胞分化使多細(xì)胞生物體中細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能趨向?qū)ｉT 所必需的無機(jī)鹽。有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。蔗糖提供碳化，有利于提高各種生理功能的效率。 源，維持細(xì)胞滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在2. 具有某種生物全套遺傳信息的任何一個活細(xì)

2、胞，都具有發(fā)育成完整個體的潛正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。 微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)能，叫做植物細(xì)胞的全能性。 但在生物體的生長發(fā)育過程中并未表現(xiàn)出來， 這是 為主，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng)。因?yàn)樵谔囟ǖ臅r間和空間條件下， 通過基因的選擇性表達(dá)， 形成了不同組織和器 (3)激素：植物激素中生長素和細(xì)胞分裂素是啟動細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的官。 關(guān)鍵性激素。 使用順序 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 生長素 細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果3. 離體的植物組織或細(xì)胞， 在適宜條件下培養(yǎng)了一段時間以后， 會通過細(xì)胞分裂，先生長素，后細(xì)胞分裂素 有利于分裂但不分化 比值高時 促根分化，抑芽形成形成愈傷組織， 這

3、種由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程， 稱為植先細(xì)胞分裂素，后生長素 細(xì)胞既分裂也分化 比值低時 促芽分化，抑根形成同時使用 分化頻率提高 比值適中 促進(jìn)愈傷組織生長 物細(xì)胞的脫分化（去分化） 。愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個過程叫做再分化。 (4)環(huán)境條件：菊花的組織培養(yǎng)，一般將 pH 控制在左右，溫度控制在 1822，并且每日用日光燈照射 12h. 4. 愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。 6.菊花組織培養(yǎng)的操作流程包括：配制 MS固體培養(yǎng)基外植體的消毒接種5. 植物組織培養(yǎng)技術(shù)廣泛應(yīng)用在實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖、培

4、育無病毒作物、制培養(yǎng)移栽栽培作人工種子、培育作物新品種以及細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)等方面。 7.制備 MS固體培養(yǎng)基的步驟是：配置各種母液配制培養(yǎng)基滅菌。先將各種5. 影響植物組織培養(yǎng)的條件有材料、營養(yǎng)、激素及環(huán)境條件。成分按配方比例配制成濃縮液（培養(yǎng)基母液） 。然后在容器中加入瓊脂（加熱融(1)材料：植物材料的選擇直接關(guān)系到試驗(yàn)的成敗。菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開化），依次加入蔗糖、大量元素、微量元素、有機(jī)物和植物激素的母液，并用蒸花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料。 一般來說， 容易進(jìn)行無性繁殖的植物容易 餾水定容到 1000 毫升，調(diào)節(jié) PH，分裝到錐形瓶中， 用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行無菌進(jìn)行組織培養(yǎng)

5、。 選取生長旺盛嫩枝進(jìn)行組培的原因是嫩枝生理狀態(tài)好， 容易誘導(dǎo) 處理。 移向細(xì)胞一側(cè)（單核靠邊期） ，并分裂成 1 個生殖細(xì)胞核和 1 個花粉管細(xì)胞核，8. 外植體是指用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。 取生長旺盛的嫩枝用流水沖洗加少許洗衣粉刷洗在流水下沖洗 20min 左右無菌吸水紙吸干表面水進(jìn)而形成兩個細(xì)胞， 一個是生殖細(xì)胞， 一個是營養(yǎng)細(xì)胞。 生殖細(xì)胞將再分裂一次，分體積分?jǐn)?shù)為 70%的酒精中搖動 23 次，持續(xù) 67s，無菌水中清洗用無形成兩個精子（基因組成完全相同） 。菌吸水紙吸干表面水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 %的氯化汞溶液中 12min無菌水中至少 4.通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生單倍體植株有兩種途徑，

6、 一種是花粉通過胚狀體階段發(fā)育為清洗 3 次，漂洗消毒液。 應(yīng)注意對外植體進(jìn)行表面消毒時， 就要考慮藥劑的消毒植物，另一種是花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再將其誘導(dǎo)分化成植株。效果，又要考慮植物的耐受能力。 這兩種途徑不同主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。9. 接種過程中插入外植體時形態(tài)學(xué)上端朝上，每個錐形瓶接種 78 個外植體， 5.胚狀體是植物體細(xì)胞組織培養(yǎng)過程中， 誘導(dǎo)產(chǎn)生的形態(tài)與受精卵發(fā)育成的胚類整個過程要求無菌操作。 似的結(jié)構(gòu)，有胚芽、胚根、胚軸等完整結(jié)構(gòu)，就像一粒種子。10. 放在無菌箱中培養(yǎng)， 定期進(jìn)行消毒， 保持適宜的溫度 （1822）和光照（12h） 6.影響花藥

7、培養(yǎng)的主要因素是材料的選擇與培養(yǎng)基的組成。 應(yīng)該選月季的初花期11移栽前先打開培養(yǎng)瓶的封口膜， 讓其在培養(yǎng)間生長幾日， 然后用流水清洗根（花粉早期的花藥比后期更容易產(chǎn)生花粉植株； 選擇單核靠邊期 （花藥培養(yǎng)成功部培養(yǎng)基， 將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時間壯苗， 最 率最高）；選擇完全未開放的花蕾（有利于材料的消毒） 。后進(jìn)行露天栽培。 7.選擇花藥時，用醋酸洋紅法使細(xì)胞核中的染色體著色，通過鏡檢來選擇單核靠 邊期的花粉。若不易著色，需采用焙花青 -鉻礬法將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。12. 外植體在培養(yǎng)過程中可能會被污染，原因有外植體消毒不徹底；培養(yǎng)基滅菌不徹底；接種中被雜菌污染

8、；錐形瓶密封性差等。 8.滅菌后的花蕾，要在無菌條件下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基 上。在剝離花藥時， 要盡量不損傷花藥 （否則接種后容易從受傷部位長出愈傷組月季的花藥培養(yǎng)1. 被子植物的雄蕊包含花絲、 花藥兩部分。 花藥為囊狀結(jié)構(gòu)， 內(nèi)部含有許多花粉。織），同時還要徹底去除花絲，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體花粉是由花粉母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細(xì)胞。 的形成。2. 被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小孢子四分體時期、單核期和雙核期等階段。 9.每瓶接種花藥 710 個,溫度控制在 25左右,幼小植株形成后給予光照，培養(yǎng)3. 在小孢子四分體時期， 4 個單倍體細(xì)胞連在一起，進(jìn)入單核期時，四分體的 4 2030 天后,花藥開裂長出愈傷組織或形成胚狀體。此時要將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移個單倍體細(xì)胞彼此分離， 形成 4 個具有單細(xì)胞核的花粉粒， 這時的細(xì)胞含濃厚的到分