異氟醚后處理對(duì)盲腸結(jié)扎穿孔大鼠急性肺損傷的保護(hù)作用

1、異氟醚后處理對(duì)盲腸結(jié)扎穿孔大鼠急性肺損傷的保護(hù)作用 10-10-29 11:15:00 編輯：studa20 作者：徐文莉1，何俊1，曾因明1，龐慶豐【摘要】 目的 觀察異氟醚(isoflurane, ISO)后處理對(duì)盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(cecal ligation and puncture, CLP)后大鼠急性肺損傷(acute lung injury,ALI)的保護(hù)作用。方法 32只SD雄性大鼠隨機(jī)分為4組(每組n=8)：正常組(N組)，未行任何處理;假手術(shù)組(Sham組)，單純行開腹關(guān)腹術(shù);盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)組(CLP組)，行CLP建立大鼠ALI模型;異氟醚組(ISO組)，建立CLP模型后4 h

2、腹腔注射液態(tài)異氟醚2 ml/kg。術(shù)后12 h各組動(dòng)物腹主動(dòng)脈放血處死，右肺進(jìn)行病理切片和肺濕/干比(W/D)測(cè)定，組織勻漿測(cè)超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和髓過氧化物酶(MPO)的含量;左肺行支氣管肺泡灌洗，取上清液測(cè)總蛋白、腫瘤壞死因子(TNF-)和白細(xì)胞介素10(IL-10)的含量。結(jié)果肺組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示CLP組大鼠肺組織損傷嚴(yán)重，ISO組肺組織損傷較輕。與N組比較，CLP組和ISO組中SOD含量降低(P0.01)，其余檢測(cè)指標(biāo)均增加(P0.01)。與CLP組比較，ISO組SOD和IL-10含量較高(P0.01);其余檢測(cè)指標(biāo)均低于CLP組(P0.05或P0.01)。結(jié)

3、論 在本實(shí)驗(yàn)條件下，大鼠腹腔注射液態(tài)ISO可發(fā)揮抗炎、抗氧化作用，對(duì)CLP所致大鼠ALI有部分保護(hù)作用。 【關(guān)鍵詞】 急性肺損傷;肺保護(hù);異氟醚;后處理;盲腸結(jié)扎穿孔Abstract: Objective To investigate the protective effects of isoflurane (ISO) post-treatment on acute lung injury (ALI) induced by cecal ligation and puncture (CLP) in rats. Methods 32 male Sprague-Dawley (SD) rats we

4、re randomly divided into 4 groups (n=8 each): normal (N) group, with no treatment; Sham-operated control (Sham) group, with mere incision and closure of the abdomen; cecal ligation and puncture (CLP) group, established as rat model of induced ALI; and isoflurane (ISO) group, with intraperitoneal inj

5、ection of 2 ml/kg ISO 4 h after CLP. The animals were sacrificed by exsanguination via the abdominal aorta 12 h after CLP. The right lungs were removed for pathological dissection; determination of lung wet-to-dry weight ratio (W/D); determination of the content of superoxide dismutase (SOD), malond

6、ialdehyde (MDA) and myeloperoxidase (MPO) in the pulmonary homogenate. Following lavages of the left lungs, the supernatant from the bronchoalveolar lavage fluid (BALF) was determined for the total protein level, the content of tumor necrosis factor- (TNF-) and interleukin-10 (IL-10). Results The pa

7、thological results showed that rats in CLP group had serious lung injury, while the rats in ISO group had slight injury. In both CLP and ISO groups, the SOD content decreased (P0.01) and the other parameters increased (P0.01), as compared to the N group. The SOD and IL-10 contents were higher in ISO

8、 group than in CLP group (P0.01). The contents of MDA, MPO and TNF- and W/D were lower in ISO group than in CLP group (P0.05 or P0.01). Conclusion In our experiment, intraperitoneal injection of ISO had anti-inflammatory and anti-oxidative effects, which provided partial protection from CLP-induced

9、ALI in rats.Key words: acute lung injury; lung protection; isoflurane; post-treatment; cecal ligation and puncture急性肺損傷(acute lung injury, ALI)是急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)的早期階段，是臨床常見的危重病癥。它是損傷因素直接或間接損傷肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，肺毛細(xì)血管通透性增高的血管滲漏綜合征1-2。其致病因素有多種，其中膿毒癥排在首位3。目前治療ALI的方法有

10、病因治療、體液管理、通氣治療、血液凈化等，藥物有糖皮質(zhì)激素、肺泡表面活性物質(zhì)、一氧化氮(NO)、前列腺素等。但ALI臨床治療效果依然不理想，病死率達(dá)40%60%4。因此尋找新的治療方法和藥物極為重要。異氟醚(isoflurane,ISO)具有誘導(dǎo)蘇醒迅速、血流動(dòng)力學(xué)平穩(wěn)等優(yōu)點(diǎn)，在臨床上廣泛使用。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，一定劑量的ISO可發(fā)揮肺保護(hù)作用5。ISO預(yù)處理可降低脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的幼豬ALI肺泡毛細(xì)血管的通透性，而發(fā)揮肺保護(hù)作用。在大鼠肺缺血/再灌注前，持續(xù)給予吸入1最低肺泡有效濃度(MAC)ISO，發(fā)現(xiàn)可降低缺血/再灌注損傷導(dǎo)致的血管通透性增加，通過

11、抑制白細(xì)胞浸潤(rùn)和肺組織細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)mRNA及CD18表達(dá)上調(diào)，發(fā)揮肺保護(hù)作用6。目前研究多集中在ISO預(yù)處理對(duì)ALI的保護(hù)作用，但I(xiàn)SO預(yù)處理不符合臨床用藥方法，臨床意義不大。因此對(duì)ISO后處理的研究更有實(shí)際意義。本實(shí)驗(yàn)從ISO后處理的角度，采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(cecal ligation and puncture,CLP)建立大鼠ALI模型，觀察各組病理學(xué)、肺血管通透性、肺組織炎癥、氧化指標(biāo)等的改變，觀察ISO后處理對(duì)大鼠ALI的作用，探討ISO后處理的肺保護(hù)作用。1 材料和方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及模型制備 雄性SD大鼠32只，體重200250 g，由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)

12、物中心提供。采用經(jīng)典的CLP7建立大鼠ALI模型。大鼠術(shù)前12 h禁食不禁水，10%水合氯醛0.35 ml/100 g腹腔注射麻醉，備皮消毒。于腹正中處切開1 cm切口，進(jìn)腹找到盲腸，1號(hào)絲線結(jié)扎1/2盲腸，以20G針頭在游離端對(duì)穿2次(4個(gè)孔)后送回腹腔，縫合切口。皮下注射生理鹽水2 ml/100 g，置籠內(nèi)自由活動(dòng)，不禁飲食。假手術(shù)組開腹后僅提出盲腸，不結(jié)扎、不穿孔，其余與CLP組相同。1.2 實(shí)驗(yàn)分組及方法 SD大鼠隨機(jī)分為4組，每組8只：正常組(N組)，不行任何處理;假手術(shù)組(Sham組)，單純行開腹關(guān)腹術(shù);CLP組，行CLP建立大鼠ALI模型;異氟醚組(ISO組)，CLP建立模型后4

13、 h腹腔注射液態(tài)ISO 2 ml/kg(美國(guó)雅培制藥有限公司)。各組動(dòng)物在術(shù)后12 h腹主動(dòng)脈放血處死，右肺進(jìn)行病理切片和肺濕/干比(W/D)測(cè)定，組織勻漿測(cè)肺組織中髓過氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量;左肺行支氣管肺泡灌洗，取上清液測(cè)總蛋白、腫瘤壞死因子(TNF-)和白細(xì)胞介素10(IL-10)。1.3 觀察指標(biāo)1.3.1 肺組織病理學(xué)變化 取右肺下葉置4%甲醛溶液固定24 h，常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋，常規(guī)切片，蘇木精-伊紅染色，光鏡下觀察病理形態(tài)學(xué)變化。1.3.2 肺組織W/D的測(cè)定 大鼠處死后，立即取右上肺稱濕重(W)并記錄，而后置于60烘箱烘干72 h致恒重，稱干重(D)，計(jì)算肺組織W/D。1.3.3 肺組織MDA、SOD和MPO測(cè)定 取右肺中葉制成10%組織勻漿， 立即離心(4，3 000 r/min，10 min)，取上清待用。按MDA、SOD和MPO試劑盒(南京建成生物工程研究所)說(shuō)明書進(jìn)行操作。1.3.4 支氣管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-、IL-10和總蛋白含量測(cè)定 大鼠腹主動(dòng)脈放血處死后，結(jié)扎