埃博拉出血熱實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案第三版

1、埃博拉出血熱實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案（第三版） 埃博拉出血熱是一種嚴(yán)重的急性傳染病，可發(fā)生人-人傳播和院內(nèi)感染,病死率高。直接接觸傳播是本病最主要的傳播途徑。可以通過接觸病人或被感染動(dòng)物的體液、分泌物、排泄物及其污染物等而感染。埃博拉出血熱的早期臨床表現(xiàn)和其他一些病毒性出血熱相似，需要通過實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確診。在目前階段，以對(duì)病人血液標(biāo)本檢測(cè)為主。為及時(shí)檢測(cè)和確認(rèn)埃博拉出血熱病例，規(guī)范實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)程序，提高檢測(cè)質(zhì)量，為指導(dǎo)病例的管理和出院提供依據(jù)，特制定本方案。一、   檢測(cè)對(duì)象包括留觀病例、疑似病例和確診病例，病例定義參見國家衛(wèi)生計(jì)生委制定的埃博拉出血熱相關(guān)病例診斷和處

2、置路徑。二、標(biāo)本采集、保存和運(yùn)輸（一）標(biāo)本采集用分離膠無菌真空促凝管采集靜脈血，每管3mL，標(biāo)記后4保存，填寫標(biāo)本采集登記表（附表1）。留觀病例、疑似病例采集發(fā)病3日后靜脈血2管，送具有埃博拉出血熱檢測(cè)資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行埃博拉病毒檢測(cè)；確診病例采集恢復(fù)期血標(biāo)本，送國家疾控中心病毒病所進(jìn)行檢測(cè)。（二）標(biāo)本保存、運(yùn)送未分離血清的全血標(biāo)本應(yīng)4保存，并盡快送具有埃博拉出血熱檢測(cè)資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室分離血清、檢測(cè)；血清標(biāo)本長期保存應(yīng)置于-70或以下冰箱，1周內(nèi)保存可置-20冰箱。標(biāo)本運(yùn)輸應(yīng)按照相關(guān)生物安全規(guī)定，采取A類包裝，低溫冷藏運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融（附件1）。三、檢測(cè)內(nèi)容 埃博拉病毒核酸檢測(cè)、埃博拉病

3、毒抗原檢測(cè)和IgM、IgG抗體檢測(cè)。四、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法（一）病原學(xué)檢測(cè)1核酸檢測(cè)：是目前早期診斷、早期發(fā)現(xiàn)埃博拉出血熱病例的主要檢測(cè)方法。為提高檢測(cè)的敏感性和特異性，用實(shí)時(shí)熒光PCR 方法針對(duì)埃博拉病毒2個(gè)不同的基因進(jìn)行檢測(cè)，在病例篩查時(shí)，任一基因檢測(cè)陽性均可判為埃博拉病毒陽性；在確診病例出院時(shí)，需針對(duì)2個(gè)基因的檢測(cè)同時(shí)陰性，方可判定為陰性（附件2）。傳統(tǒng)RT-PCR因易出現(xiàn)污染，較少使用，但可以獲得病毒基因序列。發(fā)病后3天內(nèi)，患者血標(biāo)本中埃博拉病毒核酸檢出率低，檢測(cè)陰性不能排除埃博拉病毒感染，應(yīng)結(jié)合病例的流行病學(xué)史和臨床表現(xiàn)進(jìn)行綜合判斷。發(fā)病后310天血標(biāo)本病毒核酸檢出率高。2. 病毒抗原檢

4、測(cè)：用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)埃博拉病毒抗原。病毒抗原檢測(cè)陽性可確診（附件3）。發(fā)病后3天內(nèi)，血標(biāo)本中埃博拉病毒抗原檢出率低，檢測(cè)陰性不能排除埃博拉病毒感染，發(fā)病后310天血標(biāo)本病毒抗原檢出率高。（二）血清學(xué)檢測(cè)1. 血清特異性IgM抗體：采用捕獲法ELISA方法檢測(cè)。IgM抗體陽性可確診（附件4）。2.血清特異性IgG抗體：目前采用間接法ELISA檢測(cè)IgG抗體。單份血清埃博拉病毒IgG抗體陽性提示曾感染埃博拉病毒，雙份血清埃博拉病毒IgG抗體陽轉(zhuǎn)或恢復(fù)期滴度較急性期4倍或者以上增高者可確診（附件5）。（三）結(jié)果的報(bào)告、復(fù)核和反饋埃博拉病毒檢測(cè)機(jī)構(gòu)應(yīng)將所有陽性和部分陰性血清標(biāo)本送中國疾病預(yù)防控制中心病

5、毒病所進(jìn)行復(fù)核檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果應(yīng)及時(shí)反饋標(biāo)本送檢單位，并盡快上報(bào)上級(jí)主管部門（附表2）。五、生物安全按照病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例等相關(guān)規(guī)定要求，做好生物安全工作。（一）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)1凡涉及埃博拉病毒的分離、培養(yǎng)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，需在生物安全4級(jí)（BSL-4/ABSL-4）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。涉及未經(jīng)培養(yǎng)有感染性材料的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)，需在BSL-3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。血清學(xué)檢測(cè)應(yīng)在BSL-3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，且標(biāo)本應(yīng)首先601小時(shí)滅活，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作。核酸檢測(cè)時(shí),需在BSL-3實(shí)驗(yàn)室生物安全柜內(nèi)將核酸提取裂解液加入標(biāo)本中,充分裂解后，完成病毒RNA提取。對(duì)裝有病毒RNA的樣品管外表面進(jìn)行徹底消毒后，可在BSL

6、-3實(shí)驗(yàn)室以外進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)。2在進(jìn)行感染性材料操作時(shí)，每次標(biāo)本份數(shù)不宜過多，每份標(biāo)本量不宜過大。（二）生物安全防護(hù)在實(shí)驗(yàn)室處理感染性標(biāo)本時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)范在BSL-3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)穿著遮蓋全身的個(gè)人防護(hù)裝備，包括防滲漏防護(hù)服、N95或以上口罩、護(hù)目鏡、防護(hù)面具、防護(hù)手套等，當(dāng)需進(jìn)行感染性標(biāo)本離心、較大量標(biāo)本（10 mL）分裝處理等操作時(shí)應(yīng)使用正壓頭盔。實(shí)驗(yàn)人員有體表開放式傷口時(shí)不宜參加實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。涉及感染性材料的離心應(yīng)使用有密封蓋的離心桶或轉(zhuǎn)頭進(jìn)行標(biāo)本離心，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)打開離心轉(zhuǎn)頭放入或取出裝有標(biāo)本的離心管。在標(biāo)本的采集、包裝和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)等過程中所產(chǎn)生的醫(yī)療廢物，可能具有

7、生物危險(xiǎn)性，應(yīng)當(dāng)按照醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例和醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢物管理辦法等相關(guān)規(guī)定及時(shí)處理。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)埃博拉病毒相關(guān)感染性標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)發(fā)生意外時(shí)，應(yīng)及時(shí)啟動(dòng)相關(guān)應(yīng)急預(yù)案（附件6）。附件：附件1.埃博拉出血熱相關(guān)標(biāo)本采集、包裝、運(yùn)輸技術(shù)指南附件2埃博拉病毒核酸檢測(cè)方法附件3埃博拉病毒核蛋白抗原檢測(cè)方法（雙抗體夾心法ELISA）附件4埃博拉病毒IgM抗體檢測(cè)方法（抗體捕捉法ELISA）附件5埃博拉病毒IgG抗體檢測(cè)方法（間接法ELISA）附件6.埃博拉出血熱相關(guān)標(biāo)本實(shí)驗(yàn)活動(dòng)意外應(yīng)急預(yù)案附表：附表1埃博拉出血熱送檢材料一覽表附表2埃博拉出血熱實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果一覽表附件1埃博拉出血熱相關(guān)標(biāo)本采集、包裝、運(yùn)輸

8、技術(shù)指南埃博拉出血熱(Ebola hemorrhagic fever)是由埃博拉病毒(Ebola virus)引起的一種急性出血性傳染病。人主要通過接觸病人或感染動(dòng)物的體液、分泌物和排泄物等而感染，臨床表現(xiàn)主要為突起發(fā)熱、出血和多臟器損害，病死率可高達(dá)50%-90%。本病潛伏期為221天，通常為810天。2014年，在幾內(nèi)亞、利比里亞和塞拉利昂等西非國家發(fā)生歷史上最嚴(yán)重的埃博拉出血熱暴發(fā)疫情。為指導(dǎo)醫(yī)療機(jī)構(gòu)和疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)工作人員對(duì)埃博拉出血熱相關(guān)標(biāo)本的采集、包裝和運(yùn)輸工作，保證生物安全，特制定本指南。一、生物安全防護(hù)1、所有樣本的采集或處理應(yīng)遵守醫(yī)院感染管理規(guī)范和病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管

9、理?xiàng)l例等相關(guān)生物安全規(guī)定，在標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防的基礎(chǔ)上采用飛沫和接觸隔離的預(yù)防措施。2、采集樣本時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照BSL-3級(jí)實(shí)驗(yàn)室規(guī)定做好個(gè)人防護(hù)。應(yīng)穿戴醫(yī)用防護(hù)服、可遮蓋口鼻的醫(yī)用防護(hù)口罩(N95)、戴雙層防護(hù)手套、護(hù)目鏡、防護(hù)面具、鞋套或橡膠靴等。二、標(biāo)本采集（一）采集時(shí)間一般發(fā)病后2周內(nèi)，可在患者血標(biāo)本中檢測(cè)到病毒核酸和抗原，發(fā)病后310天的標(biāo)本核酸和抗原的檢出率高。在發(fā)病后數(shù)月內(nèi)，可在特定分泌物中持續(xù)檢出病毒。最早可從發(fā)病后2天的患者血清中檢出特異性IgM抗體，IgM抗體可維持?jǐn)?shù)月。發(fā)病后7-10天可檢出IgG抗體，康復(fù)者IgG抗體可維持?jǐn)?shù)年。發(fā)病10-14天以后的標(biāo)本病毒特異性抗體的檢出率高。因

10、此，應(yīng)根據(jù)不同檢測(cè)目的確定采樣時(shí)間，留觀病例、疑似病例診斷埃博拉病毒感染應(yīng)采集發(fā)病3天以后的血標(biāo)本。（二）標(biāo)本采集1. 采血場所除了病人常規(guī)護(hù)理的材料外，應(yīng)備有手套、防護(hù)服和防護(hù)面具等，同時(shí)備有洗手的設(shè)施和裝有消毒液的桶。2.采集埃博拉出血熱患者血樣會(huì)給醫(yī)護(hù)人員帶來風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)由經(jīng)過生物安全防護(hù)培訓(xùn)的人員執(zhí)行，采血時(shí)應(yīng)2人在場。3.采用分離膠無菌真空促凝管采集靜脈血，每管3mL，采集后用封口膜封閉管口，標(biāo)記清楚后放入自封袋或50mL離心管內(nèi)，并在自封袋或離心管外表面再清楚標(biāo)記，4保存，填寫標(biāo)本采集登記表。4、留觀病例和疑似病例應(yīng)在發(fā)病3天后，采集靜脈血2管，送指定的具有埃博拉出血熱檢測(cè)資

11、質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行埃博拉病毒檢測(cè)。5、確診病例采集恢復(fù)期血標(biāo)本，包括并不限于出院前標(biāo)本2份，每份2管，采集時(shí)間間隔不少于48小時(shí)，送國家疾控中心病毒病所進(jìn)行埃博拉病毒檢測(cè)，用于指導(dǎo)病例管理。四、標(biāo)本包裝、運(yùn)輸（一）所有疑似埃博拉病毒相關(guān)感染性標(biāo)本的運(yùn)輸應(yīng)按照病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例和人間傳染的病原微生物名錄等相關(guān)規(guī)定，采取A類包裝，符合UN2814要求。按照三重包裝系統(tǒng)包裝：第一層包裝為自封袋或50mL離心管；第二層包裝為防水、防漏的安全殼容器；第三層為運(yùn)輸包裝組成。樣本應(yīng)用吸水紙等包裹，固定在防漏自封袋或離心管內(nèi)。然后放置在堅(jiān)固、防水、防漏的第二層安全殼容器中，用吸水紙等填充物將內(nèi)有標(biāo)本

12、的自封袋或離心管固定好，然后裝入第三層包裝。安全殼容器和外包裝須與IATA危險(xiǎn)物品條例包裝制度650相符合。（二）填寫標(biāo)本說明兩份，寫明標(biāo)本的詳細(xì)情況、運(yùn)送者及接收者地址，將標(biāo)本說明密封在塑料袋里，用膠布分別粘在外層包裝的里面和外面并留檔以便追蹤，方便實(shí)驗(yàn)室操作人員查對(duì)標(biāo)本數(shù)量。（三）樣本運(yùn)輸之前，應(yīng)按相關(guān)生物安全規(guī)定和樣本接收單位生物安全管理部門聯(lián)系，辦理相關(guān)手續(xù)，運(yùn)送日期確定后立即將運(yùn)送的時(shí)間和運(yùn)輸方式通知接收單位。五、樣本保存和銷毀（一）埃博拉病毒陽性血標(biāo)本，應(yīng)根據(jù)病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例等相關(guān)生物安全規(guī)定保存，實(shí)行“雙人雙鎖”和取樣“審批”管理。（二）埃博拉病毒陰性血標(biāo)本，應(yīng)在

13、排除埃博拉病毒感染后，轉(zhuǎn)入其他血清庫保存或銷毀。（三）所有感染性血清銷毀時(shí)，均應(yīng)在在生物安全柜內(nèi)待其自然融化，60 1小時(shí)滅活后，在生物安全柜內(nèi)，打開樣本管，置于有效消毒劑內(nèi)浸泡，然后高壓滅活。（四）所有銷毀樣本均應(yīng)在相應(yīng)數(shù)據(jù)庫清單內(nèi)標(biāo)明，并記錄銷毀的時(shí)間和操作人，陰性樣本銷毀記錄應(yīng)保存1年以上，陽性樣本的銷毀記錄應(yīng)保存5年以上。附件2埃博拉病毒核酸檢測(cè)方法1目的埃博拉病毒核酸的提取及PCR檢測(cè)。2 適用范圍適用于檢測(cè)血標(biāo)本中埃博拉病毒核酸。3 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備核對(duì)被檢樣品，包括患者的姓名、編號(hào)及檢測(cè)項(xiàng)目等。4檢測(cè)儀器設(shè)備和材料實(shí)時(shí)定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)儀，常規(guī)核酸擴(kuò)增檢測(cè)儀

14、，RNA提取試劑盒，一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑盒，一步法實(shí)時(shí)定量RT-PCR擴(kuò)增試劑盒等。5實(shí)驗(yàn)步驟5.1實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備5.1.1提取埃博拉病毒RNA要求在BSL-3級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)操作。5.1.2進(jìn)入實(shí)驗(yàn)場所之前，要事先準(zhǔn)備好所需試劑、樣品。預(yù)約實(shí)驗(yàn)場所。5.2 RNA的提取使用QIAampViral RNA Mini試劑盒提取血清標(biāo)本中病毒RNA（使用其他試劑盒或方法提取病毒RNA的應(yīng)參照相應(yīng)試劑盒說明書或?qū)嶒?yàn)室操作手冊(cè)）。5.2.1吸取560l包含載體RNA的AVL緩沖液(核酸提取裂解液)至1.5ml的離心管中。5.2.2向上述的液體中加入140l樣品，蓋好蓋后，輕輕的上下顛倒混勻10次，

15、室溫孵育10分鐘，簡單離心使離心管頂端液體落到底部。5.2.3在樣品中加入560l  96100的乙醇，輕輕的上下顛倒混勻10次，再簡單離心。5.2.4小心將630l液體加入QIAamp小柱中，蓋好蓋，8000rpm/min離心1min,棄去收集管，將柱子置于一新的2ml收集管上。5.2.5打開QIAamp小柱的蓋子，重復(fù)步驟5.2.4，直至完成全部樣品離心。5.2.6打開蓋子，向柱中加入500l AW1 緩沖液，蓋好蓋，8000rpm/min離心1min，棄去收集管，將柱子置于一新的2ml收集管上。5.2.7打開蓋子，加入500lAW2 緩沖液，蓋好蓋

16、，14000rpm/min離心3min。5.2.8將柱子置于一新的2ml收集管上，空離1min。5.2.9將柱子置于一新的1.5ml離心管上，加入50l AVE洗脫緩沖液，室溫孵育1min,離心8000rpm/min 1min。離心液即為病毒RNA，立即檢測(cè)或-70以下保存。5.3實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)埃博拉病毒核酸為增加埃博拉病毒核酸檢測(cè)的敏感性和特異性，在用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 方法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，應(yīng)采用針對(duì)埃博拉病毒2個(gè)不同的基因同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，可采用并行的單重PCR或多重PCR方法進(jìn)行檢測(cè)。5.3.1單重PCR參考引物與探針引物/探針序列熒光標(biāo)記檢測(cè)埃博拉病毒核蛋白的引物和探針

17、ZEBONP-FCGCCGAGTCTCACTGAATCTGZEBONP-RAGTTGGCAAATTTCTTCAAGATTGTZEBONP-PCGGCAAAGAGTCATCCCAGTGTATCAAGTAFAM/BHQ-1檢測(cè)埃博拉病毒糖蛋白的引物和探針ZEBOGP-FTGGGCTGAAAAYTGCTACAATCZEBOGP-RCTTTGTGMACATASCGGCACZEBOGP-PCTACCAGCAGCGCCAGACGGFAM/BHQ-1 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR擴(kuò)增實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR擴(kuò)增反應(yīng)配置體系：RNA模板5µl，酶（25x）1µl，緩沖液12.5

18、81;l，引物（10µM）各1µl，探針（10µM）0.5µl，加水至總體積25µl。推薦反應(yīng)條件為5030min，9510min，9515s、6045s反應(yīng)40個(gè)循環(huán)。 結(jié)果判斷以定量熒光PCR反應(yīng)的前315個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)作為本底信號(hào)，以本底信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)差的10倍作為熒光閾值，標(biāo)本擴(kuò)增產(chǎn)生的熒光信號(hào)達(dá)到熒光閾值時(shí)所對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù)為循環(huán)閾值（Ct值），以Ct<35熒光信號(hào)數(shù)據(jù)線性化處理后對(duì)應(yīng)循環(huán)數(shù)生成的曲線圖成“S”形的標(biāo)本，可判斷為相應(yīng)的埃博拉病毒核酸檢測(cè)陽性。 意義熒光定量PCR是一種靈敏、特異、低污染的病毒核酸檢測(cè)方

19、法，可以檢測(cè)標(biāo)本中的埃博拉病毒。病例篩查時(shí)2個(gè)檢測(cè)基因中，任一基因檢測(cè)陽性均具有確診意義。首例病例確診應(yīng)按照國衛(wèi)發(fā)明電201448號(hào)埃博拉出血熱病例診斷程序進(jìn)行。在病例管理時(shí)，需2個(gè)基因同時(shí)檢測(cè)陰性，方可判定為陰性。5.4一步法常規(guī)RT-PCR方法檢測(cè)埃博拉病毒核酸如果采用常規(guī)RT-PCR的方法檢測(cè)埃博拉病毒核酸，建議針對(duì)病毒基因組2個(gè)不同的基因片段同時(shí)進(jìn)行檢測(cè),并完成基因序列分析。 參考引物序列引物序列片段大小  檢測(cè)埃博拉病毒糖蛋白的引物ZEBOV-GPFTGGGCTGAAAACTGCTACAATC ZEBOV-GPRTTTTAGTTTCCCAGAA

20、GGCCCA570bp 檢測(cè)埃博拉病毒RNA聚合酶的引物 ZEBOV-LF1ATCGGAATTTTTCTTTCTCATT ZEBOV-LR1ATGTGGTGGGTTATAATAATCACTGACATG414bp ZEBOV-LF2GTCAAAGCATTTCCTAGCAACATGATGG ZEBOV-LR2ATAATAATCACTCACATGCATATAACA282bp 5.4.2 PCR擴(kuò)增采用參考引物對(duì)埃博拉病毒不同檢測(cè)靶標(biāo)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。首先根據(jù)所采用的試劑盒說明書推薦反應(yīng)條件，將病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。PCR擴(kuò)增參考反應(yīng)條件

21、為94預(yù)變性2min，然后  94變性30s，55退火30s， 72延伸1min，反應(yīng)40個(gè)循環(huán)，最后72延伸10min。如為套式PCR則開展第二輪擴(kuò)增。第二輪分型PCR擴(kuò)增體系配置采用正向引物ZEBOV-LF2與反向引物ZEBOV-LR2。推薦反應(yīng)條件為 94預(yù)變性2min，然后 94變性30s，55退火30s， 72延伸1min，反應(yīng)30個(gè)循環(huán)，最后72延伸10min。5.4.3 1.5%濃度瓊脂糖電泳分析。5.4.4 結(jié)果判讀a陽性：電泳顯示相應(yīng)大小DNA片段。b陰性：無特異性核酸片段擴(kuò)增。5.4.5 意義陽性結(jié)果可以初步判斷埃

22、博拉病毒感染,排除交叉污染。獲得病毒特異性基因序列具有確診意義。6清場與消毒6.1 操作結(jié)束后，及時(shí)清理生物安全柜內(nèi)的物品，用0.5%次氯酸鈉溶液和75%乙醇擦試外表面后，移出生物安全柜放入冰箱中。6.2 未使用完的感染性生物材料銷毀或放入BSL-3級(jí)實(shí)驗(yàn)室70冰箱，并如實(shí)填寫操作和處理記錄。6.3 實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)的污染材料高壓處理（121高壓20min）后，再進(jìn)行集中高壓處理。附件3埃博拉病毒核蛋白抗原檢測(cè)方法（雙抗體夾心法ELISA）1 目的雙抗體夾心法ELISA檢測(cè)血清中埃博拉病毒核蛋白抗原。2 適用范圍適用于人血清中埃博拉病毒核蛋白抗原的檢測(cè)

23、。3 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備3.1 核對(duì)被檢樣品，包括患者的姓名、編號(hào)及檢測(cè)項(xiàng)目等。3.2檢測(cè)前將60 1小時(shí)滅活的待測(cè)樣品置于BSL-3實(shí)驗(yàn)室生物安全柜內(nèi)。3.3在洗扳機(jī)廢液收集桶內(nèi)加入10%有效氯的消毒劑，加入量為廢液桶總體積的5% 。4 檢測(cè)項(xiàng)目本方法檢測(cè)項(xiàng)目為檢測(cè)血清中埃博拉病毒核蛋白抗原。5 檢測(cè)儀器設(shè)備和材料加樣器、溫箱、洗板機(jī)、含波長450nm的酶標(biāo)儀、埃博拉病毒抗原檢測(cè)試劑盒（雙抗體夾心法ELISA）。6操作步驟（具體請(qǐng)參照試劑盒說明書開展）6.1 將試劑盒在冰箱中取出，放置室溫平衡30分鐘，使用前將試劑輕輕震蕩混勻。6

24、.2 配液：將新鮮配制的注入洗板機(jī)的洗液桶內(nèi)。6.3 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔板編號(hào)，每板設(shè)陰性對(duì)照3孔，模擬陽性對(duì)照2孔和空白對(duì)照1孔。6.4 加稀釋液：每孔加稀釋液20µL，空白孔除外。6.5 加樣：分別在相應(yīng)孔加入待測(cè)樣品或陰陽性對(duì)照各100µL，空白孔除外。6.6 溫育：用封板膜封板后，置37溫育60分鐘。6.7 加酶：每孔加酶標(biāo)試劑50µL，空白孔除外，輕輕震蕩混勻。6.8 溫育：用封板膜封板后，置37溫育30分鐘。6.9 洗板：小心揭掉封板膜，用洗板機(jī)洗滌5遍。6.10顯色：每

25、孔加入顯色劑A、B液各50µL，輕輕震蕩混勻，37避光顯色30分鐘。6.11測(cè)定：每孔加終止液50µL，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。設(shè)定酶標(biāo)儀波長于450nm處（建議使用雙波長450nm/600-650nm檢測(cè)），用空白孔調(diào)零后測(cè)定各孔A值。6.12清洗、消毒洗扳機(jī)：按洗扳機(jī)內(nèi)置程序分別采用蒸餾水、乙醇和75%乙醇進(jìn)行清洗消毒，30分鐘后，再用蒸餾水清洗。7結(jié)果判定7.1 臨界值計(jì)算：臨界值=0.10+陰性對(duì)照孔A值均值（陰性對(duì)照孔A值低于0.05者以0.05計(jì)算）。7.2 陰性對(duì)照的正常值范圍：陰性對(duì)照孔A0.1。7.3 陽性對(duì)照的正常值范圍：A0.

26、50。7.4陽性判定：樣品A值臨界值者為埃博拉病毒抗原陽性。7.5陰性判定：樣品A值臨界值者為埃博拉病毒抗原陰性。8意義陽性結(jié)果可以判斷為埃博拉病毒感染，但陰性結(jié)果并不排除埃博拉病毒感染的可能，應(yīng)結(jié)合病例的流行病學(xué)史和臨床表現(xiàn)進(jìn)行綜合判斷。9 清場與消毒9.1 操作結(jié)束后，及時(shí)清理生物安全柜內(nèi)的物品，用0.5%次氯酸鈉溶液和75%乙醇擦試外表面后，移出生物安全柜放入冰箱中。9.2 將未使用完的感染性生物材料銷毀或放入BSL-3級(jí)實(shí)驗(yàn)室70冰箱，并如實(shí)填寫操作和處理記錄。9.3 將實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)的污染材料高壓處理（121高壓20min）后，再進(jìn)行集中高壓處理。附

27、件4埃博拉病毒IgM抗體檢測(cè)（抗體捕捉法ELISA）1 目的檢測(cè)埃博拉病毒特異性IgM抗體。2 適用范圍適用于人血清中埃博拉病毒特異性IgM抗體的檢測(cè)。3 樣品接收和準(zhǔn)備3.1核對(duì)被檢樣品，包括患者的姓名、編號(hào)及檢測(cè)項(xiàng)目等。3.2檢測(cè)前應(yīng)將60 1小時(shí)熱滅活的待測(cè)樣品置于BSL-3實(shí)驗(yàn)室生物安全柜內(nèi)。3.3在洗扳機(jī)廢液收集桶內(nèi)加入10%有效氯的消毒劑，加入量為廢液桶總體積的5% 。4 檢測(cè)項(xiàng)目本方法檢測(cè)項(xiàng)目為檢測(cè)血清中病毒特異性IgM抗體。5 檢測(cè)儀器設(shè)備和材料加樣器、溫箱、洗板機(jī)、含波長450nm的酶標(biāo)儀、埃博拉病毒IgM

28、抗體檢測(cè)試劑盒等。6檢測(cè)步驟（具體請(qǐng)參照試劑盒說明書開展）：6.1 將試劑盒在冰箱中取出，放置室溫平衡30分鐘，使用前將試劑輕輕震蕩混勻。6.2 配液：將新鮮配制的注入洗板機(jī)的洗液桶內(nèi)。6.3加稀釋液：每孔加入樣品稀釋液100l，空白及陰陽性對(duì)照孔除外。6.4加樣：在相應(yīng)孔中加入待測(cè)樣品10µl，輕輕振蕩混勻。陰、陽性對(duì)照加100µl。6.5溫育：用封板膜封板后，置37溫育30分鐘。6.6洗板：小心揭掉封板膜，用洗板機(jī)洗滌5遍。6.7加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100l，空白孔除外。6.8溫育：操作同6.5。6.9洗板：操作同6.6。6.10顯色：每孔加入顯色

29、劑A、B液各50µl，輕輕振蕩混勻，37避光顯色15分鐘。6.11測(cè)定：每孔加終止液50µl，輕輕振蕩混勻，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。設(shè)定酶標(biāo)儀波長于450nm處，用空白孔調(diào)零點(diǎn)后測(cè)定各孔A值。6.12清洗、消毒洗扳機(jī)：按洗扳機(jī)內(nèi)置程序分別采用蒸餾水、乙醇和75%乙醇進(jìn)行清洗消毒，30分鐘后，在用蒸餾水清洗。7結(jié)果判定7.1 臨界值計(jì)算：臨界值=0.10+陰性對(duì)照孔A值均值（陰性對(duì)照孔A值低于0.05者以0.05計(jì)算）。7.2 陰性對(duì)照的正常值范圍：陰性對(duì)照孔A0.1。7.3 陽性對(duì)照的正常值范圍：A0.50。7.4陽性判定：樣品A值臨界值者為埃博拉

30、病毒IgM抗體陽性。7.5陰性判定：樣品A值臨界值者為埃博拉病毒IgM抗體陰性。8意義陽性結(jié)果可以判斷為埃博拉病毒感染，但陰性結(jié)果并不排除埃博拉病毒感染的可能，應(yīng)結(jié)合病例的流行病學(xué)史和臨床表現(xiàn)進(jìn)行綜合判斷。9 清場與消毒9.1 操作結(jié)束后，及時(shí)清理生物安全柜內(nèi)的物品，用0.5%次氯酸鈉溶液和75%乙醇擦試外表面后，移出生物安全柜放入冰箱中。9.2 未使用完的感染性生物材料銷毀或放入BSL-3級(jí)實(shí)驗(yàn)室70或以下冰箱，并如實(shí)填寫操作和處理記錄。9.3 將實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)的污染材料高壓處理（121高壓20min）后，再集中高壓處理。附件5埃博拉病毒IgG抗體檢測(cè)方法（

31、間接法ELISA）1 目的檢測(cè)埃博拉病毒特異性IgG抗體。2 適用范圍適用于人血清中埃博拉病毒特異性IgG抗體的檢測(cè)。3 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備3.1核對(duì)被檢樣品，包括患者的姓名、編號(hào)及檢測(cè)項(xiàng)目等。3.2檢測(cè)前應(yīng)將60 1小時(shí)熱滅活的待測(cè)樣品置于BSL-3實(shí)驗(yàn)室生物安全柜內(nèi)。3.3在洗扳機(jī)廢液收集桶內(nèi)加入10%有效氯的消毒劑，加入量為廢液桶總體積的5% 。4 檢測(cè)項(xiàng)目本方法檢測(cè)項(xiàng)目為檢測(cè)血清中埃博拉病毒特異性IgG抗體。5 檢測(cè)儀器設(shè)備和材料加樣器、溫箱、洗板機(jī)、含波長450nm的酶標(biāo)儀、埃博拉病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒等。6 

32、檢測(cè)步驟（具體請(qǐng)參照試劑盒說明書開展）6.1 將試劑盒在冰箱中取出，放置室溫平衡30分鐘，使用前將試劑輕輕震蕩混勻。6.2 配液：將新鮮配制的注入洗板機(jī)的洗液桶內(nèi)。6.3加稀釋液：每孔加入樣品稀釋液100l，空白孔除外。6.4加樣：在相應(yīng)孔中加入待測(cè)樣品或陰、陽性對(duì)照10µl，輕輕振蕩混勻。6.5溫育：用封板膜封板后，置37溫育30分鐘。6.6洗板：小心揭掉封板膜，用洗板機(jī)洗滌5遍。6.7加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100l，空白孔除外。6.8溫育：操作同6.5。6.9洗板：操作同6.6。6.10顯色：每孔加入顯色劑A、B液各50µl，輕輕振蕩混勻，37避光顯

33、色15分鐘。6.11測(cè)定：每孔加終止液50µl，輕輕振蕩混勻，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。設(shè)定酶標(biāo)儀波長于450nm處，用空白孔調(diào)零點(diǎn)后測(cè)定各孔A值。6.12清洗、消毒洗扳機(jī)：按洗扳機(jī)內(nèi)置程序分別采用蒸餾水、乙醇和75%乙醇進(jìn)行清洗消毒，30分鐘后，在用蒸餾水清洗。7結(jié)果判定7.1 臨界值計(jì)算：臨界值=0.10+陰性對(duì)照孔A值均值（陰性對(duì)照孔A值低于0.05者以0.05計(jì)算）。7.2 陰性對(duì)照的正常值范圍：陰性對(duì)照孔A0.1。7.3 陽性對(duì)照的正常值范圍：A0.50。7.4陽性判定：樣品A值臨界值者為埃博拉病毒IgG抗體陽性。7.5陰性判定：樣品A值臨界值者為埃

34、博拉病毒IgG抗體陰性。8意義陽性結(jié)果，表明曾受到埃博拉病毒感染；雙份標(biāo)本檢測(cè)，恢復(fù)期血清抗體陽轉(zhuǎn)，或抗體滴度比急性期抗體滴度有4倍及以上升高可判定埃博拉病毒感染。9 清場與消毒9.1 操作結(jié)束后，及時(shí)清理生物安全柜內(nèi)的物品，用0.5%次氯酸鈉溶液和75%乙醇擦試外表面后，移出生物安全柜放入冰箱中。9.2 未使用完的感染性生物材料銷毀或放入BSL-3級(jí)實(shí)驗(yàn)室70及以下冰箱，并如實(shí)填寫操作和處理記錄。9.3 將實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)的污染材料高壓處理（121高壓20min）后，再集中高壓處理。附件6埃博拉出血熱相關(guān)標(biāo)本實(shí)驗(yàn)活動(dòng)意外應(yīng)急預(yù)案1 總則1.1目的為有

35、效預(yù)防、及時(shí)發(fā)現(xiàn)和控制發(fā)生在實(shí)驗(yàn)室范圍內(nèi)的埃博拉病毒相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)意外，最大限度的減輕意外事件對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員和環(huán)境造成的危害，指導(dǎo)和規(guī)范生物安全工作，保障實(shí)驗(yàn)室工作人員身體健康和環(huán)境安全，保障埃博拉病毒實(shí)驗(yàn)室相關(guān)檢測(cè)活動(dòng)的順利進(jìn)行，特制定本預(yù)案。本預(yù)案為發(fā)生實(shí)驗(yàn)室意外時(shí)的一般處置辦法，各單位可根據(jù)各自生物危害評(píng)估方案確定處置措施。1.2編制依據(jù)中華人民共和國傳染病防治法。突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急條例。實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)（第三版）。1.3原則以“安全第一、預(yù)防為主”為應(yīng)急處置原則。1.4適用范圍發(fā)生以下緊急情況時(shí)啟動(dòng)本預(yù)案1.4.1埃博拉病毒的實(shí)驗(yàn)室污染事件。1.4.2工作人員發(fā)生埃博拉病毒實(shí)驗(yàn)室暴露。

36、1.4.3埃博拉病毒被泄露出實(shí)驗(yàn)室。1.4.4由于停電、火災(zāi)等不可預(yù)測(cè)因素所引起的實(shí)驗(yàn)室其他污染事件。2  應(yīng)急組織體系及職責(zé)2.1 應(yīng)急指揮機(jī)構(gòu)在本單位生物安全委員會(huì)或相應(yīng)部門的統(tǒng)一領(lǐng)導(dǎo)下，各行政職能部門配合下，生物安全管理部門負(fù)責(zé)組織、協(xié)調(diào)實(shí)驗(yàn)室意外突發(fā)事件的應(yīng)急處理工作，并制定應(yīng)對(duì)意外事故的應(yīng)急預(yù)案。2.2實(shí)驗(yàn)室管理部門單位實(shí)驗(yàn)室管理部門應(yīng)制定本部門的應(yīng)對(duì)意外事故處理的應(yīng)急預(yù)案，并開展生物安全培訓(xùn)，組織實(shí)驗(yàn)室相關(guān)人員進(jìn)行實(shí)地演練。2.3實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人應(yīng)對(duì)急救用品進(jìn)行檢查和補(bǔ)充，組織實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部人員進(jìn)行生物安全培訓(xùn)與考核。3預(yù)防和預(yù)警機(jī)制3.1預(yù)防3.

37、1.1加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)范化操作管理，按實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求（GB19489-2008)做出明確規(guī)定。3.1.2建立實(shí)驗(yàn)室應(yīng)急物資和設(shè)備的儲(chǔ)備，配置個(gè)人防護(hù)、消毒藥品和醫(yī)療救援藥品，定點(diǎn)存放和定人定期維護(hù)保養(yǎng)。3.1.3埃博拉病毒相關(guān)感染性材料需登記使用，提高警惕，加強(qiáng)安全保衛(wèi)，防止埃博拉病毒相關(guān)感染材料失竊。3.1.4建立實(shí)驗(yàn)室工作人員健康檔案，定期體檢。發(fā)現(xiàn)與實(shí)驗(yàn)室生物安全有關(guān)的人員感染或傷害應(yīng)立即報(bào)告。3.1.5加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員的生物安全業(yè)務(wù)培訓(xùn)和演練。3.2預(yù)警3.2.1建立有效的預(yù)警機(jī)制，為埃博拉病毒相關(guān)感染性材料建立檔案和使用記錄，發(fā)現(xiàn)失竊，立即報(bào)告（見處理程序）。3.2.2

38、完善實(shí)驗(yàn)室人員健康檔案，發(fā)現(xiàn)與實(shí)驗(yàn)室生物安全有關(guān)的人員感染或傷害立即報(bào)告。3.2.3定期開展自查，及時(shí)發(fā)現(xiàn)各類安全隱患，發(fā)出預(yù)警通報(bào)。4.突發(fā)事件的報(bào)告及應(yīng)急響應(yīng)4.1報(bào)告人4.1.1實(shí)驗(yàn)室工作人員為法定報(bào)告人。4.1.2除實(shí)驗(yàn)室工作人員外，任何單位和個(gè)人如發(fā)現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室感染事故均可報(bào)告。4.1.3任何單位和個(gè)人不得隱瞞、緩報(bào)、謊報(bào)、或者授意他人隱瞞、緩報(bào)、謊報(bào)。4.2報(bào)告程序和方式4.2.1報(bào)告程序：發(fā)生實(shí)驗(yàn)室意外事故時(shí)，在妥善處理的同時(shí)，向?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人口頭報(bào)告，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人應(yīng)立即向單位生物安全管理部門和負(fù)責(zé)人報(bào)告，并如實(shí)填寫事故記錄和事故處理記錄。單位生物安全管理部門核實(shí)事故后2小時(shí)內(nèi)向上級(jí)

39、衛(wèi)生主管部門進(jìn)行匯報(bào)，對(duì)事故做出危險(xiǎn)程度評(píng)估，對(duì)可能暴露人員進(jìn)行評(píng)估和隨訪。積極配合有關(guān)專業(yè)技術(shù)部門的調(diào)查和處置。事故處理后，生物安全管理部門應(yīng)及時(shí)對(duì)事故的經(jīng)過以及事故的原因和責(zé)任進(jìn)行實(shí)事求是的分析，找出事故的根源，總結(jié)教訓(xùn)寫出書面總結(jié)，吸取經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)。4.2.2報(bào)告方式發(fā)生實(shí)驗(yàn)室意外事故后，實(shí)驗(yàn)室所在單位負(fù)責(zé)人應(yīng)填報(bào)實(shí)驗(yàn)室意外和事故登記表，并以最快的通訊方式2小時(shí)內(nèi)向上級(jí)衛(wèi)生行政部門報(bào)告。4.3突發(fā)事件應(yīng)急響應(yīng)。4.3.1立即停止發(fā)生意外事故實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)，妥善處理后退出實(shí)驗(yàn)室。4.3.2立即組織專家進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行調(diào)查、評(píng)估。4.3.3對(duì)可能的污染情況進(jìn)行評(píng)估。4.3.4如發(fā)生實(shí)驗(yàn)室感染事故

40、，立即將被感染人員送定點(diǎn)醫(yī)院進(jìn)行醫(yī)療觀察或預(yù)防性治療，對(duì)可能受到感染的人員進(jìn)行評(píng)估和隨訪；暫停該實(shí)驗(yàn)室所有實(shí)驗(yàn)活動(dòng)，開展調(diào)查評(píng)估，對(duì)所有實(shí)驗(yàn)室人員進(jìn)行生物安全培訓(xùn)，完善生物安全體系文件，待潛在危險(xiǎn)排除后，方可重啟實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。5應(yīng)急處理程序5.1由于人員活動(dòng)造成的意外事故處理方法BSL-3實(shí)驗(yàn)室意外事故發(fā)生后，應(yīng)立即報(bào)告監(jiān)控室，由監(jiān)控室通知生物安全員，安全員對(duì)事件初步評(píng)估判斷后，立即報(bào)告實(shí)驗(yàn)室主任，實(shí)驗(yàn)室主任了解情況后報(bào)告單位生物安全委員會(huì)或相應(yīng)部門，如需要，打電話120請(qǐng)求急救，送定點(diǎn)醫(yī)院處理。5.1.1感染性銳器意外刺傷或擦傷a.發(fā)生具有潛在感染性的銳器刺傷、切割傷或擦傷等情況，被視為有極大危

41、險(xiǎn)。b.實(shí)驗(yàn)人員立即停止工作，同行操作者及時(shí)向監(jiān)控室報(bào)告。監(jiān)控人員接報(bào)后，應(yīng)立即報(bào)告實(shí)驗(yàn)室主任和單位負(fù)責(zé)人，實(shí)驗(yàn)室主任評(píng)估后，決定是否呼叫120請(qǐng)求急救或采取其他便捷方式，送定點(diǎn)醫(yī)院處理，并做好相應(yīng)準(zhǔn)備。c.受傷實(shí)驗(yàn)人員脫掉最外層手套，在同操作者的配合下用生理鹽水沖洗傷口。d.使用大量流水盡可能沖掉損傷部位的血液，從急救箱取出急救藥品再行包扎。e.傷口進(jìn)行適當(dāng)?shù)陌螅谕胁僮髡叩呐浜舷?，按照生物安全三?jí)實(shí)驗(yàn)室安全手冊(cè)的程序退出實(shí)驗(yàn)室。f.由 120急救車或其他安全便捷交通方式，送定點(diǎn)醫(yī)院急救室，告知醫(yī)生所受傷的原因及可能污染埃博拉病毒，根據(jù)情況進(jìn)行醫(yī)學(xué)處理，并留院觀察。g.住院后

42、，和同行的另一名操作者一起，記錄受傷原因、可能接觸的病原微生物，并保留完整的醫(yī)療記錄。5.2在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)操作人員突然暈倒的急救5.2.1另一名操作人員立即停止工作。5.2.2向監(jiān)控室報(bào)告，請(qǐng)求人員進(jìn)入第二緩沖間做好準(zhǔn)備工作，外部人員做好救助準(zhǔn)備。5.2.3同行操作人員更換一副新手套，將暈倒的人員扶到坐的姿勢(shì)，讓暈倒的人員的背和頭靠在救護(hù)者的胸前，救護(hù)者的雙手和胳膊架在暈倒的人的腋下，在保證無障礙的情況下，將暈倒的人拖到第二緩沖間，脫掉防護(hù)眼罩、口罩，盡可能脫掉防護(hù)服（包括暈倒的人和自己的防護(hù)服）。外邊進(jìn)入人員幫助將暈倒的人搬出實(shí)驗(yàn)室。5.3感染性樣品外溢到皮膚粘膜5.3.1如感染性材料外溢到皮膚

43、，視為很大危險(xiǎn)，應(yīng)立即停止工作，在另一操作者的配合下對(duì)受溢灑的皮膚，采用75%的酒精進(jìn)行消毒處理，然后用大量清水或肥皂水徹底沖洗。5.3.2處理后安全撤離，密切觀察3周。5.3.3填寫意外事故報(bào)告，并報(bào)相關(guān)負(fù)責(zé)人。5.4感染性物質(zhì)濺入眼睛：5.4.1眼睛濺入感染性液體，在另一操作者的配合下，用洗眼器進(jìn)行沖洗，然后用生理鹽水或清水沖洗，連續(xù)沖洗（注意動(dòng)作不要過猛，以免損傷眼睛）。5.4.2在另一操作者的配合下，按照生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室安全手冊(cè)路線退出實(shí)驗(yàn)室。5.4.3撥打120講明情況，送定點(diǎn)醫(yī)院留院觀察。5.4.4填寫意外事故報(bào)告，并報(bào)相關(guān)負(fù)責(zé)人。5.5衣物污染5.5.1當(dāng)感染性材料濺灑在防護(hù)服

44、時(shí)，應(yīng)停止實(shí)驗(yàn)活動(dòng)，由另一操作人員立即對(duì)污染人員衣物及所處區(qū)域噴灑消毒液，30分鐘后，按照BSL-3實(shí)驗(yàn)室退出程序，兩人同時(shí)退出實(shí)驗(yàn)室核心區(qū)。5.5.2在緩沖間內(nèi)被污染人員脫掉防護(hù)服，防止感染性材料觸及皮膚及進(jìn)一步擴(kuò)散。5.5.3撤離實(shí)驗(yàn)室，設(shè)立警示標(biāo)記。5.5.4如果皮膚接觸污染物，立即用自來水沖洗、75%酒精擦拭、沖洗消毒。5.5.5徹底淋浴，出防護(hù)區(qū)。5.5.6由其他操作人員，穿好個(gè)人防護(hù)裝備，進(jìn)入試驗(yàn)區(qū)，處理污染區(qū)域，將已污染的防護(hù)服裝入垃圾袋中進(jìn)行高壓滅菌處理。5.5.7用含氯消毒劑消毒發(fā)生污染的區(qū)域，具體方法見本章節(jié)5.7，用含過氧乙酸或過氧化氫的消毒劑進(jìn)行空間噴灑消毒。5.5.8

45、相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)密切觀察3周；如果皮膚接觸到感染性物質(zhì)，按照5.3處理。5.6外層手套撕破、損壞、被污染或需要更換5.6.1在操作埃博拉病毒相關(guān)感染性材料時(shí)應(yīng)該佩戴雙層手套。在操作過程中，外層手套被污染時(shí)應(yīng)立即用含1%有效氯的次氯酸鈉紙巾擦拭手套并脫下后丟棄在生物安全柜中的高壓滅菌袋中，并立即戴上新手套繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。5.6.2手套的更換：在生物安全實(shí)驗(yàn)室中使用一次性手套，不可再次使用。手套用后進(jìn)行高壓滅菌消毒然后丟棄。工作人員在完成感染性材料實(shí)驗(yàn)離開生物安全柜之前應(yīng)該脫去外層手套放入生物安全柜內(nèi)的高壓滅菌袋中。然后更換新手套，以避免污染其他物品。5.6.3脫手套的過程：用一手捏起另一近手腕部處的手套外緣；將手套從手上脫下并將手套外表面翻轉(zhuǎn)入內(nèi)；用戴著手套的手拿住該手套；用脫去手套的手指插入另一手套腕部處內(nèi)面；脫下該手套使其內(nèi)面向外并形成一個(gè)由兩個(gè)手套組成的袋狀；丟棄在高溫消毒袋中并進(jìn)行消毒處理。  脫下外層手套，丟棄在高壓滅菌袋中?！咀⒁狻恳陨喜僮饕h(yuǎn)離面部。5.7感染性材料